体内表达细菌毒力基因分析

面对复杂的宿主环境 ,细菌在体内是通过调节表达不同的毒力基因建立并延续其感染过程的。目前已建立起多种方法去分析鉴定体内特异表达的细菌毒力基因。其中体内表达技术的应用为鉴定细菌毒力基因以及揭示细菌致病机理开辟了有力的途径。本文对此作一综述。     

肺炎链球菌触发肺Ⅱ型上皮细胞微丝肌动蛋白重排的钙信号转导机制

目的 通过体外实验研究肺炎链球菌(S.pn)是否可通过肺型上皮细胞(A549)钙信号转导途径触发微丝肌动蛋白(F-actin)细胞骨架重排,进而导致S.pn对A549细胞的侵袭。方法 采用F-actin特异性FITC-phalloidin荧光染料,观察S.pn作用A549细胞前后F-actin细胞骨架重排情况,以重排百分率表示;用F-actin细胞骨架重排抑制剂细胞松弛素D预处理A549细胞,观察S.pn对A549细胞的侵袭;使用Ca²⁺信号转导抑制剂dantrolene预处理A549细胞,观察其与F-actin细胞骨架重排百分率间是否存在剂量依赖关系;用Fura-2/AM荧光探针负载A549细胞后测定S.pn粘附A549细胞30、60、90 min的胞内[Ca²⁺]_i。结果 S.pn作用A549细胞后,经FITC-phalloidin荧光染色,F-actin细胞骨架呈黄绿色块状聚集;F-actin细胞骨架重排抑制剂细胞松弛素D可明显降低S.pn对A549细胞的侵袭,在其浓度为0.25 μg/ml时,未得到可测的细菌数;Ca²⁺信号转导抑制剂可部分抑制A549细胞F-actin细胞骨架重排,且与F-actin细胞骨架重排百分率间存在量效关系;S.pn粘附A549细胞30、60、90 min后的胞内[Ca²⁺]_i高于对照[(187.4±17.3 nmol/L)],并达到饱和,分别为(487.5±38.1)、(548.2±35.6)和(557.2±47.5)nmol/L。结论 S.pn可通过Ca²⁺细胞信号转导途径触发A549细胞F-actin细胞骨架重排,进而导致S.pn侵袭A549细胞。     

IL-27诱导人成纤维样滑膜细胞产生IL-6的免疫机制

目的：探讨白介素-27（interleukin-27,IL-27）对人成纤维样滑膜细胞（fibroblast-like synoviocyte,FLS）的体外活化效应及细胞内信号传导机制。方法：IL-27处理FLS后,酶联免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）检测细胞培养上清液中白介素-6（interleukin-6,IL-6）水平的变化;信号通路抑制剂处理FLS后1 h,用IL-27刺激FLS 48 h,ELISA检测细胞上清液中IL-6的水平变化;Western blot检测IL-27刺激FLS不同时间细胞内信号通路蛋白的磷酸化水平。结果：IL-27能刺激正常关节来源的FLS（N-FLS）和RA患者关节来源的FLS(RA-FLS)产生IL-6,IL-27（50 ng/mL）刺激N-FLS产生的IL-6水平[（1329.10±113.15） pg/mL]和刺激RA-FLS产生的IL-6水平[（1 583.70±129.54） pg/mL]较其阴性对照明显升高（P=0.001,P=0.001）。用不同浓度（0、10、20、50、100 ng/mL）IL-27分别处理2种细胞不同时间（0、12、24、48 h）,产生IL-6的水平随浓度和时间增加而升高,具有时间和剂量依赖性。JAK抑制剂AG490和JNK抑制剂SP600125可显著抑制IL-27诱导N-FLS和RA-FLS产生IL-6。IL-27刺激N-FLS和RA-FLS后,细胞内信号通路蛋白JAK2和JNK的磷酸化水平明显升高（JAK2：F=303.000,P=0.000;F=640.400,P=0.000;JNK：F=98.840,P=0.000;F=54.820,P=0.001）。结论：IL-27可通过激活FLS细胞内JAK2和JNK信号通路上调FLS产生IL-6水平,从而增强关节滑膜的炎症反应。     

四年制医学检验技术专业的培养目标及教学的思考

根据教育部制定的“普通高等学校本科专业目录（2012年）”,原有医学检验专业（五年制）改为医学检验技术专业（101001）,学制为四年,授予理学学士学位.新医学检验专业的学制、学位及归属类别的改变,不仅突出了该专业的检验技术属性,也必然引起本专业培养目标的转换,因此亟需探索与新专业目录、新培养目标适应的新教学体系和教学思想,文章就此提出一些思考.     

用融合蛋白在大肠杆菌中高表达百日咳杆菌毒素蛋白S3亚基…

用多聚酶链反应和基因重组技术通过百日咳毒素Ｓ３亚基因和高表达质粒ＰＭＡＬ－Ｃ构建了麦芽糖结合蛋白和亚基蛋白的融合基因，并在大肠杆菌中高效表达了融合蛋白。     

医学检验专业高职教育教学改革的思路与实践

一、教学改革的基本思路 以更新教育思想观念和改革为先导,以教学改革为核心,以教学基本点为重点,注意提高质量,努力办出特色。 (一)转变教育思想,更新教育观念。 高职教育是一种全新的、独特的教育类型。我校属综合性的医科大学,在高职办学中,利用了医学检验专业成人高等教育多年办学实践中形成的主动适应经济社会发展需要的教育观念及在培养高等技术应用性专门人才方面积累的宝贵教学经验,也利用了我校作为普通高校所开辟的实践教     

肺炎链球菌致病的分子机理

肺炎链球菌致病机理的研究 ,内容上包括细菌结构成分、粘附机制、宿主免疫等几个方面 ;水平上包括毒力基因和毒力蛋白。本篇就Spn的主要结构、毒力因子、粘附和入侵方面的最新研究作一综述报道。     

乙型肝炎病毒的基因分型

乙型肝炎病毒（HBV）基因型是HBV基因异质性的表现之一，最早于1988年提出，至今已发现的基因型有A～H共8种。研究发现HBV基因型在不同地域和人群中的流行谱有差异，这种差异将影响HBV各种检测方法在不同地区和人群中的检测准确性。同时，HBV基因型还与乙型肝炎病情的进展、预后以及对治疗的应答有一定相关关系。     

转化缺陷的R6菌株经黏膜免疫小鼠可抵抗肺炎链球菌有毒株感染

摘要：目的：研制一种无转化能力的肺炎链球菌（S.pn）减毒株R6ΔcomE,评价其作为S.pn活菌疫苗的保护效果。 方法：构建comE基因缺陷的R6ΔcomE株,评价R6、R6ΔcomE株的转化能力及其毒力;用R6、R6ΔcomE株分别对BALB/c小鼠进行黏膜免疫,用ELISA法检测免疫小鼠血清特异性抗体效价和脾细胞上清中IFN-γ、IL-4及IL-17A水平;用D39株经鼻腔黏膜感染免疫小鼠,观察生存时间和生存率。 结果：成功构建comE缺陷的R6ΔcomE株。体外转化实验中R6株转化菌量中位数为1 970 CFU/mL,体内转化实验中每只小鼠34 CFU,体内外实验中R6ΔcomE株转化菌量均为0;感染1×10⁸ CFU D39株的小鼠于3 d内全部死亡,而感染相同剂量R6、R6ΔcomE株的小鼠均存活＞21 d,且均于感染后72 h内清除细菌。R6、R6ΔcomE株黏膜免疫小鼠后,血清抗体滴度的中位数（P₂₅,P₇₅）分别达1.0×10⁶（6.4×10⁵,1.8×10⁶）、1.2×10⁶（8.1×10⁵, 1.6×10⁶）,与相应阴性对照组比较差异有统计学意义（P均＜0.01）;与相应阴性对照组比较,R6、R6ΔcomE株免疫组IL-4、IL-17A均升高（P均＜0.01）,而IFN-γ水平差异无统计学意义（P＞0.05）。黏膜免疫R6、R6ΔcomE株的BALB/c小鼠可抵抗D39株感染,生存率分别为60%和70%。 结论: R6ΔcomE株毒力弱,无转化能力,可诱导对S.pn感染的免疫保护,是一株安全有潜力的S.pn减毒活菌疫苗。     

肺炎链球菌溶血素诱导THP-1细胞凋亡涉及MAPK1/3信号途径

目的 探讨肺炎链球菌溶血素(pneumolysin,Ply)对人急性单核细胞白血病单核细胞株THP-1细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用及机制.方法 MTT法检测Ply对THP-1细胞的增殖抑制.瑞氏染色观察Ply对人THP-1细胞形态的影响.AnnexinV-FITC/PI双标法检测细胞凋亡.琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞DN...