单链抗体A7基因的原核细胞表达

[目的]制备抗乙酰胆碱受体主要免疫原区单链抗体A 7基因,为基因治疗重症肌无力奠定基础.[方法]构建含有抗乙酰胆碱受体主要免疫原区单链抗体A 7基因的重组原核表达载体pHEN 2-单链抗体A 7,将其转化至大肠杆菌HB 2151中,以异丙基--βD-硫代半乳糖苷(IPTG)为诱导剂,在外周质中进行表达,以硼酸钠裂解细菌细胞壁,制备含有单链抗体的裂解液,应用鼠抗c-myc单克隆抗体的斑点杂交试验检测表达的单链抗体A 7基因.[结果]在大肠杆菌的外周质中可见单链抗体A 7基因表达,培养上清液中未见单链抗体A 7基因表达.[结论]抗乙酰胆碱受体主要免疫原区单链抗体A 7基因在原核细胞成功表达.     

抗乙酰胆碱受体单抗配位特异性和序列分析

测定了２株抗乙酰胆碱受体单抗的配位特异性，发现这２株抗体识别ＡＣｈＲ上同一表位。免疫印迹法证明：这２株抗体辩论ＡＣｈＲ上ｒ和δ亚单位。可变区核苷酸序列分析证实：这２株抗体的Ｈ链同源性为９５．３％，Ｌ链同源性为９５．８％。这２株抗体可能来源于同一前体基因，在抗原刺激的亲和成熟过程中，发生了体细胞突变。     

酒精性肝病细胞凋亡的相关机制研究

目的探讨大鼠酒精性肝病细胞凋亡与细胞色素P4502E1、TNF-α及氧自由基的关系。方法采用灌胃法制备大鼠酒精性肝病(ALD)模型,模型组用40%酒精8g/(kg·d)分2次灌胃,共8周,对照组灌等量的生理盐水。采用TUNEL法检测肝细胞的凋亡、用PCR法测定细胞色素P4502E1的表达、放射免疫法检测血清TNF-α含量、硫代巴比妥酸(TBA)法测血清丙二醛(MDA)的含量、黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)的活力。结果模型组凋亡的肝细胞明显增多,主要分布在中央静脉周围、点状和灶状坏死区。CYP2E1表达:对照组c1基因频率为91.65%、c2基因频率为8.35%;模型组c1基因频率为53.35%、c2基因频率为46.65%,差异均有显著性(P<0.05)。血清TNF-α水平与肝细胞凋亡指数及SOD与MDA水平之间有相关性(TNF:AI,r= 0.836;SOD:MDA,r=-0.582)。结论长期酒精摄入可引起肝细胞凋亡增多,CYP2E1基因PstI及RsaIRFLPs与酒精性肝病有关,其中c2基因可能与大鼠酒精性肝病的发生有关,TNF-α和氧自由基及脂质过氧化损伤在酒精性肝病的肝细胞凋亡过程中起一定作用。     

重症肌无力单链抗体融合蛋白的酵母菌表达及特异性鉴定

目的: 真核表达抗人乙酰胆碱受体单链抗体637(scFv637)与人血清白蛋白(HSA)的融合蛋白,以提高融合蛋白的产量和增强其生物学活性.方法: 将携带有重组质粒的毕赤酵母菌GS115用G-418筛选高拷贝重组转化子克隆,诱导表达目的蛋白,表达产物用斑点杂交试验检测,并以SDS-PAGE鉴定融合蛋白的相对分子质量(Mr),应用间接免疫荧光技术确定融合蛋白与人肋间肌乙酰胆碱受体(AChR)的亲和性.结果: 斑点杂交试验显示成功表达出目的蛋白,其Mr约为97 400,在人肋间肌细胞膜之间有荧光出现.结论: 在毕赤酵母菌GS115中成功表达出scFv637-HSA融合蛋白,并且融合蛋白可以与人肋间肌AChR结合,这为进一步研究融合蛋白的功能和应用奠定了基础.     

肝动脉超选灌注自体骨髓干细胞治疗失代偿期乙型肝炎肝硬化的临床研究

目的 分析肝动脉超选灌注自体骨髓干细胞对失代偿期乙型肝炎(乙肝)肝硬化患者的疗效及安全性.方法 选择失代偿期乙肝肝硬化患者20例,从髂后上棘抽取骨髓,体外分离纯化骨髓源性干细胞,通过肝动脉超选注入肝脏,在移植后2、4、8、12周复查肝功能,观察实验室指标变化及不良反应情况.同时选取常规治疗的失代偿期乙肝肝硬化患者20例...     

乙型肝炎患者血清IgE和IL-4的检测及其临床意义

IgE与白细胞介素4（IL-4）是参与Ⅰ型超敏反应的主要抗体和介质，也是检测工型超敏反应的重要指标。为了论证Ⅰ型超敏反应与乙型肝炎发病机制的关系，对急、慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化患者结合血清谷丙转氨酶（ALT）浓度的变化，检测了血清内IgE和IL-4含量。现将研究结果报道如下。     

放射化学法测定脑α-酮戊二酸脱氢酶活性

［ 目的］ 介绍一种测定脑组织α 酮戊二酸脱氢酶活性的放射化学方法．［ 方法］ 应用放射化学测定法，并探讨影响酶活性的反应条仵．［ 结果］ 测得的正常大鼠全脑α 酮戊二酸脱氢酶活性为０－４０２ ±０－０２７ｎｍｏｌ／（ｍｇ 蛋白质·ｈ）．［ 结论］ 所用的方法简单，适用于测定早老性痴呆病人脑组织α 酮戊二酸脱氢酶活性     

克氏库克菌败血症一例

患者男,25岁,西藏藏族自治区那曲县牧民。因“寒战、发热、腹痛、纳差、腹泻1周,尿黄3d”于2012年4月18日入院。患者人院前1周每天上午不明原因出现畏寒、发热、体温最高达39．5℃。静脉注射柴胡或复方氨林巴比妥,退热不明显,用冬眠合剂加冰毯降温等措施后可降至36℃。右上腹部隐痛,伴间断性腹泻,     

胃癌MG7-Ag模拟表位减毒鼠伤寒沙门菌活菌疫苗研制及免疫效果

目的以减毒鼠伤寒沙门菌为疫苗载体,构建基于胃癌MG7-Ag模拟表位的口服活菌疫苗,观察Balb/c小鼠口服免疫后诱导的体液和细胞免疫反应。方法构建MG7-Ag模拟表位和HBcAg融合基因的原核表达载体,将其转入减毒鼠伤寒沙门菌得到模拟表位的口服活菌疫苗。用构建的口服鼠伤寒沙门菌疫苗免疫Balb/c小鼠,以PBS和携带pYA3341空载体的减毒鼠伤寒沙门菌作为对照。初次口服接种6周后应用ELISA法检测小鼠血清中抗MG7-Ag抗体的滴度。初次免疫后8周时,取免疫鼠脾细胞,以51Cr释放法检测小鼠脾淋巴细胞对靶细胞的杀伤效果,用表达MG7-Ag的小鼠艾氏腹水瘤细胞进行肿瘤攻击实验,观察疫苗对小鼠的保护作用。结果口服疫苗免疫小鼠后疫苗免疫组小鼠血清抗MG7-Ag抗体较PBS和空载体对照组显著增高,三组分别为0.954±0.040,0.653±0.018和0.692±0.012(P<0.01)。各组小鼠脾淋巴细胞体外杀伤实验未见显著差异,三组分别为234.7±27.7,183.4±26.0和195.7±8.0(P>0.05)。小鼠艾氏腹水瘤的攻击实验显示:疫苗免疫组中5只小鼠有1只未见肿瘤形成,而对照组小鼠则全部成瘤,且免疫组的成瘤重量为(0.05±0.01)g,明显小于两对照组的(0.10±0.04)和(0.09±0.04)g(P<0.01)。结论以胃癌MG7-Ag模拟表位为基础的口服减毒鼠伤寒沙门菌疫苗具有免疫原性,可诱导小鼠产生抗肿瘤免疫,并具有一定的保护作用。     

肝硬化患者糖尿病与原发性肝癌相关性的研究

目的探讨肝硬化患者中糖尿病与原发性肝癌（primary hepatic carcinoma,PHC）发生的相关性。方法对2001年12月-2008年12月解放军第jo二医院诊断为肝炎肝硬化、酒精性肝硬化患者22132例（合并PHC患者6169例为病例组）进行病例对照研究,分析肝硬化患者中糖尿病与PHC的发生有无相关性,并按病因（包括乙型肝炎肝硬化、丙型肝炎肝硬化和酒精性肝硬化）分层分析其相关程度。结果在肝硬化患者中,合并糖尿病患者发生PHC的OR值为1．851（95％CI,1．693～2．023,X^2=184．55,P=0．000）,其中乙型肝炎肝硬化、内型肝炎肝硬化和酒精性肝硬化组的OR值分别为1．850（95％CI,1．666～2．050,X2=137．52,P=0．000）、2．238（95％CI,1．738～2．882,X2=38．97,P=-0．000）和1．935（95％CI,1．472～2．567,X^2=20．89,P=0．006）。结论肝硬化患者合并糖尿病可以增加发牛PHC的胍险,在丙型肝炎肝硬化患者最为明显。