心肌肥大的机制:丝裂素活化蛋白激酶抑制剂对血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞血小板衍生生长因子受体表达的影响

背景血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)是诱导心肌肥大的强刺激因子,血小板衍生生长因子(platelet-derived growthfactor,PDGF)也是致心肌肥大因素之一,AngⅡ是否可以通过诱导PDGF受体表达进一步促使心肌肥大?目的探讨丝裂素活化蛋白激酶在AngⅡ致心肌细胞肥大的作用,为心肌肥大的防治提供理论依据.设计以分离纯化培养的Wistar乳鼠心肌细胞为研究对象的对照性实验研究.单位一所大学的病理生理教研室.材料实验在北京大学医学院病理生理学实验室进行.实验动物为80只出生1～3 d的Wistar乳鼠(北京大学医学部动物中心提供),雌雄不限.均在细胞培养室取出心脏做心肌细胞培养.干预分离纯化培养的乳鼠心肌细胞,分为3组,以1×10-7 mol/L AngⅡ刺激为AngⅡ组;以1×10-5 mol/L PD98059(一种丝裂素活化蛋白激酶抑制剂)预孵育30 min后再用AngⅡ刺激为PD98059组;以正常的乳鼠心肌细胞为对照组.培养24 h后采用免疫印迹法测定每组心肌细胞PDGF-β受体的含量.主要观察指标各组心肌细胞PDGF-β受体的含量.结果AngⅡ刺激培养24 h的乳鼠心肌细胞PDGF-β受体表达(432.41±54.08)和对照组(197.65±44.10)比较增强,差异有显著性意义(q=6.77,P<0.01),PD98059组PDGF-β受体表达(317.2±21.12)与AngⅡ组比较明显下降,差异有显著性意义(q=3.91,P<0.05),但并未完全恢复至对照组水平,两者比较差异有显著性意义(q=3.85,P<0.05).结论AngⅡ可以上调心肌细胞PDGF-β受体的表达,丝裂素活化蛋白激酶参与这一过程.这可能是AngⅡ促进心肌肥大的又一个重要机制.此研究结果可为心脏康复的一、二级预防提供实验学数据.     

辛伐他汀对大鼠血管平滑肌细胞增殖及bFGF与ERK1/2表达的干预作用

目的:观察辛伐他汀对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)与细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)蛋白表达的影响.方法:体外培养大鼠胸主动脉VSMC,MTT法测定细胞增殖活力;Western blot法检测bFGF与ERK1/2蛋白的表达.结果:与对照组比较,辛伐他汀各浓度组细胞增殖活力均显著降低(P＜0.05).与对照组比较,低、中剂量组bFGF、ERK1/2蛋白表达均显著降低(P＜0.05),高剂量组bFGF、ERK1/2蛋白表达进一步降低(P＜0.01);与低剂量组比较,中剂量组bFGF、ERK1/2蛋白的表达均无统计学意义(P＞0.05),高剂量组则显著降低(P＜0.05);高剂量组bFGF、ERK1/2蛋白的表达又较中剂量组显著降低(P＜0.05),并呈剂量依赖性.结论:辛伐他汀能抑制平滑肌细胞增殖,该作用是通过抑制bFGF及其相应信号通路ERK1/2蛋白的表达来实现的,这可能是辛伐他汀治疗动脉粥样硬化、再狭窄及高血压等心血管疾病的重要机制之一.     

颈总动脉损伤大鼠成纤维细胞生长因子受体1、p21ras表达与辛伐他汀的抑制效应

背景：辛伐他汀可通过抑制血管平滑肌细胞增殖发挥抗血管狭窄作用,但其作用机制尚不完全清楚。目的：观察辛伐他汀对血管损伤后狭窄时成纤维细胞生长因子受体1、p21ras蛋白表达的影响。方法：建立SD大鼠颈总动脉损伤模型,随机分为假手术组、模型组、低剂量和高剂量辛伐他汀组,后2组分别于术前3d灌胃辛伐他汀5,10mg/（kg？d）直至术后14d。结果与结论：大鼠颈总动脉损伤后：①苏木精-伊红染色显示,血管中膜血管平滑肌增殖显著,排列紊乱,管腔严重狭窄;应用辛伐他汀后血管内膜相对光滑,中膜血管平滑肌细胞排列趋于规整,管腔狭窄程度有不同程度减轻。②Western blot检测显示,颈总动脉成纤维细胞生长因子受体1、p21ras表达明显升高（P〈0.05）,低剂量辛伐他汀干预后两种蛋白表达无明显变化,应用高剂量辛伐他汀干预后两种蛋白表达明显下降（P〈0.05）。表明辛伐他汀可能通过抑制成纤维细胞生长因子受体1、p21ras蛋白的表达抑制血管平滑肌细胞增殖,减轻血管损伤后狭窄。     

颈总动脉损伤大鼠血管蛋白激酶C与核因子-κB的表达及辛伐他汀对其的影响

目的:探讨蛋白激酶C(PKC)与核因子-κB(NF-κB)在血管损伤后狭窄中的作用及辛伐他汀对其的影响。方法:建立颈总动脉损伤动物模型:雄性SD大鼠48只,分为假手术组、手术组、低剂量和高剂量辛伐他汀组,低、高剂量辛伐他汀组术前3d分别用5mg/(kg·d)和10mg/(kg·d)辛伐他汀灌胃,术后14d处死。HE染色观察血管形态学的变化;Westernblot检测血管PKCα与NF-κB蛋白的表达。结果:与假手术组比较,手术组血管平滑肌细胞(VSMC)增殖显著,管腔严重狭窄;与手术组相比,辛伐他汀处理后VSMC排列趋于规整,管腔狭窄程度较轻。与假手术组比较,手术组PKCα与NF-κB蛋白差异显著(P<0.01);与手术组比较,高剂量组PKCα与NF-κB蛋白表达显著降低(P<0.01),低剂量组的表达差异无统计学意义(P>0.05);高剂量组与低剂量组有明显差异(P<0.05)。结论:PKCα与NF-κB参与血管损伤后狭窄的形成,辛伐他汀具有抗血管狭窄作用,其机制可能与下调PKCα与NF-κB表达有关。     

颈总动脉损伤大鼠成纤维细胞生长因子受体1、p21ras表达与辛伐他汀的抑制效应**

背景：辛伐他汀可通过抑制血管平滑肌细胞增殖发挥抗血管狭窄作用,但其作用机制尚不完全清楚。 目的：观察辛伐他汀对血管损伤后狭窄时成纤维细胞生长因子受体1、p21ras蛋白表达的影响。 方法：建立SD大鼠颈总动脉损伤模型,随机分为假手术组、模型组、低剂量和高剂量辛伐他汀组,后2组分别于术前3 d灌胃辛伐他汀5,10 mg/(kg•d)直至术后14 d。 结果与结论：大鼠颈总动脉损伤后：①苏木精-伊红染色显示,血管中膜血管平滑肌增殖显著,排列紊乱,管腔严重狭窄;应用辛伐他汀后血管内膜相对光滑,中膜血管平滑肌细胞排列趋于规整,管腔狭窄程度有不同程度减轻。②Western blot检测显示,颈总动脉成纤维细胞生长因子受体1、p21ras表达明显升高(P < 0.05),低剂量辛伐他汀干预后两种蛋白表达无明显变化,应用高剂量辛伐他汀干预后两种蛋白表达明显下降(P < 0.05)。表明辛伐他汀可能通过抑制成纤维细胞生长因子受体1、p21ras蛋白的表达抑制血管平滑肌细胞增殖,减轻血管损伤后狭窄。 关键词：辛伐他汀;颈总动脉损伤;狭窄;成纤维细胞生长因子受体1;p21rasS doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.07.031     

血管狭窄大鼠血浆AngⅡ与血管PDGF-B表达的变化

血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)增殖是血管发生狭窄的重要病理特征.血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)与血小板源生长因子-B(platelet-derived growth factor-B,PDGF-B)均可促进VSMC增殖,Ang Ⅱ还可上调VSMC血小板源生长因子-B表达[1].本实验探讨Ang Ⅱ上调PDGF-B的信号传导途径,以探讨血管狭窄的发生机制.     

大鼠小脑皮质内神经肽Y能神经元的形态与分布小脑的运动学习、记忆及整合功能

背景：神经肽Y能神经元分布于大脑皮质、尾壳核、边缘系统、丘脑、脑干等多个部位，与运动的学习、记忆及高级整合功能有关；小脑具有通过学习而重新组合的能力，研究大鼠小脑皮质内神经肽Y阳性神经元的形态与分布，可对小脑皮质运动学习的形态学基础有所了解。目的：研究大鼠小脑皮质内神经肽Y免疫阳性神经元的形态与分布，探讨神经肽Y能神经元与小脑运动学习、记忆的关系。设计：以动物为研究对象，单一样本研究。单位：新乡医学院解剖学教研室、病理生理教研室和形态中心。材料：实验于2001-07／12在新乡医学院形态中心进行。清洁级SD大鼠10只，雌雄不限，体质量100-200g。方法：腹腔麻醉后，升主动脉灌注固定，开颅取小脑，入相同固定液中后固定48h，常规石蜡包埋；沿小脑矢状面作连续切片。神经肽Y免疫组化染色，阳性对照采用大鼠大脑切片；阴性对照用正常小牛血清替代第一抗体，0．01mol／L磷酸盐缓冲液替代第二抗体。光镜下观察，显微照相。主要观察指标：观察大鼠小脑皮质内神经肽Y能神经元的形态与分布。结果：大鼠小脑内神经肽Y免疫阳性神经元分布在皮质的Purkinje细胞层，胞体呈梨形或烧瓶状，细胞核清晰不染色，轴突伸向颗粒层，树突呈网状伸向分子层，突起未见染色。分子层和颗粒层未见阳性细胞，但可见神经纤维的存在。结论：小脑Purkinje细胞层内神经肽Y阳性神经元可能与运动学习、记忆、内脏活动及高级整合功能有关。     

川芎嗪对血管再狭窄大鼠血小板源生长因子受体与细胞外信号调节蛋白激酶表达的影响

目的:观察血小板源生长因子(PDGF)受体与细胞外信号调节蛋白激酶(ERK1/2)在再狭窄血管中的表达及川芎嗪(TMP)对其的影响,探讨TMP防治血管再狭窄的作用机制。方法:制备大鼠血管再狭窄模型,采用不同浓度的川芎嗪干预,观察颈总动脉形态学改变,免疫组化法检测颈总动脉PDGF-β受体与ERK1/2的表达。结果:假手术组动脉各层结构正常、清晰,无明显血管平滑肌细胞(VSMC)增殖,颈总动脉损伤大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)大量增殖,内膜显著增厚,川芎嗪处理后,血管平滑肌细胞(VSMC)增殖程度降低;与假手术组比较,再狭窄大鼠颈总动脉PDGF-β受体与ERK1/2表达显著增强(P<0.01),中、高剂量川芎嗪明显降低PDGF-β受体及ERK1/2的表达(P<0.01,P<0.05)。结论:TMP抑制血管再狭窄,其机制与抑制血管平滑肌细胞PDGF受体及ERK1/2表达有关。     

丝裂素活化蛋白激酶参与AngII诱导心肌细胞血小板衍生生长因子受体的表达

目的　探讨丝裂素活化蛋白激酶在血管紧张素II(AngII)诱导心肌细胞血小板衍生生长因子受体 - β(PDGF - β)表达中的作用。 方法　分离纯化培养的乳鼠心肌细胞 ,以10 -7mol·L-1AngII刺激为AngII组 ;以 10 -5mol·L-1PD980 5 9(一种丝裂素活化蛋白激酶抑制剂 )预孵育 30min10 -7后再用AngII刺激为PD980 5 9组 ,以正常的乳鼠心肌细胞为对照组 ;免疫印迹法测定培养 2 4h时心肌细胞PDGF - β受体的含量。 结果　AngII刺激培养 2 4h的乳鼠心肌细胞PDGF - β受体表达增强 (P <0 .0 5 ) ,PD980 5 9可部分抑制AngII对PDGF - β受体表达的诱导作用。结论　丝裂素活化蛋白激酶参与AngII上调心肌细胞PDGF - β受体表达的信号转导途径     

卡托普利对肾性高血压大鼠肥大心肌内皮素的影响

目的 :观察卡托普利对肾性高血压大鼠肥大心肌内皮素 (ET)的影响 ,探讨心肌肥大的发生机制。方法 :制作肾性高血压动物模型 ,以左心室与体重之比为心肌肥大指数、放免法测定心肌血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)与ET的变化。结果 :肾动脉狭窄术后 8周 ,心肌肥大指数显著升高 ,心肌AngⅡ与ET均显著升高 ,卡托普利使心肌肥大指数 ,心肌AngⅡ与ET水平显著下降。结论 :AngⅡ可能通过诱导ET分泌增加参与肾性高血压所致心肌肥大的发生