非小细胞肺癌患者淋巴结、外周血及骨髓微转移分子诊断在肺癌外科治疗中的作用

目的 探讨检测肺癌患者区域淋巴结、外周血和骨髓中微转移在肺癌外科治疗中的临床意义,以及区域淋巴结、外周血和骨髓肺癌微转移三者之间的相关性。方法 应用巢式RT－PCR技术,对29例肺癌患者和11例肺良性病变患者的淋巴结、外周血和骨髓中CK19基因mRNA表达进行联合检测。结果 本实验建立的巢式RT－PCR技术的敏感性可达到10^-6。术前10例患者检测到外周血微转移,6例患者检测到骨髓肺癌微转移,101枚纵隔淋巴结中55枚检测到肺癌微转移。肺癌患者淋巴结、外周血和骨髓中微转移阳性检出率分别为54．5％、34．5％和20．7％,三者之间存在显著正相关（P＜0．05）,外周血和骨髓微转移与肺癌组织学类型、细胞分化程度及P－TNM分期均存在密切关系（P＜0．05或P＜0．01）。结论 RT－PCR法是一种特异性,敏感性均较高的肿瘤微转移检测方法;检测CK19 mRNA表达应用于肺癌微转移的分子诊断有助于选择外科手术适应证,并具有广阔的临床应用前景。     

615纯系小鼠肝脏mRNA的分离与活性鉴定

用改进的酚-氯仿抽提法分离615小鼠肝脏总核酸,再用Oligo(dT)-纤维素亲和层析法,从总核酸中分离得到纯度较高的带Poly(A)的mRNA组分。经体外无细胞蛋白合成系统的检测及产物的免疫沉淀反应,都表明所分离的mRNA具有生物活性。本法操作简便,并有不受高速离心条件限制的特点。     

从小牛胸腺分离纯化末端脱氧核苷酰转移酶

采用离子交换层析和Oligo(dT)-纤维素亲和层析相结合的方法,从小牛胸腺分离纯化末端脱氧核苷酰转移酶(TdT),500g胸腺TdT的比活性为1076～2030u/mg蛋白,总活性为4400～7296u,聚丙烯酰胺凝胶电泳一条带,SDS-凝胶电泳测其分子量得到7900和23700道尔顿的两个亚基,不含DNA聚合酶。     

信息核糖核酸的分离纯化

在真核细胞基因表达中信息核糖核酸(messenger RNA,以下简称mRNA)起着重要的作用,因此在基因调控研究中mRNA的分离纯化是一个重要的课题。本文就mRNA的分离纯化技术作一概述。     

非小细胞肺癌患者血清中内皮抑素、VEGF水平及其与临床病理生理特征的关系

目的探讨非小细胞肺癌患者手术前、后血清中内皮抑素(endostatin)和血管内皮生长因子(VEGF)的动态变化规律及其与肺癌临床病理生理特征的关系.方法用ELISA法检测46例非小细胞肺癌患者和14例肺良性病变患者手术前、后血清中endostatin和VEGF的水平.结果①肺癌患者手术前血清中endostatin水平[(20.85±4.56)μg/L]和VEGF水平[(1.75±0.37)μg/L]均显著高于肺良性病变患者[(15.68±2.78)μg/L与(1.05±0.32)μg/L](P<0.01).②肺癌患者手术前血清中endostatin和VEGF水平与肺癌原发肿瘤大小、有无远处转移、细胞分化程度和P-TNM分期等有密切关系(P<0.05),与肺癌原发部位、淋巴结转移状态、组织学类型,患者性别、年龄和吸烟与否等无明显关系(P>0.05).③肺癌患者术后7天血清endostatin水平[(23.41±5.12)μg/L]显著高于术前[(20.85±4.56)μg/L](P<0.05)和术后1天血清endostatin水平[(18.89±4.67)μg/L](P<0.001);术后7天血清VEGF水平[(3.75±0.71)μg/L]显著高于术前[(1.72±0.46)μg/L]和术后1天血清VEGF水平[(2.22±0.58)μg/L](P<0.001).④肺癌患者术前血清endostatin水平与VEGF 水平呈非常显著负相关(r=-0.380,P<0.01).结论非小细胞肺癌患者存在血清endostatin和VEGF水平升高,且与肺癌的发生、发展、远处转移和细胞分化不良有密切关系.非小细胞肺癌患者血清中endostatin和VEGF水平可能是预测肺癌恶性行为的有用指标.     

用两种探针对正常与不育男性的白细胞和精细胞基因组DNA进行Southern印渍杂交分析

分子探针在分析尚未弄清楚生化缺陷的遗传疾病上提供了有力的研究工具,它可能帮助寻找生化缺陷的基础,从而提供更合理的诊断和治疗。我们在不明原因男性不育的研究中,见到其配偶具正常生育能力,患者本人精液常规分析数据正常,其不育原因不明,但对不明原因不育男性的基因分析,国内外均尚无报道,也无特异探针,因此我们从囊性纤维化病人     

p16INK4A和 p15INK4B对人肝癌细胞增殖和凋亡影响的研究

目的　为探讨抑癌基因 p16 INK4 A和 p15 INK4 B对 Rb基因状态不同的人肝癌细胞系增殖和凋亡的影响。方法　在分析细胞系遗传背景鉴定基础上采用脂质体将构建的 p XJ- p16、p XJ- p15重组质粒转染人肝癌细胞系 BEL74 0 2 (p16 / p15 Rb )和 SMMC772 1(p16 / p15 / Rb- )。应用 PCR、RNA斑点印迹、MTT、集落形成、流式细胞仪等技术检测外源性 p16和 p15基因、m RNA表达及其对肝癌细胞增殖、凋亡的影响。结果　经转染的 BEL74 0 2 - p16 ,BEL74 0 2 - p15细胞 ,分别存在外源性 p16、p15基因 ,在含外源基因细胞中相应的 m RNA表达增强 ;BEL74 0 2 - p15细胞生长速度、集落形成率显著低于对照细胞 BEL 74 0 2 (P<0 .0 1) ;细胞周期分析观察到与亲本细胞比较 ,BEL 74 0 2 - p15的 G1期细胞由 37.7%增高到 4 3.6 % ,S期细胞由 2 2 %下降到 13% (P<0 .0 5 ) ,并出现 G1亚峰 (凋亡峰 )。与此相反 ,BEL74 0 2 - p16细胞增殖未见抑制 ,细胞周期分布无明显差异 ,集落形成率也未见减少。此外 ,SMMC772 1- p16细胞增殖也无抑制。结论　外源性 p15 INK4 B具有抑制人肝癌细胞生长 ,诱导细胞凋亡的作用 ,其作用不受内源性p15影响。而 p16 INK4 A对肝癌细胞生长抑制的作用可能依赖于 RB途径的完整性。     

突变K—ras基因修饰的肺癌树突状细胞疫苗的体内实验研究

免疫治疗作为肿瘤综合治疗的一个重要组成部分 ,近年来受到医学界的广泛重视。制备高效的肿瘤疫苗 ,有效激活机体的抗肿瘤免疫反应 ,成为目前肿瘤生物治疗的研究热点[1 ] 。树突状细胞 (ｄｅｎｄｒｉｔｉｃｃｅｌｌ,ＤＣ)是目前所知的功能最强的抗原提呈细胞 ,能有效地激活静息期Ｔ淋巴细胞发生免疫应答[2 ] 。Ｋ ｒａｓ原癌基因点突变常发生于多种肿瘤 ,尤其是在肺腺癌中发生率高达 60 % ,其突变产物可能具有抗原性[3] 。为了探讨突变Ｋ ｒａｓ基因作为一种抗原激活免疫功能的可行性 ,本研究在国内外首次应用腺病毒载体将一段突变Ｋ ｒａｓ…     

末端脱氧核苷酰转移酶酶学性质初步探讨及其临床应用

作者对末端脱氧核苷酰转移酶(简称TdT)的引物、底物及抑制剂等酶学性质进行了探讨,观察到TdT的引物、底物及酶浓度曲线与一般酶促反应动力学曲线基本相符,建立起稳定的酶测活系统。用于临床,对白血病患者外用血检测了TdT活性,结果表明急淋患者其活性明显高于急粒等其他类型的白血病患者。     

HCC患者GSTP1基因启动子区CpG岛甲基化状态研究

目的 检测人原发性肝癌（HCC）中抑癌基因GSTP1的启动子区CpG岛甲基化的状况，并探讨其在肝癌发生中的作用。方法 以已知的GSTP1基因启动子区CpG岛甲基化阳性的乳腺癌细胞株MCF-7为阳性对照，以11例正常人外周血单核细胞（PBMC）DNA为阴性对照，用甲基化特异性PCR（MSP）的方法对26例肝细胞癌患者的癌、远癌组织中GSTP1基因启动子区CpG岛甲基化的状态进行检测。结果 在26例原发性肝癌中GSTP1基因启动子区CpG岛甲基化在癌组织为88％（23／26），在远癌组织中为69％（18／26）；而在11例正常人外周血单核细胞均为甲基化阴性。结论 抑癌基因GSTP1基因启动子区CpG岛高甲基化可能是肝癌发生早期的分子事件，在人原发性肝癌的发生发展中具有重要的作用。