人原发性肝癌中p16基因缺失突变研究

目的　探讨 p16基因缺失和突变在人原发性肝癌分子发病机理中所起的作用。方法　采用多重PCR和 PCR- SSCP对 31例人原发性肝癌、31例癌旁肝硬化组织以及 8例正常人白细胞中 p16基因第一 ,二外显子和部分第一 ,二内含子缺失和突变进行了研究。结果　在 31例人原发性肝癌中发现 4例 p16基因第一外显子和部分第一内含子区域缺失 ,缺失率为 13% ,第二外显子和部分第二内含子区域未见缺失 ;SSCP分析发现在肝癌和癌旁肝硬化组织中 p16基因第一内含子及其下游第二外显子 18bp区域存在三种单链构象 ,第一外显子、大部分第二外显子以及部分第二内含子未见异常的 SSCP区带 ,而在正常人白细胞中有两种单链构象。结论　在人原发性肝癌中 p16基因缺失频率较低 ,罕见突变     

人肺癌中nm23等位基因缺失的研究

目的探讨人肺癌中nm23等位基因缺失与肺癌转移的关系.方法应用Southern印迹杂交对52例人肺癌组织中nm23-H1和nm23-H2等位基因缺失进行了研究,并以自身远离癌灶的肺组织作对照.结果 52例肺癌中14例存在nm23-H1等位基因的杂合缺失(26.92%).47例有nm23-H2杂交信号的肺癌中,2例存在nm23-H2等位基因缺失(4.26%).伴有淋巴结和/或远处转移的肺癌中,nm23-H1等位基因缺失率(42.86%)明显高于不伴有转移的肺癌(8.33%)(P<0.01);低分化和未分化癌nm23-H1等位基因缺失率(45.45%)亦明显高于中～高分化癌(13.33%)(P<0.05).nm23-H1等位基因缺失与肺癌组织学类型、P-TNM分期、原发肿瘤大小、部位,以及患者年龄等无明显关系(P>0.05).结论本研究结果表明nm23基因可能参与调控肺癌的细胞分化和转移过程,且nm23-H1基因在肺癌转移和细胞分化中的调节作用较nm23-H2基因更为显著.     

外源性FHIT基因表达对肺腺癌细胞株A549恶性表型的逆转作用

目的 探讨FHIT（fragile histidine triad)基因表达在肺癌细胞增殖、凋亡、成瘤性中的作用。方法 应用脂质体转染法构建能高效表达外源性FHIT基因的A549－FHIT细胞和作为空载体对照的A549－vector细胞，裸鼠皮下接种构建肺癌移植瘤动物模型，应用逆转录－PCR、Western杂交、免疫组化、流式细胞计数等技术检测外源性FHIT基因转录、表达及对肺癌细胞株增殖、凋亡、成瘤性等的影响。结果 A549－FHIT细胞的生长曲线、克隆形成率、移植瘤体积和重量均显著低于A549－vector和亲本A549细胞；A549－FHIT细胞凋亡水平显著高于A549－vector和亲本A549细胞；与两个对照组相比，A549－FHIT细胞G0／G1比例显著增高。结论 外源性FHIT表达基因能够显著抑制肺癌细胞增殖和分裂，诱导其凋亡，抑制其成瘤性，提示FHIT基因在肺癌中具有抑癌基因的功能。     

nm23-H1转染对肺癌细胞整合素分子表达的调控

目的通过基因转染方法将nm23-H1基因转入nm23-H1基因缺失的人高转移大细胞肺癌细胞株L9981,探讨nm23-H1基因对肺癌细胞整合素(integrin)分子表达的调控作用.方法应用阳离子脂质体介导的基因转染技术,将nm23-H1基因导入人高转移大细胞肺癌细胞株L9981;应用半定量RT-PCR技术检测nm23-H1基因转染前后integrin β1、integrin β3基因的mRNA表达;利用流式细胞仪技术检测nm23-H1基因转染前后integrin β1、integrin β3基因的蛋白表达.结果 (1)转染后获得稳定、高效表达nm23-H1基因的转基因肺癌细胞株L9981-nm23-H1,该细胞株的integrin β1、integrin β3 mRNA表达水平显著低于原代细胞株L9981.(2)转基因肺癌细胞株L9981-nm23-H1中integrin β1、integrin β3蛋白表达水平显著低于原代细胞株L9981(P＜0.01).结论 nm23-H1基因转染能显著下调人高转移大细胞肺癌细胞株L9981中integrin β1和integrin β3 mRNA和蛋白表达,表明nm23-H1基因可通过调控细胞integrin表达逆转人高转移大细胞肺癌L9981细胞株的转移潜能.     

免疫技术在蛋白质定性定量上的应用 三、酶连接免疫吸附测定法

在标记的抗原抗体检测法中,最先发展起来的是免疫荧光技术,随后是放射免疫测定法,这两种标记的检测法一经建立就充分地显示出它们具有高度敏感性,所以一直沿用到现在。由于放射免疫测定法试剂较贵,同位素的半寿期短,需要复杂的设备来判读结果,在运送和操作过程中还必须有特殊的防护措施等问题,因而放射免疫测定法通常都在设备条件较好的实验中心进行。在放射免疫测定法的基础上发展起来的酶免疫     

非小细胞肺癌患者外周血中微转移的诊断研究

我们应用黏蛋白1(MUC1)mRNA为标志物，检测了31例非小细胞肺癌患者外周血微转移情况，并初步探讨了肺癌患者外周血微转移诊断的临床意义，现将结果报告如下。     

Polymin-HRP核酸杂交探针

本文叙述一种将辣根过氧化物酶(HRP)与单链DNA交联以制备非同位素核酸杂交探针的新方法。HRP-单链DNA复合物可用于斑点杂交,经杂文并与HRP底物溶液作用后,可直接检出互补的DNA靶序列,而不需繁冗的细胞化学夹心法。本法可检出 1～4 pg的靶DNA。     

细胞癌基因在人脑胚胎发育过程中的表达

作者用分子杂交技术观察了正常4～7月龄胎儿脑的各个部位和正常人脑胚胎发育过程中癌基因的表达。结果显示:多数细胞癌基因的表达水平在小脑和枕叶较高,在颞叶的表达水平较低;人脑组织胚胎发育过程中,c-myc、L-myc、N-myc基因的表达情况类似;erbB基因在胚胎期脑中均有较强的表达,而在正常成人脑中未见其表达;Ha-ras、c-fos基因在人脑胚胎发育的中后期表达水平较高;mos基因在新生儿脑中表达最强。研究结果提示:这7种癌基因可能在人脑的正常胚胎发育过程中起重要作用。     

血清紫色反应对癌症诊断的初步观察

癌症的早期诊断在肿瘤防治中有着重要的意义。Nixon 报导癌症患者血浆与 Ehr-lich 试剂56℃保温7小时呈紫兰色,用此法检测未治疗进行性癌症组,阳性率达96%,其中包括一部分早期癌症病例。这以前,Doaglas 等曾用类似方法,研究了确诊的癌症患者398例,符合率达90%以上,他发现有的癌症病例,在临床癌症前四年就已出现阳性。因此他们都认为此法可能具有早期诊断癌症的价值。