CD3AK/iNOS细胞对慢性粒细胞原代细胞白血病体外净化效应

本研究旨在探讨免疫细胞性一氧化氮供体CD3AK/iNOS细胞对慢性粒细胞白血病(CML)原代白血病 细胞的体外净化效应。培养并扩增PA317/iNOS细胞并用G418筛选;用NIH3T3细胞测定病毒滴度,分离外周血 单个核细胞并用抗CD3单克隆抗体激活;病毒感染靶细胞CD3AK及用G418筛选,用逆转录-聚合酶链反应 (RT PCR)检测CD3AK/iNOS中iNOScDNA的转录;用硝酸还原酶法检测CD3AK/iNOS细胞培养上清中NO含 量以及iNOS活性;用系列稀释半定量巢式RT PCR检测CML患者白血病原代细胞经CD3AK/iNOS细胞净化后 bcr/abl融合基因的表达水平。结果表明,PA317/iNOS细胞能稳定合成并分泌重组逆转录病毒颗粒;NIH3T3细胞 测定病毒滴度为1.0×105CFU/ml;RT PCR检测发现CD3AK/iNOS细胞中有iNOScDNA的转录;CD3AK/iNOS 细胞培养上清中NO含量和iNOS活性较CD3AK细胞明显升高。上述两项指标,经统计学检验,均有显著性差异 (P<0.001,P<0.001)。系列稀释半定量RT PCR检测发现,经CD3AK/iNOS细胞净化后CML患者白血病细胞 bcr/abl融合基因的表达明显下调。实验结果统计分析表明,CD3AK/Neo细胞组净化后与CD3AK/iNOS细胞组净 化后bcr/ablmRNA表达的比较具有显著性差异(P<0.001)。结论:逆转录病毒可介导iNOS基因转入CD3AK细 胞,成功地构建了CD3AK/iNOS;CD3AK/iNOS能明显地增加NO含量和iNOS活性,应用CD3AK/iNOS可能成 为一个有效的AHSCT体外净化方法。     

环孢菌素A、雷洛昔芬及其联合应用逆转K562/A02细胞多药耐药的研究

本研究探讨环孢菌素A（CsA）、雌激素受体抑制荆雷洛昔芬及其联合应用对K562／A02细胞多药耐药的逆转作用。采用甲基四唑蓝法（MTT）测定柔红霉素（DNR）的半数抑制量，RT-PCR法检测mdr1基因mRNA表达水平，FCM检测P-gp的表达和细胞内DNR浓度。结果表明：DNR对K562／A02和K562细胞的IC50分别为23．51和0．29mg／L，雷洛昔芬（2．5mg／L）及CsA（1mg／L）单用和两药联合处理K562／A02细胞时，DNR的IC50值分别为5．98、8．15和3．68mg／L，两药对DNR作用K562细胞的IC50没有影响。CsA及雷洛昔芬单独作用后耐药株mdr1mRNA下调微弱，联合用药下调效果明显。CsA及雷洛昔芬均可降低P-gP蛋白的表达，且具有协同作用。同时还观察到逆转剂雷洛昔芬和CsA作用后细胞内柔红霉素浓度增加，两药联合作用时效果增强。结论：CsA及雷洛昔芬均可逆转耐药。且联合作用效果增强。     

维生素K2诱导人骨髓增生异常综合征细胞株MUTZ-1细胞凋亡机制的研究

为了研究维生素K2（VK2）诱导人骨髓增生异常综合征（MDS）细胞株MUTZ-1细胞凋亡的作用机制，采用流式细胞术Annexin—V^FITC／PI双染分析细胞凋亡率和PI染色分析细胞周期的改变。用RT-PCR技术检测抗凋亡基因bcl-2、survivin和促凋亡基因bax的表达，用发光比色法检测caspase-3活性。研究结果显示：细胞的凋亡率随着VK2浓度的增加和作用时间的延长逐渐增高并呈明显的时间浓度依赖性（P〈0．05），且随着药物浓度的增加和作用时间的延长S期和G2期细胞逐渐减少（P〈0．05），G0／G1期细胞逐渐增多（P〈0．01），细胞被阻滞在G0／G1期，并且在G0／G1期前出现明显的亚G1峰，即凋亡峰；抗凋亡基因bcl-2、survivin的表达随着VK2浓度的增高明显下调（P〈0．05），而促凋亡基因bax表达无明显变化（P〉0．05）；caspase-3的活性随着VK2浓度的增加和作用时间的延长而逐渐增强。结论：VK2主要是通过激活caspase-3途径诱导MUTZ-1细胞发生凋亡，同时抗凋亡基因bcl-2、survivin在细胞凋亡过程中也起重要作用。     

丙戊酸钠协同阿霉素抑制骨髓增生异常综合征细胞株增殖并诱导其凋亡

本研究探讨丙戊酸钠(SVPA)协同阿霉素(ADM)抑制骨髓增生异常综合征细胞株MUTZ-1增殖并诱导其凋亡的作用.采用细胞形态学方法观察小剂量SVPA和ADM处理后细胞形态的政变,应用(MTT)比色法检测SVPA及ADM对细胞生长的抑制作用,流式细胞术分析细胞凋亡.结果表明不同浓度的ADM(0.039μg/ml、0.078μg/ml、0.156 μg/ml、0.317 μg/ml和0.4 μg/ml)与0.25 mmol/L SVPA联合作用于MUTZ-1细胞72小时后,细胞抑制率分别为(23.46±1.12)%、(49.87±0.84)%、(52.37±1.05)%、(78.43±4.34)%和(82.47±1.04)%,明显高于单用ADM时的(5.08±0.79)%、(12.32±2.39)%、(23.65±1.34)%、(43.33±2.38)%和(47.85±1.46)%(P＜0.05).单用0.25 mmol.L SVPA时对细胞生长无影响(P＞0.05).SVPA联合ADM作用细胞株72小时后,细胞呈现典型的凋亡细胞的形态学特征;SVPA和ADM联合作用后细胞的凋亡率比单独使用ADM明显增加,并呈浓度依赖性,与对照组相比有显著的统计学意义,其中以0.078μg/ml浓度ADM为最佳抑制浓度.结论小剂量的SVPA能增敏ADM诱导骨髓增生异常综合征细胞株MUT-Z-1发生凋亡.     

不同供者来源异基因造血干细胞移植治疗恶性血液病69例疗效和预后分析

目的评价和比较无关供者与同胞供者异基因造血干细胞移植治疗恶性血液病的临床疗效。方法回顾性分析东南大学附属中大医院血液科2006年4月至2011年12月进行异基因造血干细胞移植的69例恶性血液病患者的临床资料,根据造血干细胞(HSC)来源的不同,将患者分为无关供者(URD组)30例和同胞供者(RD组)39例。对两组患者移植后中性粒细胞和血小板的植入时间、细胞嵌合状态、移植物抗宿主病(GVHD)、感染的发生率以及复发和总生存(OS)率等长期随访结果进行分析。结果 69例达到完全稳定的供者植入,URD组和RD组中性粒细胞和血小板植活的中位时间分别为11 d、10 d和15 d、14 d(均P>0.05)。共33例发生急性GVHD,其中URD组发生I～Ⅱ度GVHD 12例(40.0%);7例(23.3%)发生Ⅲ～Ⅳ度GVHD;RD组12例(30.8%)发生Ⅰ～Ⅱ度GVHD,与URD组相比差异无统计学意义(P=0.455);2例(5.1%)发生Ⅲ～Ⅳ度GVHD,与URD组相比差异有统计学意义(P=0.035)。URD和RD组的5年OS率分别为56.7%和64.1%(P=0.621)。结论无关供者和同胞供者异基因造血干细胞移植均可成功治疗恶性血液病,疗效相似;但与RD比较,URD的Ⅲ～Ⅳ度aGVHD的累积发生率高、早期感染率较高、而复发率较低。     

造血干细胞移植用于治疗淋巴系统恶性血液病

本研究探讨造血干细胞移植（HSCT）对恶性淋巴系统血液痛的疗效。通过8例非霍奇金淋巴瘤（NHL）及3例淋巴细胞白血病患者在前期化疗基础上进行造血干细胞移植，分别观察造血重建、并发症及生存期等指标，以了解造血干细胞移植对该类疾病的疗效。结果表明：HSCT后11例患者（其中自体移植7例，异基因移植4例）造血顺利恢复，均能达到完全缓解（CR）。随访3年，5例NHL患者无病生存，1例NHL患者于移植后2个月死亡．1例自杀；4例接受异基因造血干细胞移植的患者中，1例非霍奇金淋巴瘤（NK细胞型）移植后79天死亡，1例慢性淋巴细胞白血病患者无病生存，2例急性淋巴细胞白血病患者分剐于移植后第54天、第17个月死亡。结论：造血干细胞移植是治疗恶性淋巴系统血液疾病的一个有效手段，但自体HSCT的患者尚有一定的复发率，而异基因HSCT患者有可能因严重的移植相关并发症而死亡。     

血浆置换治疗异基因干细胞移植并发肝静脉阻塞病1例

患者,女,46岁。因“发现三系减少4 d”入院。患者于2002年3月发现右侧乳腺癌,在外院行手术,术后经化疗6疗程,此后自服三苯氧胺。于2004年9月24日发现三系减少,为进一步治疗入院。体检:T 37．1℃,P 80次／min,R 18次／min, BP 145／85 mmHg(1 mmHg=0．133 kPa)。入院     

骨髓增生异常综合征进展为急性白血病行自体造血干细胞移植1例

地西他滨对骨髓增生异常综合征有肯定疗效,目前已成为治疗该病的一线用药.但是,如果地西他滨治疗的效果不肯定,下一步治疗的选择至关重要.我院最近对1例地西他滨治疗后进展为急性白血病的患者进行了自体造血干细胞移植,取得良好效果.     

异基因造血干细胞移植后急性移植物抗宿主病临床研究

目的 探讨异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）后急性移植物抗宿主病（aGVHD）的发生及其危险因素.方法 总结2004年10月至2008年12月治疗的72例allo-HSCT患者的临床资料.回顾性分析患者各临床因素与aGVHD发生的关系.结果 32例患者发生Ⅰ～Ⅳ度aGVHD,累积发生率44.4%.其中Ⅰ度8例（11.1%）,Ⅱ度13例（18.1%）,Ⅲ度7例（9.7%）,Ⅳ度4例（5.6%）.单因素分析显示疾病种类、抗人类T淋巴细胞球蛋白（ATG）的应用、疾病状态、预处理方案、供者类型、供受者血型不合、回输CD34＋细胞数量、移植早期感染以及HLA配型均与aGVHD的发生有关（均P＜0.1）.多因素分析（COX regression）确定不含ATG的GVHD预防方案（HR=2.94,P＜0.001）、HLA配型不合（HR=2.58,P＜0.005）以及无关供者（HR=1.97,P＜0.01）是发生aGVHD的主要危险因素.结论 aGVHD是allo-HSCT的重要并发症,HLA配型不合以及无关供者是aGVHD发生的主要危险因素.     

异基因造血干细胞移植后全血细胞减少的脾切除治疗一例报告并文献复习

慢性粒细胞白血病 (CML)异基因造血干细胞移植后血细胞减少是较常见的并发症 ,其原因主要为移植物抗宿主病(GVHD)、自身免疫性疾病、脾脏因素、移植失败、巨细胞病毒(CMV)感染等 ,以往的研究主要关注移植前脾脏大小对造血恢复及复发的影响 ,而移植后脾切除对造血恢复以及完全嵌合状态 (CDC)形成的影响报道很少 ,我们报告 1例并结合文献进行复习。病例资料　　患者 ,男 ,4 2岁。因左上腹包块 3个月于 2 0 0 1年 12月 7日就诊 ,脾肋缘下 17cm ,血常规WBC 2 13× 10 9 L ,Hb 112g L ,BPC 5 4 3× 10 9 L。分类 :中幼粒细胞 0 .14 ,晚…