抗凋亡治疗骨髓增生异常综合征

目的:探讨抗凋亡治疗骨髓增生异常综合征(MDS)的疗效及疗效和骨髓细胞凋亡、TNF-α的关系。方法:采用形态学方法检测骨髓细胞凋亡;ELISA方法检测骨髓单个核细胞(BMMC)培养后上清液中TNF-α浓度。用己酮可可碱、环丙沙星和地塞米松(PCD)联合治疗MDS。结果:抗凋亡治疗MDS有效率48.15%(13/27),1例难治性贫血(RA)完全缓解(3.7%),3例RA(11.1%)血液学三系明显进步。3例PCD联合治疗持续10~54个月的RA,疗效维持10~36个月。抗凋亡治疗有效的患者治疗前TNF-α浓度和骨髓细胞凋亡指数较无效患者高,但这种差异无统计学意义(P>0.05),有效的患者治疗后的TNF-α和骨髓凋亡细胞指数较治疗前下降。结论:抗凋亡治疗适用于BMMC上清液TNF-α浓度和骨髓凋亡细胞指数较高的MDS患者,尤其适用于低危MDS患者。     

危急值全程信息化管理与持续改进

目的建立并持续改进基于医院信息化平台的危急值处置管理流程,控制影响因素,缩短处置周期,提高临床处置质量。方法整合信息系统与危急值相关的数据采集、阈值设置和报告应答的流程,实现危急值全程信息化管理。分析2014年3月和12月住院患者危急值处置数据变化,比较危急值处置持续改进前后的成效。结果 2014年12月与3月相比,标本采集用时中位数由15.3 min降到12.79 min,运送用时中位数由69.15 min降到45.61 min,检测用时中位数由31.25 min降到29.25 min,危急值应答用时中位数由2.80 min降到1.63 min(P0.01)。住院患者的急诊检验医嘱开立到危急值应答总用时中位数由160.55 min降到105.32 min(P0.01)。危急值临床处置率由89.71%上升为98.61%,处置病程记录完成率由70.59%上升为90.28%。结论在信息系统支持下实施急诊检验危急值全程管理,可有效控制危急值报告处置周期,改善临床处置效率和质量,提升医疗安全水平。     

5溴汉防己甲素逆转多药耐药的体内体外研究

本研究旨在探讨5一溴汉防己甲素（BrTet）和汉防己甲素（Tet）对K562／A02细胞多药耐药性的逆转作用。采用MTT法检测阿霉素（ADM）联合应用BrTet、TeL,对K562／A02细胞和K562细胞增殖的影响;采用流式细胞术（FCM）检测细胞内ADM浓度和P糖蛋白（P—gp）的表达;采用RT—PCR测定细胞mdrl基因mRNA表达水平。建立裸鼠皮下移植瘤模型,比较BrTet、Tet在体内的逆转耐药作用。结果发现,BrTet在0．25、0．5以及1μmol／L浓度条件下对K562／A02细胞多药耐药性的逆转作用呈剂量依赖性。流式细胞术检测提示,BrTet显著增加K562／A02细胞内ADM浓度,并呈剂量依赖性,同时抑制P—gp的表达,下调mdrl mRNA的表达。在荷瘤鼠模型中,BrTet明显增加ADM对K562／A02移植瘤的抗肿瘤作用,从单用ADM的5．8％上升至26．1％,而在K562移植瘤中没有显著差异。结论：BrTet在体内体外试验中均显示出显著的逆转MDR作用,其活性可能与抑制P—gp的过度表达和增加抗肿瘤药物的积聚有关。     

血小板衍生微粒对脐血粒巨噬祖细胞的促增殖作用

本研究探讨血小板衍生微粒(PMP)对脐血粒巨噬祖细胞集落形成单位(CFU-GM)的促增殖作用。采用不同浓度的凝血酶激活血小板释放出PMP,采用流式细胞术检测PMP的释放量,确定凝血酶的最佳实验浓度。应用Ficoll分离脐血单个核细胞(MNC),在含有不同浓度PMP的甲基纤微素半固体培养基中培养7天,观察CFU-GM集落形成情况。结果表明:2.0、1.5、1.0和0.5U/ml凝血酶激活血小板后的PMP释放率分别为:28.7%、47.7%、50.1%和43.9%;CFU-GM集落产率与PMP呈剂量依赖关系,PMP为10、50、100μg/ml时的CFU-GM集落产率(个/2×105MNC)分别为:119.8±32.2、142.8±45.2、180.8±85.1。50、100μg/mlPMP组的集落产率与空白对照组(103.0±24.8)相比,P值均<0.05;而10μg/mlPMP组的集落产率略高于空白对照组,但P值>0.05。结论:用1.0U/ml的凝血酶激活血小板释放的PMP较为均一,而且释放量最大。PMP可促进人脐血粒巨噬祖细胞的增殖。     

羟基喜树碱诱导人骨髓增生异常综合征细胞系MUTZ-1细胞凋亡及机制的研究

骨髓增生异常综合征（MDS）是造血干细胞克隆增生性疾病，近来发病率有上升趋势，需要不断探索有效的治疗药物。从珙桐科植物喜树中分离出的羟基喜树碱（HCPT）可诱导多种肿瘤细胞凋亡，对MDS的治疗未见相关报道。我们初步研究了HCPT对MDS细胞系MUTZ-1细胞的凋亡诱导作用及机制，以期为临床MDS治疗提供一定参考。     

非血缘异基因造血干细胞移植治疗恶性血液病的临床研究

目的：分析总结非血缘关系异基因造血干细胞移植（URD-HSCT）治疗恶性血液病的疗效、造血重建、并发症以及长期生存情况。方法：采用非血缘关系HLA配型相合的外周血造血于细胞对24例恶性血液病患者进行了移植,预处理方案采用改良的BU／CY方案;移植物抗宿主病（GVHD）的预防采用CsA联合MMF、MTX并加用ATG;PGE1预防肝静脉闭塞症。结果：Ⅰ～Ⅳ度aGVHD发生率为37．50％,cGVHD的发生率为41．66％。24例患者均获造血重建;移植相关死亡率为12．5％;随访时间为2～38个月,16例生存,8例死亡。结论：URD-HSCT能提供更快的造血功能恢复,GVHD的发生率有所增加,而移植相关死亡率并无明显增加,是目前治愈恶性血液病的有效方法,相当部分患者可通过移植获治愈,但移植后疾病复发仍是影响患者长期生存的主要因素之一,防治移植后复发仍是需要解决的重要课题。     

靶向mdr-1基因shRNA真核表达载体的构建与鉴定

本研究构建并鉴定靶向mdr-1基因的短发夹RNA(shRNA)真核表达载体。根据Genbank数据库提供的mRNA序列,选择设计3个能转录短发夹RNA(shRNA)的DNA序列,体外分别合成3对互补并编码mRNA基因的特异性shRNA序列的寡核苷酸,克隆到经BamHI和HindⅢ双酶切线性化的pGCsilencer人U6启动子质粒载体中;为了确定利用酶切和测序鉴定所构建的重组载体是否正确,采用脂质体转染的方法将构建好的3个重组载体(pGY1-1,pGY1-2,pGY1-3)导入慢性髓系白血病耐药细胞株K562/A02,采用实时PCR方法检测转染细胞的mdr-1基因表达,Western-blot检测P-gp表达量的变化。结果表明:应用PCR电泳图谱和测序证实了克隆RNAi打靶序列完全正确,而且该载体又同时表达GFP标记基因,用于测定转染效率。分别转染pGY1-1,pGY1-2,pGY1-3后K562/A02细胞的mdr-1基因表达和P-gp表达水平下降,证明shRNA可以特异性沉默mdr-1基因。结论:靶向mdr-1基因shRNA真核表达载体构建成功,为进一步研究mdr-1基因在K562/A02细胞中的作用奠定了实验基础。     

以尿苷二磷酸半乳糖为添加剂冷藏兔血小板的研究

本研究探讨以尿苷二磷酸半乳糖(UDP-Gal)为添加剂的血小板冷藏保存方法。采集兔心脏血,按常规方法制备浓缩血小板悬液(PC),在悬液中添加UDP-Gal,放4℃冰箱储存10天。尔后观察血小板(Plt)数量?血小板平均体积(MPV)、血小板体积分布宽度(PDW)?血小板聚集功能(PagT)?血小板促凝活性实验(PF3aT和APCT)和血小板凋亡(apoptosis)的变化。将冷藏兔血小板用Cr51标记后,检测输入兔体内后的血小板生存时间。结果表明加入UDP-Gal冷藏保存10天后的PC的Plt、MPV、PDW、血小板促凝血活性与新鲜PC相比均无显著性变化(P(0.05);而冷藏对照PC的Plt明显减少,MPV、PDW显著增大,血小板促凝血活性减低,与新鲜PC相比差异有显著性(P>0.01);加入UDP-Gal的PC冷藏保存10天后的血小板凋亡率与新鲜PC相比有所增高(P(0.05),但明显低于冷藏对照组(P(0.01),其血小板聚集率(诱聚剂为阳离子没食子酸丙酯,C-PG)减低,但仍能保持在新鲜血小板的50%以上。添加UDP-Gal时冷藏保存10天的血小板与新鲜的血小板在体内的生存时间相近(P(0.05),输注兔体内72小时时的血小板存活率在新鲜对照组、UDP-Gal冷藏保存组和冷藏对照组分别为57.5%±7.2%、50.3%±6.3%和0.1%±0.5%。结论尿苷二磷酸半乳糖对冷藏保存的兔血小板有保护作用,并能延长冷藏兔血小板在体内的生存时间。     

持续改进危急值临床处置及时性的探讨

“处置及时性”是危急值管理的一个重要切入点,其实现有赖于医务人员危急值处置的主观意识以及细化的处置流程。作者通过介绍该院强化危急值管理的工作思路,依据危急值管理重点将该项工作划分为医技科室危急值的及时处置、临床科室危急值的及时处置两个阶段。同时详述针对提高临床危急值处置工作重点,医院采取的质量管理方式,如根因分析、指标筛选、数据分析等。通过医院质量管理的持续改进,危急值上报的流程进一步完善,医务人员危急值管理知晓率显著提升,危急值接收登记率明显提高,医务人员处置危急值平均时间缩短,差异有统计学意义（P <0.05）。     

DC与CIK共培养对肝癌细胞杀伤活性的研究

本研究的目的是观察细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）与同源树突状细胞（DC）共培养后DC-CIK细胞的增殖活性、表型的变化,及其对肝癌细胞细胞毒作用的影响.采集健康供者的外周血单个核细胞（MNC）,置于37℃,5%CO2培养箱培养2小时,收集非贴壁细胞用于诱导培养CIK细胞,贴壁细胞诱导分化出成熟DC,将成熟DC和CIK细胞按1：5的比例混合培养3天,用MTT法检测DC-CIK共培养细胞杀伤SMMC-7721肝癌细胞株的活性.结果显示：DC与CIK细胞共培养后,DC-CIK细胞群的增殖活性和杀伤活性较单纯的CIK细胞更高.结论：DC与CIK共培养细胞是一种增殖活性和细胞毒活性均高于CIK细胞的免疫活性细胞.