口服耐受后过继转输动物模型的建立方法

目的:探讨经口服受鼠脾淋巴细胞诱导耐受的供鼠淋巴细胞输注是否能减轻移植物抗宿主病(GVHD).方法:以雄性DBA-2小鼠(H-2d)为供者,分别用BALB/C鼠脾淋巴细胞、DBA-2鼠脾淋巴细胞、牛血清蛋白、普通饲料隔天喂养,单向混合淋巴细胞反应(MLR)评估诱导耐受状态.以雌性BALB/C小鼠(H-2d)为受者,给予6.0 Gy 60Coγ射线全身照射,尾静脉输注来自于DBA-2小鼠的2×107脾淋巴细胞.结果:耐受供鼠cpm值低于非耐受组,接受已耐受供鼠脾淋巴细胞输注的受鼠,发生GVHD较其他组轻.结论:经口服耐受的过继转输动物模型的实验方法有效可行.     

雷帕霉素抑制小鼠骨髓移植后移植物抗宿主病作用的初步研究

目的:探讨新型免疫抑制药物雷帕霉素(RAPA)对小鼠异基因骨髓移植(allo-BMT)后急性移植物抗宿主病(aGVHD)的抑制作用,并与传统免疫抑制药物比较作用效果。方法:用主要组织相容性抗原(MHC)完全不合的纯种近交系小鼠[供鼠为雄性C57BL/6 J(H-2b)鼠,受鼠为雌性BALB/c(H-2d)鼠]建立allo-BMT/aGVHD动物模型,随机分5组,第1、2和3组分别给予RAPA、环孢菌素A(CsA)加甲氨蝶呤(MTX)、RAPA加CsA加MTX联合用药作为aGVHD抑制方案,第4组为空白对照,第5组为未移植组。观察各组小鼠骨髓移植后aGVHD的出现情况。结果:移植小鼠出现典型的aGVHD症状,未用aGVHD预防方案的移植小鼠(第4组)死亡高峰在移植后第5~7天,死亡率达100%。用不同aGVHD预防方案的第1~3组小鼠aGVHD症状明显减轻,平均生存时间(MST)较第4组显著延长(分别延长3.5、1.9和6.0 d,P<0.05)。不同aGVHD预防方案的移植小鼠之间,移植后外周血常规变化差异无显著性。经用各预防方案后,移植小鼠aGVHD病理表现减轻,且RAPA、CsA和MTX联合用药组的病理分级轻于RAPA单药组或CsA加MTX标准方案组。结论:RAPA可以显著抑制体外T淋巴细胞增殖效应,增强小鼠对骨髓移植的免疫耐受,对小鼠骨髓移植后移植物抗宿主病(GVHD)有明显抑制作用,可减轻GVHD症状和病理损害程度,延长平均生存时间。     

非清髓造血干细胞移植后致敏供者淋巴细胞输注对嵌合状态及GVHD影响的实验研究

本研究目的是探讨经受者皮肤致敏后的异基因供者淋巴细胞输注(DLI)是否能在促进形成完全供者嵌合(CC)的同时减轻移植物抗宿主病(GVHD)。以C57BL/6小鼠(H-2b,B6)为受者,于第0天接受60Coγ线全身照射(TBI),总剂量为5.5Gy,照射当天移植经粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员后的BALB/c小鼠(H-2d,BA)外周血干细胞(2×107个),移植后第2天腹腔注射环磷酰胺200mg/kg,并分别于移植后第28天输注致敏/未致敏的供者淋巴细胞2×106。结果显示,致敏后DLI的受鼠(黑色)无1例出现GVHD,60天时转变为完全供者嵌合,表型明显呈现为供鼠(白色)特征,CD4+/CD8+T淋巴细胞比值在DLI后早期下降,半月后有所升高,但仍低于正常水平;未致敏的DLI受鼠出现不同程度的GVHD,嵌合率稍有上升,仍表现为混合嵌合体(MC),CD4+/CD8+比值在DLI后早期升高,后期降至正常水平。结论:经受者皮肤致敏后的DLI在诱导CC的同时降低GVHD发病率,CD4+/CD8+比值与GVHD发病率间具有良好的相关性。