牙本质涎蛋白转基因小鼠的建立和转基因表达的初步分析

目的:构建牙本质涎蛋白(DSP)转基因小鼠,并对转基因表达进行初步RT-PCR分析。方法:将pcDNA3.1载体中的CMV启动子替换为启动子cβ-actin,构建载体pcDNA3.1-CX,然后将PCR获得的DSP基因编码序列克隆到pcDNA3.1-CX中,构建DSP转基因载体pcDNA3.1-CX-dsp;将线性化的载体DNA注射到小鼠受精卵的雄原核,将受精卵移植到假孕母鼠的输卵管。仔鼠出生后,用PCR及Southern印迹检测阳性小鼠,并用RT-PCR对其中一小鼠的F1代进行转基因表达分析。结果:共移植717枚注射过的受精卵至29只受体鼠,移卵后产仔67只,阳性4只。检测到53号小鼠F1代外源性DSP的表达。结论:通过显微注射方法,成功获得了DSP转基因小鼠,并证实外源性DSP可在53号小鼠F1代获得表达。     

系统观在龋病病因研究中的体现

龋病病因是口腔医学爱们多年来的探索重点之一,20世纪．60,70年代提出的“四联因素”学说已被逐步证实,并逐渐得到公认,因为它是在系统观点的指导下形成的,本文就龋病病因学理论中的系统观点进行了较为详细的分析与阐释。     

ProPex根管测量仪测量磨牙牙齿操作长度准确性的临床评价

目的：评价分析ProPex根管测量仪测量磨牙牙齿操作长度的准确性.方法：选择116例根管治疗术的患者共130个磨牙383个根管,分为3组.A组：因根管欠充须再治疗者30个牙91个根管;B组：因修复治疗需要去髓术者46个牙130个根管;C组：慢性根尖周炎54个牙162个根管.以Propex测量牙齿操作长度.按此长度预备并充填根管,即刻拍摄X线片,观察并测量根管充填情况.结果：ProPex测量磨牙牙齿操作长度的准确率：A组86.8%,B组96.2%,C组85.8%.结论：ProPex可以比较准确地测量磨牙牙齿操作长度.     

牙齿修复相关转基因研究：显微注射法获得pTet-on-CX转基因工具小鼠G0代的实验观察

目的：为便于进行规模化的转基因研究，构建一种四环素调控性转基因体系中的工具小鼠系。方法：实验于2002—06／10在上海南方模式生物研究中心完成。以cβ—actin启动子取代pTet—on—NSE质粒中的NSE启动子，构建转基因载体pTet-on-CX；将XhoⅠ酶切线性化的载体DNA注射到小鼠受精卵的雄原核，移植到假孕母鼠的输卵管。仔鼠出生后，经PCR及Southern Blotting检测阳性小鼠。结果：注射的受精卵共存活603枚，移卵后产仔64只，阳性6只。阳性鼠分别传代开始建系。结论：通过显微注射的方法获得pTet—on—CX转基因工具小鼠的G0代，为规模化的转基因研究(包括与牙齿修复有关的基因，如牙本质涎磷蛋白基因)奠定了基础。     

GBT指导下的定期维护对伴2型糖尿病的牙周炎治疗疗效的影响

目的 评价以菌斑为导向的牙周治疗方案（GBT）指导下的甘氨酸龈下喷砂在伴2型糖尿病的牙周炎进入牙周维护期的临床应用效果。方法 选取伴2型糖尿病的牙周炎患者30例,基础治疗后按是否定期维护治疗筛选出15例不定期维护患者为A组、15例定期维护患者为B组,记录菌斑指数（plaque index, PLI）、探诊深度（probing depth, PD）、探诊出血阳性位点百分比[bleeding on probing, BOP(+)%]及临床附着丧失（clinical attachment loss,CAL）,比较两组基础治疗前、治疗后1个月以及1年后最后一次就诊时各项牙周指标,同时计算两组失牙率。结果 与基础治疗前相比,治疗后1个月和1年后两组各项指标均有显著改善（P<0.05）;治疗1年后,B组与A组相比较,各项指标之间有显著性差异（P <0.05）;两组患者1年后最后一次就诊时,A组失牙率高于B组,但没有统计学差异（P> 0.05）。结论 GBT指导下的定期维护能清除伴2型糖尿病牙周炎患者的龈下菌斑,并有效控制牙周炎症,值得推广。     

变形链球菌葡聚糖结合蛋白C基因特异片段的克隆和在大肠杆菌中的表达

目的：克隆变形链球菌葡聚糖结合蛋白C基因（Glucan-binding protein C gene,gbpC）编码序列的特异片段,并在大肠杆菌中实现原核表达。方法：根据gbpC序列设计并合成一对寡核苷酸引物,PCR扩增位于gbpC编码序列1342bp～1794bp间的一段特异片段,扩增产物经回收、酶切后,定向插入克隆载体puc18中,连接产物转化感受态大肠杆菌DH5a,挑选阳性克隆,鉴定后进行序列测定。将克隆获得的约0．45kb的gbpC基因特异片段经EcoRI／SalI双酶切后,定向插入pGEX-4T-1中,构建pGEX-4T-1／gbpCE原核融合表达载体,转化感受态大肠杆菌DH5α,挑选阳性克隆,酶切及PCR鉴定后,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（Isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPTG）诱导表达融合蛋白GST-GbpC^E,SDS-PAGE检测表达产物。结果：测序结果与Sato等报道的序列一致;原核表达后,在SDS-PAGE凝胶上出现一条新生蛋白条带,其相对分子量约43000,与预计大小相符合。结论：成功克隆并表达gbpC特异片段,获得了融合蛋白GST-GbpC^E,为制备GbpC抗体打下了基础。     

牙本质涎蛋白转基因小鼠的构建

目的 构建小鼠牙本质涎蛋白（DSP）转基因小鼠。方法 将pcDNA3．1载体中的CMV启动子替换为启动子cβ-actin，构建戴体pcDNA3．1-Cx。然后将PCR获得的DSP基因编码序列克隆到pcDNA3．1-Cx中。构建DSP转基因戴体peDNA3．1-Cx-dsp；将线性化的载体DNA注射到小鼠受精卵的雄原核，受精卵移植到假孕母鼠的输卵管。仔鼠出生后，用PCR及Southernblot检测阳性小鼠。结果 共移植717枚注射过的受精卵至29只受体鼠，移卵后产仔67只，阳性4只。阳性鼠分别传代。开始建系。结论 通过显微注射的方法成功获得了DSP转基因小鼠。     

两种方法比较3种根管封闭剂体外抗菌效果的研究

目的:比较3种根管封闭剂的抗菌效果。方法:直接接触(DCT)实验:将封闭剂AH-plus(A)、Gutta Flow(B)、iRoot SP(C)分别放入离心管中,分别于20 min和1、7、14、21 d取出,与粪肠球菌混合1 h后,进行细菌计数。感染根管模型(IRCM)实验:将成功建立感染根管内粪肠球菌模型的100个离体单根管人牙,随机分为A、B、C 3个实验组和1个阳性对照组(n=25)。根管预备充填后,将所有样本置于厌氧环境中分别培养20 min和1、7、14、21 d,每组于各时间点分别随机取出5个样本,收集充填材料和牙本质粉末进行细菌培养计数,并分别检测3种封闭剂的pH值。结果:在DCT中,A、C组与对照组相比,除20 min和1 d时能有效杀灭细菌(P<0.05)外,其他时间点均无统计学差异(P>0.05);A、C组比较P>0.05;B组在各时间点均抗菌效果差(P>0.05)。在IRCM实验中,A、C组抗菌效果的时间较DCT延长,与对照组相比C组除了在21 d抗菌性较差外,在其他各时间点均有较强的抗菌性(P<0.05);A组在20 min和1、7 d时均有较强的抗菌性(P<0.05);而B组在各时间点抗菌效果均较差(P>0.05)。C组在各时间点p H值最高(P<0.05),A、B组pH值比较,P>0.05。结论:pH的高低与封闭剂的抗菌性无直接对应关系。AH-plus和iRoot SP抗菌效果优于Gutta Flow。     

人骨涎蛋白在大肠杆菌中的表达

目的在大肠杆菌中表达骨涎蛋白(BSP).方法构建BSP-PBV220表达载体,重组子以大肠杆菌DH5α为宿主菌进行诱导表达.结果工程菌经4h42℃热诱导后,在SDS-PAGE电泳上出现了一条新的蛋白带,Mr为33×103～35×103.结论BSP在大肠杆菌中得到了表达,其Mr为33×103～35×103,为进一步蛋白纯化及抗体制备奠定了基础.