胚胎大鼠神经干细胞分离培养及基因转染研究

以低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1,HIF-1α)基因重组腺病毒体外转染胚胎大鼠神经干细胞,建立能稳定表达HIF-1α的基因工程化神经干细胞,为进一步的实验研究提供理论和物质基础.方法 ①分离SD大鼠胎鼠的间脑,加入神经生长因子EGF、bFGF和B27的神经干细胞务件培养基中克隆培养.通过检测神经干细胞的特异性抗原神经巢蛋白(nestin)、自我增殖能力和分化能力来鉴定神经干细胞;②用含有HIF-1α基因的腺病毒感染培养第2代的神经干细胞,通过绿色荧光蛋白的表达证明转染基因的表达,Western-blot检测转染后HIF-1α蛋白表达的变化,免疫原位杂交检测转染后HIF-1αmRNA 阳性细胞.结果 ①分离培养出了大量具有不断增殖能力的神经干细胞;②70%～80%的神经干细胞能感染HIF-1α基因重组腺病毒,Western-blot和免疫原位杂交实验显示HIF-1α蛋白大量表达.结论 成功建立了神经干细胞的分离培养方法及能长期稳定表达HIF-1α的基因工程化神经干细胞.     

神经干细胞移植对大鼠脊髓损伤后轴突再生及后肢运动功能的影响

目的：研究神经干细胞（NSCs）移植对大鼠脊髓损伤（SCI）后轴突再生及后肢运动功能的影响,为NSCs移植治疗SCI提供实验依据。方法：5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）法标记处于对数生长期的NSCs,采用电控SCI打击装置制作大鼠SCI模型。设立NSCs移植组、SCI组、假手术组各10只。NSCs移植组大鼠SCI后3d进行NSCs移植。应用免疫组织化学染色观察BrdU标记的移植细胞的存活、迁移情况以及NR200的表达,采用行为学（BBB）评分法观察大鼠后肢运动功能的恢复情况。结果：NSCs移植组在移植区域及其邻近区域可检测到BrdU阳性NSCs;NF200免疫阳性细胞平均光密度值较SCI组明显增高（P〈0．05）;NSCs移植组术后第28天NF200免疫阳性轴突数目较SCI组明显增多（P〈O．01）;BBB评分亦明显高于SCI组（均P〈0．05）。结论：体外培养的胚胎大鼠NSCs在移植到SCI区域后可存活、迁移,参与了SCI处神经轴突的结构重建,可促进大鼠后肢运动功能恢复。     

胎鼠神经干细胞移植对大鼠脊髓损伤后神经元特异性烯醇化酶和皮质体感诱发电位的影响研究

目的研究神经干细胞(NSCs)移植对大鼠脊髓损伤(SCI)后神经元特异性烯醇化酶(NSE)和皮质体感诱发电位(CSEP)的影响。方法将40只SD大鼠随机分为5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)+NSCs组、NSCs组、SCI组和假手术组(Sham组),采用电控SCI打击装置制作模型,Brdu法标记处于对数生长期的NSCs,SCI后即刻进行NSCs移植。CSEP监测神经电生理的恢复,苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠脊髓细胞形态的变化,免疫组织化学法观察Brdu标记NSCs的存活、迁移以及NSE的表达。结果 4组间各时间点皮质体感诱发电位-P波(CSEP-P)潜伏期比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。Sham组和SCI组各时间点间比较,差异均无统计学意义(P>0.05);而Brdu+NSCs组和NSCs组各时间点间比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。其中SCI组、NSCs组和Brdu+NSCs组各时间点CSEP-P潜伏期与Sham组比较,差异均有统计学意义(P<0.01);NSCs组和Brdu+NSCs组除第1天外余各时间点与SCI组比较,差异均有统计学意义(P<0.01);Brdu+NSCs组与NSCs组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。4组间各时间点NSE免疫阳性细胞灰度值及阳性细胞数比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。Sham组各时间点间比较,差异无统计学意义(P>0.05);而SCI组、Brdu+NSCs组和NSCs组各时间点间比较,差异均有统计学意义(P<0.01);其中SCI组、NSCs组和Brdu+NSCs组各时间点NSE免疫阳性细胞灰度值及阳性细胞数与Sham组比较,差异均有统计学意义(P<0.01);NSCs组和Brdu+NSCs组除第1天外余各时间点与SCI组比较,差异均有统计学意义(P<0.01);Brdu+NSCs组与NSCs组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。NSE免疫阳性细胞灰度值及阳性细胞数与CSEP-P潜伏期均呈负相关(r=-0.937,P<0.001;r=-0.956,P<0.001)。结论体外培养的NSCs移植到SCI区域后可存活、迁移,且能明显上调SCI后NSE的表达,并能通过促进NSE的表达而缩短CSEP-P潜伏期,从而促进大鼠后肢功能障碍的恢复。     

逍遥降压功对原发性高血压降压效果的临床观察

目的:观察逍遥降压功对原发性高血压患者血压及相关因素的影响.方法:将56例60岁以上自愿练功的原发性高血压患者随机分为治疗组、对照组,分别给予练功 服药和单纯服药治疗,共24周,观察练功前后血压、心率、握力、臂力、体质量、腰臀比及智能生理年龄变化情况.结果:原发性高血压患者在习练逍遥降压功后,患者收缩压、舒张压水平及心率较练功前降低(P<0.01),比对照组治疗后的收缩压、舒张压水平及心率显著降低(P<0.05);习练逍遥降压功后,握力、臂力显著增加(P<0.01),且智能生理年龄测试显示,练功前后有显著变化(P<0.01).结论:习练逍遥降压功有明显的降低血压、减慢心率作用.     

胚胎大鼠神经干细胞的分离培养及鉴定研究

目的建立胎鼠神经干细胞体外培养方法并鉴定神经干细胞,观察神经干细胞生长特点。方法采用含碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子的无血清培养基对大鼠胚胎间脑组织细胞悬液进行培养。通过检测神经干细胞的特异性抗原、神经干细胞的自我增殖能力和分化能力来鉴定神经干细胞。结果分离培养出了大量具有不断增殖的能力、表达神经巢蛋白的神经干细胞,并能经过诱导分化为神经元和神经胶质细胞,并能稳定传代20代以上。结论无血清培养基分离培养的胎鼠脑组织神经干细胞具有自我更新和增殖能力,巢蛋白细胞免疫荧光鉴定为神经干细胞,成功建立了大鼠神经干细胞的分离培养方法。     

胎鼠神经干细胞移植对大鼠脊髓损伤后神经红蛋白及半胱氨酸蛋白酶-3表达的影响

目的研究胎鼠神经干细胞(NSCs)移植对大鼠脊髓损伤(SCI)后神经红蛋白(Ngb)及半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)表达的影响。方法 40只SD大鼠随机分为正常对照组(Normal组)、脊髓损伤组(SCI组)、神经干细胞组(NSCs组)、神经干细胞标记组(BrdU+NSCs组)。采用电控SCI打击装置制作模型,5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)法标记处于对数生长期的NSCs,SCI后即刻进行NSCs移植。免疫组化法观察BrdU标记NSCs的存活、迁移及Ngb和caspase-3的表达,改良Rivlin法观察大鼠后肢运动功能的恢复情况。结果 BrdU+NSCs组在损伤脊髓区域可检测到BrdU标记的阳性NSCs。BrdU+NSCs组和NSCs组各时间点caspase-3免疫阳性细胞光密度值均比SCI组减少(P<0.01),Ngb免疫阳性细胞光密度值比SCI组明显增加(P<0.01),且Ngb表达高峰延长至伤后第14天;移植后第7、14、28天,后肢运动功能评分比SCI组明显升高(P<0.01)。BrdU+NSCs组与NSCs组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论体外培养的胚胎大鼠NSCs可在SCI区域存活、迁移,并能通过上调Ngb的表达来抑制大鼠SCI后神经细胞的凋亡,从而促进大鼠瘫痪肢体功能的恢复。     

丁苯酞对时间窗3~4.5 h急性脑梗死rt-PA静脉溶栓后出血性转化的影响

目的:观察丁苯酞对时间窗3~4.5 h急性脑梗死(ACI)重组组织型纤溶酶原激活物(rt-PA)静脉溶栓后出血性转化(HT)的影响。方法:164例发病3~4.5 h ACI患者随机分为对照组(82例)和观察组(82例)。对照组于影像检查确诊后即刻给予rt-PA静脉溶栓及常规治疗,观察组在对照组的基础上加用丁苯酞氯化钠注射液25 mg/100 mL,于影像检查确诊后即刻静脉滴注,bid。2组均连续治疗14 d。于治疗前和治疗14 d后分别检测2组患者的炎症反应指标[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)]、氧化应激指标[丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)]和血管内皮功能指标[一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)],HT相关指标[基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、血管内皮生长因子(VEGF)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)及血浆细胞纤维连接蛋白(c-Fn)],评定神经功能缺损评分(NIHSS)和日常生活能力Barthel指数量表评分(MBI),监测药物的不良反应。结果:治疗14 d后,观察组的临床疗效优于对照组(Z=-1.977,P=0.048);观察组的总有效率高于对照组(χ^2=4.432,P=0.035);治疗14 d内,观察组患者HT发生率低于对照组(χ^2=4.571,P=0.033);治疗14 d后,2组患者的TNF-α、IL-6、MDA、ET-1、MMP-9、c-FN、NSE水平及NIHSS评分均较治疗前显著降低(均P<0.01),SOD、NO、VEGF水平及MBI评分较治疗前显著升高(均P<0.01),而观察组较对照组改善更显著(P<0.01或P<0.05)。2组不良反应发生率比较差异无显著性(χ^2=0.084,P=0.773)。结论:丁苯酞对时间窗3~4.5 h的ACI患者安全有效,可降低HT发生率,改善预后,抗炎、抑制氧化应激损伤及改善血管内皮功能可能为其作用机制。     

继发与不继发糖尿病的肢端肥大症型垂体腺瘤患者的临床比较分析

目的：比较分析继发与不继发糖尿病的肢端肥大症型垂体腺瘤患者的临床资料,初步探讨肢端肥大症垂体腺瘤继发糖尿病的可能病理免疫学机制。方法回顾性分析2008年1月至2013年6月济宁医学院附属医院神经外科采用单鼻孔直达蝶窦入路显微手术切除的84例肢端肥大症垂体腺瘤患者的临床资料,运用免疫化学发光法测定术前基础血生长激素（GH）水平,使用多田公式（xyz／2）计算MRI上肿瘤体积,采用免疫组织化学的方法检测肿瘤内分泌激素的表达,采用χ2或t检验比较继发与不继发糖尿病的肢端肥大症垂体腺瘤患者在发病年龄、性别、发病时间、瘤体大小、基础血GH水平以及肿瘤激素免疫反应等方面的差异。结果20例（24％）肢端肥大症垂体腺瘤患者继发糖尿病。继发和不继发糖尿病的肢端肥大症垂体腺瘤患者男女均可发病（χ2＝1.944,P＝0.163）,发病年龄多集中在41～50岁（P＝0.652）,MRI显示瘤体大小均有微腺瘤、大腺瘤、巨大腺瘤,差异均无统计学意义（P＝1.000）;发病时间分别集中在1～5年（55％）、6～10年（45％）,差异有统计学意义（P＝0.004）;术前基础血GH水平分别为（42.83±8.70）ng／ml、（38.91±36.46）ng／ml,差异有统计学意义（t＝5.253,P＝0.031）。继发糖尿病的肢端肥大症垂体腺瘤患者促甲状腺激素（TSH）免疫反应平均光密度值（0.545±0.023）明显高于不继发糖尿病者（0.408±0.019）,差异有统计学意义（t＝5.336,P＝0.001）;TSH免疫反应阳性率（70％）亦明显高于不继发糖尿病的肢端肥大症患者（14％）,差异有统计学意义（χ2＝23.971,P＝0.000）。结论继发与不继发糖尿病的肢端肥大症垂体腺瘤患者在发病年龄、性别、瘤体大小方面无明显差别,但二者在发病时间、术前基础血GH水平及肿瘤病理免疫反应方面存在明显差别,肿?     

一起恙虫病暴发流行的调查报告

一起恙虫病暴发流行的调查报告陈龙宝１田福建１王显军２孙桐２杜宪刚１马连赞１李忠２林增良２黄捷通２孔令胜３王德泉３程万春３１９８６年山东省五连县首次在江北报告了恙虫病病例，１０年后距该县２００余ｋｍ的济宁市任城区发生一起恙虫病暴发流行。１资料与方法１?..     

中风后遗症肾虚痰瘀大鼠模型的建立

目的建立一种符合中医理论的中风后遗症"肾虚痰瘀"大鼠模型.方法在复制大鼠大脑中动脉梗死模型的基础上,根据中医"恐伤肾"及"过食肥腻滋生痰浊"的理论,采用猫吓鼠法及高脂饮食法制作"肾虚痰瘀"病理模型.结果模型组和模型对照组大鼠均出现了偏瘫症状,同时模型组大鼠还出现了中医肾虚痰瘀的证候特点:毛发卷曲黯淡无泽、精神萎靡、反应迟钝、嗜睡、表情惊恐,饮水减少,二便失禁(粒次数增多、粪便颗粒变小);生化指标也出现了相应的改变:模型组血脂含量及血液流变学指标均显著高于模型对照组(P ＜0.01和0.05),模型组脑组织及血浆MDA含量[脑组织MDA(165.27±7.61)nmol/g;血浆MDA(155.27±7.53)nmol/g]也显著高于模型对照组[脑组织MDA(153.94±5.73)nmol/g;血浆MDA(153.89±5.67)nmol/g](P ＜0.05),模型组脑组织及红细胞SOD活性[脑组织SOD(72.44±0.55)Nu/mg;红细胞SOD(60.44±0.55)抑制%]均显著低于模型对照组[脑组织SOD(79.97±0.43)Nu/mg;红细胞SOD(64.97±0.34)抑制%](P ＜0.05).结论本方法可成功制作中风后遗症"肾虚痰瘀"大鼠模型,该模型可作为研究中风后遗症的实验基础.