全外显子组测序技术在产前诊断中应用的专家共识

大规模的前瞻性研究表明,在染色体核型和染色体拷贝数分析均未见异常的胎儿中,产前全外显子组测序(whole exome sequencing,WES)可将结构异常胎儿的诊断率提高8.5%~10%。产前WES目前已经在国内外逐步开展,但由于胎儿表型评估的局限性、产前诊断的预测性质以及伦理学问题等,如何合理、规范地应用产前W...     

DNA甲基化PCR引物的设计

DNA甲基化是哺乳类动物一个重要的基因外遗传信号。有研究表明,DNA甲基化与大多数肿瘤的发生相关,抑癌基因启动子CpG岛的高甲基化可引起抑癌基因表达沉默,细胞出现无节制生长,导致肿瘤的发生[1]。目前,甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MS-PCR)是研究DNA甲基化最为常用且准确度较高的方法之一,而理想的引物设计则是其成功的关键因素之一。国外互联网上有1个提供免费在线引物设计程序“MethPrimer”,它能够预测CpG岛,根据实验者要求设计硫化测序PCR(bisulfate-sequencing PCR,BSP)和甲基化特异性PCR(methylation-sp…     

乳腺癌细胞中PNRC基因启动子区CpG岛甲基化状态的研究

目的 研究乳腺癌细胞中富含脯氨酸核受体辅活化子(proline-rich nuclear receptor coactivator protein,PNRC)基因启动子CpG岛的甲基化状态及在PNRC转录调节中的作用.方法 应用PT-PCR检测PNRC基因在正常乳腺细胞与乳腺癌细胞中的表达情况,并运用"MethPrimer"软件对PNRC启动子区进行分析,预测CpG岛,通过甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)检测PNRC启动子区CpG岛的甲基化状况;PT-PCR及Northern杂交检测乳腺癌细胞经甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-dc)作用后,PNRC基因mRNA的表达情况;Westernblot检测5-Aza-dc干预对PNRC蛋白表达的影响;将含PNRC启动子序列的报告质粒转染乳腺癌细胞,再经5-Aza-dc处理后,检测PNRC基因启动子的活性.结果 PNRC基因在乳腺癌细胞中的表达较正常乳腺细胞明显降低;乳腺癌细胞PNRC基因启动子区存在CpG岛甲基化;乳腺癌细胞经5-Aza-dc处理后,PNRC基因mRNA及蛋白表达水平显著增加,其PNRC基因启动子的活性也明显增强.结论 PNRC基因启动子区的高甲基化导致PNRC在乳腺癌细胞中表达降低.     

X连锁隐性遗传脑肌酸缺乏综合征1型1家系基因检测与产前诊断

目的 分析脑肌酸缺乏综合征(cerebral creatine deficiency syndrome, CCDS)1型1家系的致病基因突变情况,并进行产前诊断。方法 采集先证者及其父母外周血提取基因组DNA,采用靶向捕获方法对基因组全部外显子区域进行测序,经比对分析发现可疑变异位点,采用Sanger测序法进行验证。明确致病变异后,采集母亲羊水,进行产前诊断并随访。结果 先证者存在SLC6A8基因(NM＿005629) c.1631C>T错义变异,该突变可导致其编码的544位脯氨酸被异亮氨酸代替;先证者母亲存在SLC6A8基因c.1631C>T杂合变异;先证者父亲SLC6A8基因c.1631C>T位点为野生型。Sanger测序显示,胎儿SLC6A8基因c.1631C>T位点为野生型。出生后随访3个月,发育正常,未见CCDS 1型表型。结论 SLC6A8基因c.1631C>T错义变异是该CCDS 1型家系的致病原因,基因诊断和产前诊断可有效降低生育CCDS 1型患儿的风险。     

X-连锁隐性遗传性鱼鳞病家系的致病基因检测

目的分析1个X-连锁隐性遗传性鱼鳞病(X-linked ichthyosis, XLI)家系的致病基因。方法收集1个XLI家系4例患者及21例表型正常者外周血,提取基因组DNA后,采用微阵列比较基因组杂交技术检测4例患者基因组重复或缺失,采用二代测序法检测先证者基因突变情况,采用实时荧光定量PCR技术对该家系4例患者、21例表型正常者及100例健康对照组人群胎盘类固醇硫酸酯酶(placental steroid sulfatase, STS)基因可疑突变进行验证。结果微阵列比较基因组杂交技术显示XLI家系4例患者均未检测到与XLI相关的200 kb以上基因组重复或缺失;二代测序结果显示先证者STS基因第10外显子缺失突变;实时荧光定量PCR结果示4例患者STS基因第10外显子为半合子缺失突变,Ⅲ:3、Ⅲ:4、Ⅲ:8及Ⅳ:5 STS基因第10外显子为杂合缺失突变,该家系余成员及100例健康对照人群均未发现STS基因第10外显子缺失突变。结论 STS基因第10外显子缺失突变可能是该XLI家系的致病机制,二代测序联合荧光定量PCR是XLI家系致病基因诊断的准确、高效方法。     

医学院校生物化学课程中糖脂代谢章节的教学探讨

糖脂代谢是生物化学课程中的重点、难点内容之一。从概括代谢的学习规律和特点，提出学习方法；针对每章或节设计问题，引起学生注意，激发学习兴趣；指出每一节的目的和意义，使学生从整体上把握学习内容等方面进行了教学探讨，期望能使学生在有限的时间内较好地、全面地、系统地掌握糖脂章节的相关知识。     

建立兔高脂血症模型及动脉粥样硬化斑块的方法

目的 探索短时间内建立兔高脂蛋白血症模型及动脉粥样硬化斑块的方法。方法 用高胆固醇饲料喂养法与免疫反应损伤法结合制备兔高脂蛋白血症模型。酶标法测定血甘油三脂（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL－C）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL－C）的含量。分别于高脂饲养前、第3周和第6周测定上述指标。并于第6周后作形态学观察。结果 饲养3wk后,血清中TC、TDL明显升高（P＜0．01）。饲养6wk后肉眼及光镜下均可见典型动脉粥样斑块。结果 此法能短时间内建立免高脂蛋白血症模型。     

果柚对爱兔实验性高脂血症的降血脂作用

目的：观察果柚对家兔实验性高脂血症的影响。方法：将24只家兔随机分为正常对照组、模型组、果柚组和橙皮甙组,每组6只。正常对照组给予普通饲料,模型组给予高脂饲料喂养,实验组在喂高脂饲料的同时,分别加果柚汁或橙皮甙一同喂养。每组在实验前缘静脉注射牛血清白蛋白。实验3wk及6wk后耳缘静脉取血,检测血脂水平。结果：实验3wk及6wk后,果柚组及橙皮甙组与模型组比较,动物血清总胆固醇（serum total chloesterol,TC）明显降低（P＜0．01）,甘油三酯（triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoproteim cholesterol,LDL-C)也有显著降低（P＜0．05）,高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)无显著性差异（P＞0．05）。结论：果柚、橙皮甙能降低血清TC、TG、LDL－C水平。