寻找基因转染人脂肪来源的成体干细胞合适载体：脂质体介导质粒pEGFP-N1、重组腺病毒Ad5-EGFP与重组腺相关病毒rAAV-2／1-EGFP

目的:观察脂质体介导质粒pEGFP-N1、重组腺病毒Ad5-EGFP、重组腺相关病毒rAAV-2/1-EGFP基因转染人脂肪来源成体干细胞后增强型绿色荧光蛋白的表达及细胞毒性,探讨适用于脂肪来源的成体干细胞的转基因方法。方法:实验于2006-01/07在国家人类基因组北方中心和北京大学第三医院完成。全髋关节置换术患者的皮下脂肪由北京大学第三医院骨科提供,均征得患者及其家属同意。pEGFP-N1(Clotech公司),Ad5-EGFP,rAAV-2/1-EGFP(本元正阳公司)。②自成人皮下取少量脂肪组织,经机械剪切及Ⅰ型胶原酶消化后获取脂肪来源的成体干细胞,体外培养扩增。③采用脂质体介导质粒pEGFP-N1、重组腺病毒Ad5-EGFP、重组腺相关病毒rAAV-2/1-EGFP3种转染方法,观察增强型绿色荧光蛋白的表达及对细胞毒性的影响。④细胞转染后24h,将5×104细胞悬液接种于24孔板中,每周换液3次,绘制细胞生长曲线。以正常未转染细胞作为正常对照。观察不同转染方法对细胞增殖的影响。结果:①不同转染方法的感染效率比较:pEGFP-N1脂质体转染后细胞毒性较大,且感染效率低,仅为10.5%。重组腺病毒Ad5-EGFP转染率高,当感染复数为5×102时,感染效率达82.5%;当感染复数低于1×103时,对细胞无明显损害。重组腺相关病毒rAAV-2/1-EGFP转染法不能有效感染人脂肪来源的成体干细胞。②不同转染方法对细胞增殖的影响:重组腺病毒Ad5-EGFP转染和重组腺相关病毒AAV-2/1-EGFP转染人脂肪来源的成体干细胞后,对细胞增殖能力无明显影响,基本同正常对照细胞(P>0.05)。而pEGFP-N1脂质体转染后细胞增殖能力较正常对照明显下降,转染后3～10d差异有显著性意义(P<0.05)。结论:重组腺病毒Ad5-EGFP可作为一种高效的脂肪来源成体干细胞的示踪工具,提示5型复制缺陷型腺病毒是其合适的转基因载体。     

聚乙烯醇水凝胶弹性体复合物修复关节软骨缺损的实验研究

目的：研究应用聚乙烯醇水凝胶弹性体复合物作为关节软骨替代物修复成年犬的关节软骨缺损。方法：取8只成年犬随机均分为A、B两组，每组4只。在犬双后肢膝关节股骨内髁负重面制造软骨缺损区，在缺损区植入同等大小的聚乙烯醇水凝胶弹性体复合物。手术后8周和24周分别将A、B两组实验动物处死取材。在肉眼和光镜下观察植入物周围的软骨和软骨下骨，对应的半月板和胫骨面的软骨组织。结果：大体观察，实验动物术后关节功能良好，植入物在8周和24周均未见松动和脱落，与软骨下骨牢固结合。植入物周围软骨和对应部位的半月板和胫骨面软骨未见退变表现。光镜下观察8周和24周植入物周围未见软骨组织退变表现；软骨下骨组织长入钛纤维网孔隙中，形成生物力学固定；植入物周围无淋巴细胞浸润。结论：聚乙烯醇水凝胶弹性体具有与关节软骨类似的物理特性和良好的生物相容性，能作为关节软骨替代物修复关节软骨的缺损，恢复关节面的完整，维持关节功能。     

脂肪间充质干细胞的基本生物学特性及其向成骨细胞分化的特征

背景最早研究的是骨髓来源的间充质干细胞.由于脂肪组织与骨髓同为中胚层起源的组织,那么能否从脂肪组织中获得间充质干细胞,而且也具有多分化潜能呢?目的研究脂肪间充质干细胞的基本生物学特性以及在特定培养条件下向成骨细胞分化,探讨其作为骨组织工程的种子细胞的可行性.设计以细胞为研究对象的随机对照实验.单位北京大学第三医院骨科.对象实验于2002-10/2004-01在北京大学第三医院骨科完成,实验对象为从Lewis大鼠脂肪组织中提取的间充质干细胞.方法取3周龄Lewis大鼠的腹股沟脂肪垫,消化法获得脂肪间充质干细胞,分别用脂肪诱导培养基和成骨诱导培养基诱导其向脂肪细胞与成骨细胞分化,组织化学染色、免疫细胞化学染色和Western blotting检测细胞分化的情况.主要观察指标脂肪间充质干细胞的形态学和生物学特性,以及成骨诱导后成骨细胞特异性标志.结果从成体大鼠脂肪组织中培养出脂肪间充质干细胞,体外培养呈成纤维细胞样,能大量稳定增殖传代.原代脂肪间充质干细胞能自发分化为脂肪细胞,传代细胞在胰岛素和地塞米松的作用下生成脂滴,过氧化物酶体增殖物激活受体?表达增强,向脂肪细胞分化;在地塞米松、抗坏血酸、?-甘油磷酸钠的诱导下,碱性磷酸酶活性检测显示诱导组与对照组差异有显著性意义(P＜0.01),yon Kossa染色出现钙结节,骨桥蛋白免疫细胞化学染色阳性,Western blotting检测到诱导后细胞骨桥蛋白的表达.结论从脂肪组织中可获得具有多分化潜能的间充质干细胞,经诱导后可分化为脂肪细胞和成骨细胞,有可能成为骨组织工程较理想的种子细胞之一.     

保留髌骨膝关节置换的症状及影像学评价☆

背景：膝关节置换中是否置换髌骨是一个持续争论的话题。 目的：侧重评价保留髌骨膝关节置换后髌骨的影像学稳定性和症状改善。 方法：对39例(48膝)骨关节炎及类风湿性关节炎患者行保留髌骨的全膝关节置换。 结果与结论：术中记录髌骨软骨退变分级Ⅲ级和IV级达36膝,占75%,置换后HSS评分及FELLER髌骨评分较置换前明显改善,明显膝前痛病例为5例,占10%,其髌骨病理分级均达到IV级。保留髌骨膝关节置换前后影像学评价髌股关节的对线差异无显著性意义,下肢力线校正满意。提示对于置换前髌股轨迹不良、术中软骨病理分级较低者应该进行选择性的髌骨置换,恰当选择病例采用保留髌骨的膝关节置换可减少髌股关节并发症,置换前仔细评估,综合考虑多种因素操作可进一步改善髌股轨迹。     

多中心、随机、阳性药平行对照临床研究:评价盐酸氨基葡萄糖在治疗骨节炎中的有效性和安全性

骨关节炎是一种退行性的关节疾病,表现为关节软骨代谢的异常和结构上的损害。临床表现为受累关节的疼痛、肿胀、活动受限。晚期病人可以出现软骨剥落、骨刺形成、软骨下骨坏死等症状和体征,导致关节功能丧失,严重者必须进行人工关节置换手术。骨关节炎的病理过程表现为,软骨基质蛋白多糖     

利用PLGA细胞支架再生人关节软骨的实验研究

目的：研究人关节软骨细胞在PLCA三维支架上的贴附和生长情况，利用组织工程技术培养工程化关节软骨。方法：制作PLGA三维细胞支架。分离培养成人关节软骨细胞，体外扩增后种植到PLGA支架中。在体外和裸鼠体内分别培养软骨细胞一支架复合物，分期终止培养，进行组织学染色、扫描电镜、Ⅱ型胶原免疫组织化学及cDNA探针原位杂交检测。结果：体外培养发现，软骨细胞支架材料内贴附生长良好，长期培养仍保持软骨细胞特性，棵鼠体内培养8周后可形成软骨样组织。结论：PLGA三维支架适合软骨细胞贴附生长和分泌软骨外基质，可作为软骨组织工程的细胞载体。利用组织工程的方法可获得适于移植的工程化关节软骨。     

坚硬接骨板固定后局部骨质疏松的骨组织形成计量学的实验研究

本实验通过骨组织形态计量学的方法，对家兔完整胫骨坚硬接骨板内固定后局部骨组织的变化进行了研究，实验家兔随机分为１、２、３、４组和空白对照组，固定时间为６．８．１０和１２周。对不脱钙骨组织切片在纵切面和横切面上进行普通光和莹光分析测量。结果发现：坚硬接骨板内固定后六周时固定段骨即出现骨质疏松，发生在哈佛氏系统的骨丢失，１０周后胄内膜表面出现骨吸收，、骨髓腔增大，两上表面的骨重建单位的负稀使固定段皮质     

IoPamidol脊髓造影的临床及X线观察

Iopamidol是当今比较理想的第二代无离子型造影剂。作者做了40例Iopamidol脊髓造影并对其副作用及影象质量进行了观察。其结果,副作用发生率偏高(42％),但程度轻,影象质量较好,其中极好者占70％,含要求者占25％,不合要求者占5％。作者还对影响副作用和影象质量的因素进行了分析,并认为二者将随着操作技术的提高而得到改进。     

怎样预防颈椎病

现代生活及工作节奏的加快,颈椎所受的负担不可避免地增加,因而颈椎的退变可能比以往要快得多,颈椎病的发病率也可能比以往要高,如汽车驾驶员、计算机操作人员等。但是,只要我们注意对颈椎的认真保养、精心呵护,延缓颈椎的退变进程也不是不可能的。相反,如果不注意保养,颈椎长期操劳过度,必将积劳成疾,反复受到外伤、受到寒冷的刺激等,则会加重颈椎间盘、韧带及椎间关节的退变和劳损,导致颈椎病的发生。 一、工作中有哪些注意事项?     

保留髌骨膝关节置换的症状及影像学评价

背景:膝关节置换中是否置换髌骨是一个持续争论的话题。目的:侧重评价保留髌骨膝关节置换后髌骨的影像学稳定性和症状改善。方法:对39例(48膝)骨关节炎及类风湿性关节炎患者行保留髌骨的全膝关节置换。结果与结论:术中记录髌骨软骨退变分级Ⅲ级和IV级达36膝,占75%,置换后HSS评分及FELLER髌骨评分较置换前明显改善,明显膝前痛病例为5例,占10%,其髌骨病理分级均达到Ⅳ级。保留髌骨膝关节置换前后影像学评价髌股关节的对线差异无显著性意义,下肢力线校正满意。提示对于置换前髌股轨迹不良、术中软骨病理分级较低者应该进行选择性的髌骨置换,恰当选择病例采用保留髌骨的膝关节置换可减少髌股关节并发症,置换前仔细评估,综合考虑多种因素操作可进一步改善髌股轨迹。