APP17肽对糖尿病视网膜神经元表达NT-3和星形胶质细胞增殖的影响

目的　观察糖尿病早期视网膜神经元表达 NT- 3和星形胶质细胞增殖情况 ,并观察 APP17肽的作用。方法　用链脲佐菌素 (streptozotocin,STZ)复制 Wistar大鼠糖尿病模型 ,于模型建立 2周后 ,皮下注射 APP17肽 ,1月后处死大鼠取视网膜 ,进行神经免疫组化 ,观察 APP17肽对糖尿病早期视网膜神经元中神经营养因子 3(neurotrophin- 3,NT- 3)和星形胶质细胞中胶质原纤维酸性蛋白 (glial fibrillary acidi protein,GFAP)表达的影响。结果　同正常对照组相比模型组 (DM组 )视网膜神经元 NT- 3阳性细胞数明显减少 ,但APP17+DM组阳性细胞数多于 DM组 (P<0 .0 1) ,并且对照组与 APP17+DM组中星形胶质细胞 GFAP阳性数少于 DM组 (P<0 .0 1)。结论　在糖尿病视网膜病变早期存在视网膜神经细胞 NT- 3表达减少及星形胶质细胞增生 ,APP17肽可明显改善早期糖尿病大鼠视网膜神经元的表达 ,提示对神经视网膜具有保护作用     

App-17肽对糖尿病大鼠神经网膜的保护作用

目的 评价App-17肽对早期糖尿病大鼠神经网膜的保护作用。方法 雄性Wistar大鼠腹腔注射STZ,建立糖尿病动物模型。模型建立后2周皮下注射App-17肽,1个月后处死大鼠取视网膜。电镜观察糖尿病大鼠神经网膜的病理改变及App-17肽对早期糖尿病神经网膜的保护作用。结果（1）模型组:与正常对照组比较,模型组大鼠神经网膜视锥视杆细胞层、外核层、微血管基底膜和周细胞未见明显改变,但其神经网膜从内核层至神经纤维层有明显病理改变,表现为线粒体数目减少、线粒体水肿、嵴变短甚至消失,线粒体内可见髓样小体,神经节细胞层有暗细胞形成。在神经纤维层和内丛状层细胞突起水肿明显,尤其在神经纤维层,由于细胞突起水肿严重,压迫其周围微血管,可见血管管腔狭窄、闭锁。（2）App-17 肽组:与模型组比较,神经网膜自内核层至神经纤维层有线粒体肿胀,嵴变短、消失,但明显减轻,髓样小体少见。细胞水肿明显减轻,细胞突起水肿明显减轻,微血管未见管腔狭窄和闭锁;神经节细胞层无暗细胞。结论（1）在糖尿病视网膜病变（DR）发病过程中,神经网膜神绎细胞超微结构病理改变早于微血管的改变。（2）糖尿病早期神经网膜神经细胞的损害可能是导致DR的发病机制之一,在DR前期和早期,若能扭转或减轻神经网膜神经细胞的损害,可预防和延缓D     

APP17肽对D-半乳糖脑老化小鼠海马凋亡相关基因表达的影响

目的 研究APP17肽对D-半乳糖脑病小鼠海马神经元凋亡的影响。方法 用D-半乳糖制备脑老化模型，皮下注射APPl7肽治疗D-半乳糖脑老化小鼠，3个月后取脑组织做Bcl-2、Bax、cREB、AKt、AIF免疫组织化学染色。结果 D-半乳糖脑病小鼠海马内Bax、AIF阳性反应神经元胞浆与突起深染，而正常小鼠及APPl7肽保护的D-半乳糖小鼠海马阳性细胞数目少，染色淡；D-半乳糖小鼠海马内Bcl-2、CREB、AKt阳性细胞数日少，染色淡；而正常小鼠及APP17肽保护的D-半乳糖小鼠海马阳性反应神经元胞浆与突起深染。结论 促进凋亡的Bax、AIF在D-半乳糖小鼠海马表达增加；抑制凋亡的Bcl-2、CREB、AKt在D-半乳糖小鼠海马表达降低。APP17肽能影响D-半乳糖脑病小鼠脑内Bcl-2、Bax、CREB、AKt、AIF的表达，使之接近正常。     

李氏5号方对D-半乳糖老化小鼠行为学、海马神经元超微结构和Nurr1表达的影响

D-半乳糖老化小鼠是研究脑老化的常用模型,表现在皮层神经元转录水平降低,RNA及蛋白质含量下降,神经细胞数目减少,小鼠水迷宫成绩下降等,与老龄动物的表现一致[1,2].我们以往的研究发现D-半乳糖老化小鼠表现学习、记忆功能减退,海马神经元存在明显的超微结构改变,NGF和NT-3的免疫反应阳性细胞数减少,并出现神经元凋亡.但这些改变可被APP(β-Amyloid Precursor Protein)17肽明显改善[2～5],提示D-半乳糖老化小鼠的脑神经元损伤可被药物干预.现本文报告李氏5号方水提液(广东高明脑病医疗医药研究院提供,粉剂,由龟甲、枸杞子、石菖蒲、核桃仁、当归、远志、红花等组成)对D-半乳糖老化小鼠的学习记忆功能、海马神经元超微结构和Nurr1的影响.     

新的人突触相关蛋白(FRG4)抗原表位分析及抗体制备

目的：分析一个新的人突触相关蛋白(FRCA)抗原表位并制备其多克隆抗体。方法：从人胎肝文库PCR扩增获得FRCA基因全长cDNA序列；通过生物信息学分析，预测FRG4编码氨基酸序列的二级结构、抗原决定簇、功能结构域，并进行了多序列比对；采用固相多肽合成法合成了FRCA抗原多肽，并免疫家兔；用免疫组化检测蛋白在人肝癌细胞HepG2细胞中的表达。结果：通过生物信息学分析选取抗原13肽PKLVKEEVFWRNY，制备兔抗人FRCA多克隆抗体。高效液相色谱检测显示抗体纯度达82．79％，抗体滴度为1：16000，Western blot证实该抗体具有较好的反应性和特异性，免疫组化证实其主要在HepG2细胞胞浆中表达。结论：成功制备了新的人突触相关蛋白(FRCA)多克隆抗体。     

阿尔茨海默病尿神经丝蛋白检测方法的建立及其临床意义

目的 研制检测尿中AD7C-NTP诊断试剂盒,并分析评价其在诊断AD中的临床应用价值.方法 固相法合成具有免疫原性的AD7C-NTP抗原决定簇多肽片段,通过免疫动物、制备抗体、配对筛选,以小鼠抗ADTC-NTP抗体作为包被抗体,以生物素标记兔抗AD7C-NTP抗体和辣根过氧化物酶标记亲和素建立ELISA检测尿AD7C-NTP的方法;并用以检测和分析121例AD患者与118名同龄健康人清晨中段尿液中AD7C-NTP的水平差异.结果 经过鉴定,小鼠抗AD7C-NTP抗体的ELISA检测效价为1:8 000,兔抗AD7C-NTP抗体的ELISA检测效价为1:32 000;WB检测人脑标本中抗AD7C-NTP抗体的相对分子质量为41 000.自建ELISA检测AD7C-NTP的灵敏度为0.2μg/L,线性范围为0-10μg/L,正常参考值1.5μg/L,平均回收率为100.2%,批内CV为3.8%和4.5%,批间CV为7.6%和6.8%.AD组尿AD7C-NTP[2.25(0.43-8.62)μg/L]高于健康对照组[0.82(0.47-2.77)μg/L,P<0.01],AD组和健康对照组阳性率分别为89.3%和15.3%,AD7C-NTP检测的敏感度为89.3%、特异度为84.7%.结论 用自行设计合成的多肽片段免疫动物,成功制备了抗AD7C-NTP抗体,初步建立的尿AD7C-NTP的ELISA检测方法精密度和灵敏度高,有可成为临床诊断AD的辅助手段.     

UPAN对去卵巢大鼠神经元退行性变的作用

目的　通过观察UPAN对卵巢切除大鼠学习、记忆功能 ,海马神经元超微结构以及有关蛋白质表达的影响来证实UPAN对神经元退行性变有改善作用。方法　♀大鼠 ,行双侧卵巢切除手术造模 ,并于 6wk后皮下注射UPAN进行治疗 ,12wk后行水迷宫实验 ,至 13wk开始行灌注固定 ,取脑组织作超薄切片进行电镜分析 ;作冰冻切片进行雌激素受体 (ERα)、糖元合成激酶 (GSK 3)、细胞周期动态激酶(CDK 5 )、蛋白磷酸酯酶 (PP 1、PP2A及PP 2B)免疫组化染色。结果　水迷宫检测卵巢切除组大鼠较正常组游完全程所须时间明显延长及错误反应次数明显增多 ,UPAN治疗组结果与正常组接近。去卵巢组大鼠海马神经元超微结构明显损害 ,ERα表达增高 ,GSK 3、CDK 5、PP 1、PP2A及PP 2B表达增高 ,但以蛋白激酶GSK 3和CDK 5增高最为明显。使用UPAN治疗后能明显改善海马神经元超微结构的损害 ,使上述有关蛋白质的表达恢复到正常水平。结论　去卵巢大鼠存在着学习、记忆功能障碍 ,海马神经元超微结构以及有关蛋白质的表达出现异常改变。UPAN能明显改善其学习、记忆功能 ,维持海马神经元超微结构的完整性以及使有关蛋白质表达恢复到正常水平。     

APP17肽对糖尿病小鼠微管结构和tau蛋白磷酸化有关酶类的影响

目的　观察ＡＰＰ１７ 肽对糖尿病小鼠微管结构及ｔａｕ 蛋白磷酸化有关酶类变化的影响。　方法　用链脲佐菌素（ＳＴＺ）诱发小鼠糖尿病模型,并皮下注射ＡＰＰ１７ 肽对糖尿病小鼠进行保护。４周后,小鼠灌注固定。取各组小鼠的海马ＣＡ１ 区组织进行光镜和电镜观察。行冰冻切片,做糖原合成激酶（ＧＳＫ３）、细胞周期动态激酶（ＣＤＫ５）、蛋白磷酸酶１（ＰＰ１）、蛋白磷酸酶２Ａ（ＰＰ２Ａ）、微管蛋白（ｔｕｂｕｌｉｎ）免疫组化染色。　结果　（１）糖尿病小鼠海马神经元的微管结构出现明显的断裂或溶解现象,而用ＡＰＰ１７ 肽保护可使这种现象得到明显改善;（２）糖尿病小鼠海马内表达磷酸化ｔａｕ 蛋白的两种蛋白激酶ＧＳＫ３、ＣＤＫ５ 及表达脱ｔａｕ 蛋白磷酸化的磷酸酯酶ＰＰ１、ＰＰ２Ａ 均明显减少,用ＡＰＰ１７ 肽保护的糖尿病小鼠上述酶类表达均恢复至正常水平。　结论　糖尿病小鼠脑组织代谢紊乱,蛋白质合成降低。ＡＰＰ１７ 肽可能是一种能量代谢激动剂,通过保持糖尿病小鼠海马神经元ｔａｕ 蛋白的正常磷酸化而维护微管的正常结构。     

李氏5号方水提液对D-半乳糖老化小鼠海马神经元凋亡级联反应的影响

目的：观察李氏5号方水提液对D-半乳糖老化小鼠海马神经元凋亡级联反应的影响。方法：将小鼠随机分为5组：正常对照组(C组)、D．半乳糖模型组(D组)、李氏5号方大剂量药物治疗组(L组)、中剂量药物治疗组(M组)、小剂量药物治疗组(S组)。D，L，M，S4组每日皮下注射半乳糖65mg／kg。L，M，S3个治疗组分别灌胃李氏5号方0．6，0．3和0．15g／kg，连续3个月。免疫组织化学染色方法和Western Blotting检测海马神经元(凋亡诱导因子(AIF)，Bax细胞色素C(Cyt C)，Bcl-2的表达。结果：模型小鼠海马神经元AIF，Bax，Cyt C的阳性细胞数分别比正常对照小鼠增加4．4倍、6．2倍和4．4倍．而Bcl-2则仅为正常小鼠的12％。李氏5号方水提液3种不同剂量均不同程度使这4种蛋白质表达的异常有所恢复，但未能达到完全正常水平。结论：D-半乳糖老化小鼠的海马神经元存在明显的凋亡级联反应，李氏5号方水提液对改善凋亡级联反应有一定作用。     

救脑益智胶囊对D-半乳糖老化小鼠海马神经元β-淀粉样肽及其相关蛋白表达的影响

背景：D-半乳糖老化小鼠脑内存在的β-淀粉样肽(β-amyloid，Aβ)产生过多，是否与脑老化过程有关?目的：观察中药救脑益智胶囊对D-半乳糖老化小鼠海马神经元A8及其相关蛋白表达的影响。设计：随机对照的实验研究。地点和对象：实验地点：首都医科大学宣武医院神经生化室。昆明小鼠60只，无特定病原体动物环境(SPF)级，雄性，体质量26—28g，由中国药品生物制品检定所实验动物中心提供。方法：采用免疫组织化学染色和免疫印记方法，检测D-半乳糖老化小鼠模型海马神经元Aβ、β-分泌酶、内质网Aβ结合蛋白(endoplasmic reticulum amyloid β-peptide binding protein，ERAB)和早老蛋白-1的表达水平，并观察中药救脑益智胶囊的保护作用。主要观察指标：Aβ、β-分泌酶、ERAB和早老蛋白-1免疫组织化学染色结果和凝胶转移电泳分析。结果：对照组小鼠海马CA1区神经元有少量的Aβ及其相关蛋白表达，而D-半乳糖老化小鼠海马CA1区神经元Aβ及其相关蛋白表达水平明显增加，与对照组比较差异有高度显著性意义(P<0．01)，中药组上述各种蛋白的表达结果与对照组接近。结论：D-半乳糖老化小鼠海马神经元存在着Aβ及其相关蛋白表达的上调，中药救脑益智胶囊可使之恢复正常水平，对神经元具有一定的营养和保护作用。