慢性再生障碍性贫血患者中医证型与外周血microRNA、淋巴细胞亚群及细胞因子的关系研究

目的:分析慢性再生障碍性贫血(CAA)患者外周血microRNA、淋巴细胞亚群、细胞因子水平与不同肾虚证型的关系。方法:纳入60例CAA患者,辨证分为肾阴虚组30例、肾阳虚组14例、肾阴阳两虚组16例,另选择20例健康志愿者作为正常对照组。采用实时荧光定量PCR方法检测受试者外周血单个核细胞miRNA-155-5p、miRNA-1260b表达情况,采用流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群[包括总T淋巴细胞(T)、辅助T淋巴细胞(Th)、细胞毒T淋巴细胞(Tc)、B淋巴细胞(B)、自然杀伤细胞(NK)],采用酶联免疫吸附法检测血浆干扰素-γ(IFN-γ)、白介素-12(IL-12)p70、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β1(TGF-β1)水平。结果:与正常对照组比较,肾阴虚组、肾阴阳两虚组、肾阳虚组患者的miRNA-155-5p、miRNA-1260b表达及Tc比例、IFN-γ、IL-12 p70、TNF-α水平均明显升高(P0.01,P0.05),NK细胞比例、Th比例、Th/Tc比值及TGF-β1水平均明显降低(P0.05,P0.01)。与肾阳虚组比较,肾阴虚组、肾阴阳两虚组患者的miRNA-155-5p、miRNA-1260b表达及Tc比例、IFN-γ、IL-12 p70、TNF-α水平均明显升高(P0.01,P0.05),Th比例、Th/Tc比值及TGF-β1水平均明显降低(P0.05,P0.01);肾阴虚组患者的Th比例低于肾阴阳两虚组(P0.05),血浆IFN-γ、IL-12 p70、TNF-α水平高于肾阴阳两虚组(P0.05)。结论:肾阴虚型、肾阴阳两虚型较肾阳虚型患者存在更严重的细胞免疫功能亢进及miRNA-155-5p、miRNA-1260b表达失调,而肾阴虚型较肾阴阳两虚型患者存在更严重的造血负调控因子紊乱。     

急性脑梗死中医证型与血小板活化关系研究

目的:探讨急性脑梗死不同中医证型血小板活化的演变规律。方法:对急性脑梗死患者进行中医辨证分型,测定101例急性脑梗死患者和30例健康对照组体内LPA、AP和CD62P水平。结果:急性脑梗死患者阳亢腑实组、痰瘀阻络组、气虚血瘀组CD62P、LPA、AP水平明显高于健康对照组(P<0.01);而阳亢腑实组、痰瘀阻络组、气虚血瘀组各组CD62P、LPA、AP水平之间比较无显著性差异(P>0.05)。结论:急性脑梗死患者各中医证型均表现血小板活化增高,但各证型之间血小板活化水平无明显差异。     

应用新型免疫缺陷型NCG小鼠建立患者来源急性T淋巴细胞白血病模型的研究

目的：将患者来源的急性T淋巴细胞白血病（T-ALL）细胞接种于NCG小鼠，建立稳定的人类T-ALL白血病动物模型。方法：分离初诊T-ALL患者骨髓来源的白血病细胞，鉴定后经尾静脉接种于NCG小鼠。定期采用流式细胞术检测小鼠外周血中hCD45阳性的细胞比例，通过病理及免疫组化检测小鼠骨髓、肝脏、脾脏等脏器组织白血病细胞浸润情况。第一代小鼠模型建立成功后，取脾脏细胞接种于第二代小鼠，第二代小鼠模型建立成功后取脾脏细胞进一步接种于第三代小鼠，定期采用流式细胞术监测各组小鼠外周血白血病细胞生长情况，以评估此T-ALL白血病动物模型的稳定性。结果：第一代小鼠在接种d 10可在外周血中检测到hCD45阳性的白血病细胞，其后比例逐渐增高，平均第6-7周小鼠出现精神萎靡，小鼠外周血及骨髓涂片可见大量T淋巴细胞白血病细胞。小鼠脾脏明显肿大，免疫组织化学检测结果显示hCD3阳性的白血病细胞广泛浸润骨髓、肝脏、脾脏等。第二代、第三代小鼠能稳定发生白血病，平均生存期为4-5周。结论：采用T-ALL患者骨髓来源的白血病细胞，经尾静脉接种于NCG小鼠，可以成功构建患者来源的肿瘤细胞异种移植（PDTX）模型。     

异甘草素诱导NCI-H157细胞凋亡及对ERS相关基因表达的影响

目的 研究异甘草素对人非小细胞肺癌NCI-H157细胞增殖、凋亡及细胞内质网应激相关基因ATF4、DDIT3和TNFRSF10B表达的影响。方法 体外培养NCI-H157细胞,给予异甘草素处理,MTT法检测不同浓度的异甘草素对NCI-H157细胞的增殖抑制率,流式细胞术检测不同浓度异甘草素对肿瘤细胞的凋亡发生率,实时定量PCR检测NCI-H157细胞在不同浓度异甘草素处理后ATF4、DDIT3和TNFRSF10B基因mRNA的表达。结果 在一定浓度范围内,异甘草素能显著抑制人肺癌NCI-H157细胞的增殖,并呈时间与剂量依赖性。异甘草素能显著诱导NCI-H157细胞凋亡的发生,并上调ATF4、DDIT3和TNFRSF10B基因在细胞内的表达（P<0.05~0.01）。结论 异甘草素能够抑制人肺癌NCI-H157细胞的增殖,诱导凋亡发生,且与激活内质网应激反应有关。      

再生障碍性贫血患者外周血树突状细胞亚群分析

目的检测再生障碍性贫血(AA)患者外周血树突状细胞(DCs)亚群,并探讨其意义。方法采用免疫荧光三色标记流式细胞术检测14例AA患者外周血DCs亚群(DC1/CD11c+和DC2/CD123+),并以14例正常人作为对照。结果 AA患者外周血CD11c+DCs百分率为0.353±0.084,比健康对照组0.264±0.087明显增高(P0.05),CD123+DCs百分率为0.187±0.067,与健康对照组的0.140±0.064相比,差异无统计学意义(P0.05)。结论 AA患者外周血中DC1亚群占优势,导致向Th1样免疫反应偏移,可能与AA的发病有关。     

重型再障患者中医证型与外周血microRNA、淋巴细胞亚群及细胞因子的相关性研究

目的:从外周血microRNA、淋巴细胞亚群、细胞因子失调水平分析其与重型再生障碍性贫血(SAA)不同中医证型的相关性。方法:纳入SAA患者60例,辨证分为热毒壅盛型12例、肾阴虚型18例、肾阴阳两虚型16例、肾阳虚型14例,另选20例健康者做正常对照组,采用实时荧光定量PCR方法检测外周血单个核细胞miRNA-155-5p、miRNA-1260b表达情况,采用流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群,酶联免疫吸附法检测血浆干扰素γ(IFN-γ)、白介素12p70(IL-12p70)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、转化生长因子β1(TGF-β1)水平。结果:SAA热毒壅盛型及肾阴虚型外周血miRNA-155-5p、miRNA-1260b表达均高于肾阴阳两虚型及肾阳虚型(P0.05),而热毒壅盛型与肾阴虚型之间、肾阴阳两虚型与肾阳虚型之间miRNA-155-5p、miRNA-1260b表达则没有统计学差异(P0.05);热毒壅盛型、肾阴虚型及肾阴阳两虚型细胞毒T淋巴细胞(Tc细胞)比例均高于肾阳虚型(P0.05),而辅助T淋巴细胞(Th细胞)比例、Th/Tc比值则低于肾阳虚型(P0.05),前三者之间Th、Tc比例、Th/Tc比值则无明显差异(P0.05);热毒壅盛型及肾阴虚型血浆IFN-γ、TNF-α、IL-12p70水平均高于肾阴阳两虚型及肾阳虚型(P0.05,P0.01),而TGF-β1水平则低于肾阴阳两虚型及肾阳虚型(P0.05),热毒壅盛型患者IFN-γ、TNF-α水平又高于肾阴虚型(P0.05),而肾阴阳两虚型与肾阳虚型之间各细胞因子水平均无显著差异(P0.05)。结论:重型再障患者热毒壅盛型、肾阴虚型存在更明显的miRNA-155-5p、miRNA-1260b上调及细胞因子紊乱,其中热毒壅盛型造血负调控因子IFN-γ、TNF-α升高更为突出,而肾阳虚型细胞免疫亢进程度则轻于其他三型,重型再障患者不同中医证型与miRNA失调、淋巴细胞亚群失衡、细胞因子紊乱之间存在相关性。