亚急性或慢性海绵样脑病的基因及免疫学诊断

亚急性或慢性海绵样脑病的基因及免疫学诊断王永康姚苹作者单位：２５００２１济南，山东省立医院病理科（王永康）；山东医科大学病毒学研究室（姚苹）亚急性或慢性海绵样脑病（ｓｕｂａｃｕｔｅｏｒｃｈｒｏｎｉｃｓｐｏｎｇｉｆｏｒｍｅｎｃｅｐｈａｌｏｐａｔｈｉｅｓ...     

风疹病毒的分离

自24例风疹症状典型的患儿咽拭中,经PRK细胞盲传后转种至RK_(13)及BhK_(21)细胞上出现明显的细胞病变,在MK_2细胞上对HSV-1型病毒攻击呈干扰现象者为阳性,分离出6株风疹病毒,命名为济南风疹病毒JRV_5、JRV_(11)、JRV_(13)、JRV_(18)JRV_(20)及JRV_(23)。     

狼毒大戟水浸液对L_(615)白血病的抑制作用

目的:探讨狼毒大戟水浸液(LS)抗小鼠T淋巴细胞白血病(L615)的作用。方法:80只纯系小鼠随机分为阴性对照(n=20)、阳性对照(n=20)、LS-1(n=20)和LS-2(n=20)。除阴性对照组外,每只鼠腋下接种L615细胞104个,LS-1,LS-2组每只分别给予LS0.036g/d和0.06g/d,共7d,第8日将各组动物处死一半取血,剩余的用作观察生命延长率。结果:给药组和对照组的平均存活时间分别为9.7～9.9d与6.9d,生命延长率为40%～43%,LS对由L615白血病细胞攻击引起的白细胞显著增高和脾脏肿大有显著的降低和缓解作用(P<0.02,P<0.002)。结论:LS对L615细胞有较强的抑制作用,可在一定程度上抑制白血病的发展。     

SARS病毒E蛋白基因与EGFP基因在BHK-21细胞中的融合表达

目的：构建SARS病毒E蛋白基因的真核表达载体，观察E蛋白基因在BHK-21细胞中的正常表达及定位。方法：用PCR方法扩增E蛋白基因，上、下游引物两端分别设计EcoRⅠ和BamHⅠ酶切位点，产物双酶切后定向克隆于pEGFP-N1载体，构建真核表达载体pEGFP-E，脂质体法转染BHK-21细胞，荧光显微镜观察E蛋白基因的表达。结果：经酶切和DNA序列测定鉴定，E蛋白基因正确插入到增强绿荧光蛋白EGFP基因上游，荧光显微镜显示E蛋白表达于细胞浆内，包膜上也有分布。结论：在BHK-21细胞中成功表达了SARSCovE-EGFP融合蛋白，蛋白定位于细胞浆内。     

洛菲不动杆菌TEM型β内酰胺酶基因研究

目的：分析临床不动杆菌TEM耐药基因结构特征，比较不动杆菌与大肠埃希菌TEM基因的差异。方法：自呼吸道感染的标本中分离80株洛菲不动杆菌，经药敏试验、TEM、SHV、OXA、IMP、CTX－M耐药基因的聚合酶链反应检测，筛选出2株具有多重耐药特性TEM型分离株JN18、JN70，对耐药基因进行序列测定，用DNA分析软件与大肠埃希菌TEM基因进行比较。结果：JN18和JN70洛菲不动杆菌TEM基因扩增序列分别长1012bp和887bp，编码分别为832bp和772bp的TEM基因片段，2株菌TEM基因的同源性为98.2%,其中14个基因位点存在碱基差异。JN18和E.coli TEM同 源性平均为98.72%，其中与E.coli TEM1E,17B,28,70,76,77,79,95型同源性超过99％；JN70与E.coli TEM基因同源性平均为98．93％，与E.coli TEM1D、1F、84型同源性高达99．5％。JN18和JN70与E.coli TEM基因平均离散度为1．26％和1．06％。基因种系分析结果显示，洛菲不动杆菌JN18和JN70株TEM与E.coli TEM17B、TEM76型基因关系相对密切。结论：洛菲不动杆菌JN18和JN70 TEM基因与大肠埃希菌TEM76，84极为类似，但在不同位点上存在核苷酸差异。     

高耐药洛菲不动杆菌分离株超广谱β内酰胺酶的基因变异

目的：探讨高度耐药的洛菲不动杆菌超广谱β内酰胺酶基因型及基因变异特征,分析基因变异对氨基酸序列及对超广谱β内酰胺酶可能产生的影响。方法：从下呼吸道感染的患者标本中分离得到3株高度耐药的洛菲不动杆菌超广谱β内酰胺酶阳性菌,PCR检测TEM、SHV、OXA、IMP、CTX-M耐药基因,并对耐药基因进行全序列测定,比较不同菌株耐药基因及其编码氨基酸序列的变异特征。结果：2株耐药基因为TEM型,SHV、OXA、IMP、CTX-M耐药基因均未检出,另1株5种耐药基因均未检出。2株TEM基因扩增序列分别长1012bp、1007bp,2株同源性为98.2%,在17个位点上存在碱基差异,TEM基因为832bp,编码277个氨基酸,两株间有8个氨基酸出现差异,差异主要位于天冬氨酸、甘氨酸和丝氨酸,这些氨基酸分别被组氨酸、精氨酸/丙氨酸、半胱氨酸取代。软件分析显示,2株TEM基因编码TEM型超广谱β内酰胺酶的等电点分别为5.479、5.083。 结论：山东济南地区高度耐药洛菲不动杆菌ESBLs耐药基因可见TEM型,不同临床分离株耐药基因存在不同程度的变异,这种变异使其编码的氨基酸序列发生改变,可能影响超广谱β内酰胺酶的某些特性,给耐药菌的检测带来影响。     

影响CMV在2BS细胞上出现CPE条件的研究

对CMV_(AD)-169株在2BS细胞上的增殖条件进行了比较。结果表明,2BS细胞最佳生长条件是全Eagle培养液,37℃,pH为7.4～8.0,感染CMV最适时间是尚未长满单层,维持液小牛血清应占5%。未经冻融的大剂量病毒接种,出现细胞病变最快、早及广泛。     

泌尿系感染的致病菌分布及其耐药性

目的：探讨泌尿系感染的致病菌分布状况及耐药趋势。方法：分离泌尿系感染者尿标本1097份，并对主要致病菌进行18种抗生素药物敏感试验和超广谱β内酰胺酶（ESBLs)检测。结果：1097份尿标本中大肠埃希氏菌492株(44.8%)。葡萄球菌197株（18.0%)，D群链球菌131株（11.9%)。492株大肠埃希氏菌对亚胺培南，阿米卡星和头孢类抗菌素敏感率依次为97.2%,87.4%,81.3%，对喹诺酮类，四环素和氨苄西林敏感率依次为43%，16.5%,20.7%;492株菌中ESBLs阳性76株(15.4%)。结论：大肠埃希氏菌是本地区泌尿系的主要致病菌，该菌对碳青霉烯类，氨基糖苷类和大多数头孢类较为敏感。但对青霉素类和喹诺酮类抗生素具有明显耐药性。     

有机碘和无机碘对人甲状腺细胞凋亡的影响

目的 研究有机碘和无机碘对体外培养的人甲状腺细胞形态和凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响.方法 取正常人甲状腺细胞进行培养,分别设对照(培养液)组和KI组(碘浓度分别为10-7、10-5、10-3 mol/L)及3,5-二碘酪氨酸(DIT)组(碘浓度分别为10-7、10-5、10-3 mol/L),分别加入相应浓度用培养液稀释的DIT和KI溶液,继续培养48 h.采用免疫组织化学技术测定细胞凋亡相关蛋白表达的情况.结果 与对照组相比,10-5、10-3 mol/L KI组和10-3 mol/L DIT组甲状腺细胞Bcl-2表达量较低,10-5、10-3 mol/L KI及DIT暴露甲状腺细胞Bax表达量较高,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);且随着KI或DIT暴露浓度的升高,甲状腺细胞Bcl-2表达量呈下降趋势,Bax表达量呈上升趋势.与相同剂量KI组相比,10-5、10-3 mol/L DIT组甲状腺细胞Bcl-2表达量较高,Bax表达量较低,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论 高碘可引起甲状腺细胞形态的改变并增强其细胞凋亡的发生,且DIT对甲状腺细胞的影响弱于KI.