激动或阻断N-甲基-D天冬氨酸受体对大鼠脑海马兴奋性氨基酸释放的影响

目的：应用清醒大鼠脑微透析技术，观察N-甲基-D-天冬氨酸受体激动剂和阻断剂对大鼠海马兴奋性氨基酸释放的影响，探讨N-甲基-D-天冬氨酸受体对大鼠海马兴奋性氨基酸释放的自身调节作用。方法：实验于2003-12在锦州医学院药理教研室完成。45只雄性SD大鼠，横跨海马背部植入一自制的透析探头，待大鼠清醒后24h用人造脑脊液，N-甲基-D-天冬氨酸250，500μmol／L，N-甲基-D-天冬氨酸500μmol／L＋MK-801 100μmol／L，MK-801100μmol／L，甘氨酸500μmoL／L．7-氯犬尿烯酸200μmol／L灌流，灌流速度为5μL／min，每20min收集一次透析液，采用邻苯二甲醛-β-巯基乙醇衍生化反相梯度洗脱荧光检测透析液中谷氨酸和天冬氨酸的水平。结果：45只大鼠均进入结果分析。海马内局部灌流N-甲基-D-天冬氨酸250，500μmol／L可明显增加细胞外基础状态下谷氨酸和天冬氨酸的水平。非竞争性N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂MK-801（100μmoL／L）可拮抗N-甲基-D-天冬氨酸（500μmol／L）引起的谷氨酸释放增加作用。单独应用MK-801（100μmoL／L）对基础状态下谷氨酸的水平没有影响。局部灌流N-甲基-D-天冬氨酸受体协同激动剂甘氨酸500μmoL／L也可明显增加细胞外基础状态下谷氨酸的水平。局部灌流N-甲基-D-天冬氨酸上甘氨酸部位的选择性阻断剂7-氯犬尿烯酸200μmoL／L可以拮抗甘氨酸引起的谷氨酸释放增加作用。结论：兴奋性氨基酸受体N-甲基-D-天冬氨酸受体的激活增加海马内兴奋性神经递质的释放，这种N-甲基-D-天冬氨酸受体可能存在于突触前膜（兴奋性神经末梢膜上），即自身调节受体正反馈调节兴奋性氨基酸的释放。     

β-淀粉样肽研究进展

阿尔茨海默病(AD)是发生于老年期的一种以认知障碍和记忆能力损害为主的中枢神经系统退行性疾病，旧称老年痴呆，是引起老年期痴呆的主要原因。在西方国家AD已成为排在心脏病、肿瘤、脑卒中之后的第4位威胁人类健康的杀手。β-淀粉样肽(Aβ)在阿尔茨海默病(AD)患者的老年斑中它能较早地有选择地沉积，它是各种原因诱发AD的共同途径，是AD形成和发展的关键因素。Aβ的出现早于神经原纤维缠结、     

转染hBMP-2基因的骨髓基质细胞与生物活性陶瓷复合材料异位成骨能力观察

目的：观察转染了hBMP-2基因的兔骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells，MSC)与生物活性陶瓷(bioactive glass ceramicsics，BGC)复合后植入兔股部肌袋中生物复合材料的异位成骨能力。方法：实验时间为2003—07／2004—05。实验地点为锦州医学院解剖学骨组织工程研究所。应用脂质体介导的方法将携带hBMP-2基因的重组载体PcDNA3-hBMP2导人体外培养的MSC中，用G418筛选获得阳性细胞，应用ELISA检测hBMP-2基因在MSC内蛋白质水平的存在与表达状况；将携带hBMP-2基因的MSC与BGC复合并植入兔股部肌袋内，术后4周行组织学检察。结果：用ELISA方法从实验组细胞的培养基中可检测到约54ng的hBMP-2蛋白质。携带hBMP-2基因的MSC与BGC具有良好的生物相容性．且具有异位成骨能力。结论：MSC可以作为hBMP-2基因的受体细胞，基因表达可分泌hBMP-2蛋白质，与BGC复合后具有异位成骨能力．认为转染了hBMP-2基因的MSC可作为骨组织工程学中的种子细胞。     

重组大鼠谷氨酸脱羧酶载体的构建和功能分析(英文)

目的谷氨酸脱羧酶2 (glutamic acid decarboxylase 2,GAD65) 是γ-氨基丁酸(gamma-aminobutyric acid, GABA)的合成酶。本研究拟构建重组大鼠GAD65基因的慢病毒载体(recombinant lentivirus-rGAD65,rLV-rGAD65),并在体内外分析其功能。方法用RT-PCR法克隆大鼠GAD65基因的cDNA 并亚克隆至慢病毒载体上,形成重组慢病毒质粒(rLV-GFP-rGAD65)。在包装质粒的帮助下,获得重组慢病毒颗粒(rLV-rGAD65)并检测其滴度。用rLV-rGAD65感染原代培养的大鼠肺成纤维细胞,并用免疫细胞化学和蛋白印迹法检测rGAD65在成纤维细胞中的表达,用高效液相法(high-performance liquid chromatograph, HPLC)检测培养上清中GABA的含量。在体内, rLV-rGAD65 定点注射到Sprague-Dawley大鼠的丘脑底核(subthalamic nucleus,STN)。用免疫组织化学和蛋白印迹法检测GAD65基因在STN中的表达水平,HPLC检测黑质网状部(su...     

PcDNA3-hBMP2转染骨髓基质细胞及其稳定表达

目的：通过观察转染hBMP-2基因的骨髓基质细胞的生长特性的变化和检测目的基因在受体细胞中表达，探讨骨髓基质细胞用作hBMP-2基因的受体细胞的可能性。方法：在脂质体介导下将hBMP-2基因导入体外培养的骨髓基质细胞中，用G418筛选获得阳性细胞，分别应用原位杂交技术和酶联免疫吸附方法检测目的基因在受体细胞内的存在与表达。结果：在mRNA水平可检测到目的基因在阳性细胞中进行了转录，在培养基中，用ELISA的方法能检测到目的基因在骨髓基质细胞中进行了表达，并分泌到培养基中。从细胞的生长曲线上，可知细胞的倍增时间并没有因为目的基因的导入而改变，其生长时间也与正常的细胞相近。结论：骨髓基质细胞可以用作hBMP-2基因的受体细胞，表达并分泌hBMP-2蛋白质，也可作为骨组织工程学中的种子细胞。     

红霉素致过敏性休克1例

1　临床资料患者男性 ,52岁 ,发热、咽痛 3天。查体 :体温 38.2℃ ,脉搏 96次 /分 ,呼吸 2 0次 /分 ,血压1 7/1 1 k Pa,咽充血、扁桃体肿大、心肺正常。化验 :WBC2 0× 1 0 9/L,N0 .86,L0 .1 4。诊断为急性扁桃体炎 ,给予红霉素 0 .9g/d (既往史 :有青霉素过敏史 ,本次青霉素试敏阳性 )加入 5%葡萄糖50 0 ml静滴 ,第 3天静滴约 4分钟后 ,患者感胸闷 ,呼吸困难 ,因肢湿冷 ,大汗淋漓 ,烦躁不安 ,立即停止输液。查体 :意识模糊 ,血压测不到 ,呼吸急促转慢而不规则 ,口唇颜面及肢端发绀 ,双肺可闻及弥漫性大水泡音 ,心率 1 2 8次 /分 ,律不齐…     

鼠神经细胞和巨噬细胞的体外联合培养生长特性的研究

目的 探讨鼠神经细胞和巨噬细胞在体外的联合培养条件,为研究神经系统疾病的炎症发病机制奠定实验基础。方法 取大鼠小脑的神经细胞和小鼠腹腔的巨噬细胞进行联合培养,观察联合培养细胞的生长特性,采用免疫组化法检测神经细胞的微管相关蛋白-2(microtubule-associated protein 2,MAP-2)。结果 大鼠小脑的神经细胞和小鼠腹腔的巨噬细胞联合培养后不影响各自的生长状况和形态结构,神经细胞的MAP-2免疫组化显示神经细胞的形态无明显变化。结论 鼠神经细胞和巨噬细胞在体外培养条件下可以共生长,这一联合培养的方法可以作为神经系统疾病研究的一种新的实验方法。     

应用脑微透析技术观察大鼠纹状体基础环鸟苷酸来源及一氧化氮在纹状体细胞内对环鸟苷酸的转导过程

目的:应用清醒大鼠脑微透析技术以选择性可溶性鸟苷酸环化酶抑制剂1H-犤1,2,4犦恶二唑犤4,3-A犦喹喔啉-1-酮为工具药观察大鼠纹状体一氧化氮-环鸟苷酸信号转导。方法:实验于2004-02/08在锦州医学院药理教研室完成,选择雄性健康SD大鼠35只,平衡麻醉液麻醉后,将大鼠固定在立体定位仪上,横跨纹状体植入一透析探头,待大鼠清醒后24h进行透析灌流实验,灌流速度为5mL/min,每20min收集1次透析液,用放射免疫方法测定环鸟苷酸含量。结果:35只大鼠均进入结果分析。①纹状体内局部灌流1H-犤1,2,4犦恶二唑犤4,3-A犦喹喔啉-1-酮10,50,100μmol/L可剂量依赖性降低细胞外基础环鸟苷酸水平,1H-犤1,2,4犦恶二唑犤4,3-A犦喹喔啉-1-酮100μmol/L作用最强,最大,可使细胞外基础环鸟苷酸水平降低约50%。②1H-犤1,2,4犦恶二唑犤4,3-A犦喹喔啉-1-酮100μmol/L可完全对抗N-甲基-D-天冬氨酸(250μmol/L)引起的细胞外环鸟苷酸水平增加。③1H-犤1,2,4犦恶二唑犤4,3-A犦喹喔啉-1-酮也可阻断一氧化氮供体S-亚硝基-N-乙酰青霉胺(1mmol/L)引起的细胞外环鸟苷酸水平增加。纹状体内局部灌流a-氨基羟甲基异恶唑丙酸(100μmol/L)不能使环鸟苷酸水平增加。结论:①在基础状态下纹状体的环鸟苷酸约50%来源于可溶性鸟苷酸环化酶的激活。②纹状体的一氧化氮-环鸟苷酸神经通路的激活是通过N-甲基-D-天冬氨酸受体完成的。③在大鼠纹状体一氧化氮也是通过激活可溶性鸟苷酸环化酶而使环鸟苷酸增加的。