节律基因隐花色素2在银屑病小鼠模型及HaCaT细胞中的表达变化及机制研究

【摘要】 目的 探讨节律基因隐花色素2（CRY2）在银屑病小鼠模型及HaCaT细胞中的表达变化及其机制。方法 咪喹莫特诱导小鼠模型实验：12只C57BL/6雌鼠随机均分为咪喹莫特组（连续外用咪喹莫特乳膏5 d诱导构建银屑病小鼠模型,6只）和对照组（不予任何处理,6只）,第6天处死小鼠,取其背部皮肤组织,免疫荧光染色检测表皮中CRY2的表达。HaCaT细胞转染实验：使用小干扰RNA（siRNA）技术在HaCaT细胞中敲减CRY2的表达（siRNA-CRY2组）,以siRNA-NC组作为对照,5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷（EdU）染色检测HaCaT细胞增殖活力,实时荧光定量PCR（qPCR）检测HaCaT细胞中趋化因子mRNA表达水平,Western印迹检测细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）蛋白的磷酸化水平。肿瘤坏死因子α（TNF-α）刺激动物和细胞实验：12只C57BL/6雌鼠随机均分为TNF-α组（小鼠耳部皮下连续注射TNF-α溶液6 d,6只）和磷酸盐缓冲液（PBS）组（注射等量的PBS,6只）,第7天处死小鼠,取其耳部皮肤组织,免疫荧光染色检测表皮中CRY2的表达;用50 ng/ml TNF-α刺激CRY2基因敲减的HaCaT细胞12 h（siRNA-CRY2 + TNF-α组）,以siRNA-NC + TNF-α组作为对照,qPCR检测各组细胞中趋化因子mRNA的表达。统计分析采用两独立样本t检验。结果 免疫荧光染色显示,咪喹莫特组小鼠背部表皮层中CRY2蛋白的表达（0.94 ± 0.23）显著低于对照组（2.30 ± 0.25,t = 3.99,P = 0.016）。HaCaT细胞转染实验：siRNA-CRY2组EdU阳性细胞比例（48.13% ± 10.97%）显著高于siRNA-NC组（38.23% ± 0.81%,t = 5.00,P = 0.007）,且siRNA-CRY2组趋化因子CXCL1、CXCL8 mRNA相对表达量及p-ERK1/2蛋白相对表达量均显著高于siRNA-NC组（均P < 0.05）,但两组间CCL20 mRNA表达量及ERK1/2蛋白表达量差异无统计学意义（均P > 0.05）。TNF-α刺激实验：免疫荧光染色显示,TNF-α组鼠耳表皮组织中CRY2蛋白表达水平（0.37 ± 0.34）显著低于PBS组（2.04 ± 0.17,t = 4.38,P = 0.012）;siRNA-CRY2 + TNF-α组HaCaT细胞趋化因子CXCL1、CXCL8、CCL20 mRNA相对表达量均显著高于siRNA-NC + TNF-α组（均P < 0.05）。结论 CRY2在银屑病小鼠模型中表达降低,促进了角质形成细胞的增殖以及趋化因子CXCL1、CXCL8和CCL20的表达,且TNF-α可能是下调CRY2表达的上游细胞因子。     

外伤性血气胸急救的护理体会

目的：总结探讨外伤性血气胸急救护理经验。方法：对所有外伤性血气胸患者行以基本的抗感染以及对症的支持治疗,完备术前、术中和术后护理,同时给予患者相应的疼痛护理和心理护理。结果：死亡3例,其余患者在精心的护理下,病情得以完全康复。结论：充分良好的护理可提高手术治愈率,有效降低患者死亡率。     

加成型硅橡胶一次法两次法印模三维精度比较

目的比较加成型硅橡胶一次法、两次法印模的精度。方法采用重、轻体成分的加成型硅橡胶采用一次法和两次法分别制取同一实验模具的印模,检验比较所取印模对已行烤瓷全冠预备的21牙冠颈缘复制精度上的差异;灌注石膏模型后,游标卡尺测量主模型及石膏模型上各标志点的距离,对测量数据进行统计学分析。结果两次法印模在对牙冠颈缘复制精度上效果优于一次法印模,两者有显著差异。在线性变化率上比较,一次法印模的变化率均比两次法要大,但与原始数据比较无明显差异。结论加成型硅橡胶印模材料使用两次法印模优于一次法印模。     

CBI、TBL结合LBL教学法在心内科临床见习中的实践与探索

探讨病案导入式（case-based instruction,CBI）、团队基础学习（team-based learning,TBL）结合传统授课（lecture-based learning,LBL）教学法在心内科临床见习教学中的应用.方法 采用CBI＋ TBL＋ LBL联合教学体系进行教学,并与CBI＋LBL、TBL＋ LBL教学组相比较,通过问卷调查、理论及实践考核的方式评价教学效果.结果 CBI＋ TBL＋ LBL联合教学组与TBL＋ LBL教学组比较,前者操作考核、理论考核及总成绩均有提高,差异有统计学意义（P＜0.01）;CBI＋ TBL＋ LBL联合教学组与CBI＋ LBL教学组比较,前者在理论考核及总成绩方面均有提高,差异有统计学意义（P＜0.05）,而在实践考核成绩提升上差异无统计学意义.问卷调查结果显示,CBI＋ TBL＋ LBL教学的方法得到了绝大多数学生的认可,总体满意度达到96.1％.结论 CBI＋ TBL联合传统授课的教学效果良好,培养了学生的分析能力与临床思维能力,提高了学习积极性与主观能动性,同时也增强了团队合作的意识,更有利于提升医学生的职业素养,这种教学模式值得推广.     

利用同尾酶技术构建pET15b-PEP-1-CAT重组质粒

目的:利用同尾酶技术构建pET15b-PEP-1-CAT重组质粒,为制备PEP-1-CAT融合蛋白进而为防治心肌缺血再灌注损伤奠定基础。方法:设计并合成两端分别带SalⅠ和BglⅡ酶切位点的CAT引物,用PCR方法以pZeoSV2(+)-CAT质粒为模板,特异性扩增CAT全长cDNA。将扩增的CAT cDNA与dATP反应,利用Taq DNA聚合酶具有的非模板依赖性末端转移酶活性在CAT cDNA的3′末端加"A"并纯化,然后应用TA克隆策略将纯化后的CAT cDNA插入至中间载体pGEM-T Easy Vector中,经PCR、限制性酶切分析鉴定重组子pGEM-T-CAT。人工合成编码PEP-1的双链寡核苷酸,两端分别引入NdeⅠ和XhoⅠ酶切位点,将其插入pET15b中得到重组质粒pET15b-PEP-1,然后酶切鉴定。pGEM-T-CAT和pET15b-PEP-1分别经SalⅠ-BglⅡ和XhoⅠ-BamHⅠ双酶切,利用同尾酶(SalⅠ与XhoⅠ,BglⅡ与BamHⅠ)能酶切产生相同黏性末端的特性,将回收得到的CAT cDNA片段与pET15b-PEP-1相连,构建出重组质粒pET15b-PEP-1-CAT,经PCR及酶切鉴定,并通过核苷酸序列测序证实。结果:获得pET15b-PEP-1-CAT重组子,经测序分析证实,克隆入pET15b的PEP-1序列与设计合成的PEP-1序列一致,CAT序列与GeneBank中登录号为“AY028632”的CAT cDNA序列一致。结论:pET15b-PEP-1-CAT的成功构建为产生融合蛋白H is tag-PEP-1-CAT进而为防治心肌缺血再灌注损伤奠定了基础。     

十一味参芪片预防他巴唑治疗Graves病所致白细胞减少的临床观察

目的评价十一味参芪片预防他巴唑治疗Graves病所致白细胞减少症的临床效果。方法将48例初诊Graves病且治疗前无白细胞及中性粒细胞异常患者在应用他巴唑治疗过程中分为2组,A组联用十一味参芪片,B组不联用十一味参芪片,连续治疗8周,分别观察白细胞及中性粒细胞水平。结果 A组白细胞减少症的发生率明显低于B组。经过8周治疗后A组和B组的白细胞计数分别为(6.3±1.4)×109L-1和(4.8±1.2)×109L-1;中性粒细胞计数分别为(3.5±0.6)×109L-1和(2.6±0.8)×109L-1;2组比较均有显著性差异(P均<0.01)。结论十一味参芪片可有效预防Graves病中应用他巴唑所致白细胞减少症的发生。     

C臂机联合颞部微创切口在颧弓骨折手术治疗中的应用

目的:探讨C臂机联合颞部微创切口在颧弓骨折手术治疗中的临床效果。方法:选择经颧骨CT确诊的40例颧弓骨折患者,随机分为两组。治疗组:20例,通过C臂机引导下经颞部微创切口给予颧弓骨折复位术;对照组:20例,经口内前庭沟黏膜切口给予颧弓骨折复位。术后3个月、6个月复查,通过患者张口度、满意度评估、并发症发生率及X线评价四个方面,评估患者手术治疗效果。结果:所有病例术区切口均一期愈合,术后3个月、6个月复查结果显示,治疗组术后骨折断端对位良好,无明显移位,通过患者张口度、满意度评估、并发症发生率及X线评价四个方面评估,治疗组明显高于对照组,差异有统计学意义。结论:C臂机联合颞部微创切口治疗颧弓骨折复位术具有微创、安全、效果可靠及复位精准等优点,值得临床推广使用。     

延续性护理在提高神经内科老年住院患者 生活质量及安全性中的应用

目的　探讨延续性护理在提高神经内科老年住院患者生活质量及安全性中的应用价值.方法　选取２０１４年１２月~２０１５年１２月我院神经内科收治的老 年住院患者７８例,采用随机数表法将其分为观察组与对照组各３９例;其中对照组患者住院期间接受临床基础护理,观察组患者在对照组基础上接受延续性护理干 预,比较两组患者干预前后生活质量及自我护理能力改善情况,并记录两组患者住院期间风险事件发生情况.结果　两组患者干预前生活质量评分中躯体、心理活 动、社会活动评分比较无显著差异,干预后观察组患者三项生活质量评分明显优于对照组(P ＜０．０５),具有统计学意义;两组患者干预前自我护理能力评分中护理责 任感、自我概念、自我护理技能、自我护理健康知识水平比较无显著差异,干预后观察组患者各项评分明显高于对照组(P ＜０．０５);观察组患者住院期间及出院后６ 个月跌倒、坠床等风险事件发生率明显低于对照组(P ＜０．０５),具有统计学意义.结论　对神经内科老年住院患者施行延续性护理干预可有效改善患者生活质量及 自我护理能力,对降低患者住院期间及出院后高危风险事件发生具有重要作用.     

脑卒中吞咽障碍患者家属间歇管饲置管法教育的效果

目的探讨脑卒中后吞咽障碍患者管饲置管法家属教育临床效果。方法选取2013年5月至2015年10月在该院神经内科入住的脑卒中后吞咽障碍患者26例,随机分为观察组(n=13)与对照组(n=13),在常规护理的基础上对观察组家属施行间歇管饲置管法培训教育。干预前和干预3周后,采用洼田饮水试验和抑郁评估量表分别对两组进行评估,分析家属熟练掌握间歇管饲置管法对卒中后吞咽障碍患者的影响。结果干预后观察组洼田饮水试验,患者的吞咽功能提高幅度明显高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。家属置管插管成功率显著提高。观察组抑郁、焦虑案例为6例,对照组焦虑、抑郁案例为10例,观察组心理应对比例低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论家属熟练掌握管饲置管法能增加患者康复信心,有效促进吞咽功能的恢复,为患者出院后进入家庭康复打下良好基础,拓展优质护理延伸服务方式,提高护理服务满意度。     

齐拉西酮与氯氮平治疗精神分裂症的疗效及对代谢与生活质量的影响

目的探讨齐拉西酮与氯氮平治疗精神分裂症的临床疗效及对代谢、生活质量的影响。方法将128例精神分裂症患者随机分为齐拉西酮组及氯氮平组,每组64例,疗程12周。采用阳性症状与阴性症状量表(PANSS)及生活质量综合评定问卷(GQOLI)评估临床疗效及生活质量。结果治疗后2组PANSS评分均显著下降(P>0.05),但2组比较差异无统计学意义(P>0.05);齐拉西酮组治疗后低密度脂蛋白(LDL-C)、体质量、BMI、胰岛素、总胆固醇(TC)水平显著低于氯氮平组(P<0.05);齐拉西酮组治疗后GQOLI总分及心理健康、躯体健康和社会功能维度评分均显著优于氯氮平组(P<0.05)。结论齐拉西酮与氯氮平临床疗效相当,但齐拉西酮对代谢无显著影响,提高患者生活质量。