新的良性家族性婴儿惊厥候选基因的突变分析

为了克隆新的良性家族性婴儿惊厥（benign familial infantile convulsion,BFIC）致病基因, 我们采用功能-候选克隆的方法,在已精确定位于1p36.12-35.1上D1S2864和D1S2830之间约12.4 cM的区域内,筛选5个候选基因进行突变分析。方法根据癫痫的病理生理发病机制、已克隆特发性癫痫致病基因特点,结合该区域内各基因的生物学信息,筛选了GPATC3、SESN2、SFN、TAF12、TCEA3作为候选基因,应用聚合酶链反应（PCR）结合DNA直接测序的方法进行基因突变分析。结果 在该BFIC家系中,5个侯选基因的突变检测未发现任何致病突变,但发现了5个多态,其中TCEA3基因的 IVS1-122C→A为新发现的多态。结论 排除了这5个基因为该BFIC家系致病基因的可能,为进一步功能候选克隆工作奠定了基础。     

柯萨奇病毒B3 VP1蛋白、rAd/VP1和pcDNA3/VP1的免疫效果比较

目的 观察柯萨奇病毒B3(Coxsackievirus B3,CVB3)衣壳蛋白VP1、表达VP1蛋白的重组腺病毒rAd/VP1和重组质粒pcDNA3/VP1的免疫效果.方法 用原核细胞表达VP1蛋白并纯化、扩增重组腺病毒rAd/VP1,扩增并提取真核表达质粒pcDNA3/VP1.BALB/c小鼠随机分为4组,每组18只,分别在股四头肌注射VP1蛋白、rAd/VP1、pcDNA3/VP1和PBS.VP1蛋白组和pcDNA3/VP1组免疫3次,间隔3周;rAd/VP1组免疫2次,间隔2周.VP1蛋白、pcDNA3/VP1和rAd/VP1每次每只注射剂量分别为50μg、100μg和1.2×107PFU.用ELISA法和微量中和试验法检测各次免疫后血清CVB3特异性IgG抗体和中和抗体滴度;末次免疫后3周,CCK-8法检测脾脏淋巴细胞的CTL杀伤活性;用致死量CVB3攻击小鼠后,检测血中病毒滴度并观察动物的存活情况.结果 VP1蛋白组血清特异性IgG抗体和中和抗体滴度明显高于其他实验组(P＜0.05),而脾脏淋巴细胞CTL杀伤活性低于rAd/VP1组(P＜0.05);致死量病毒攻击后,VP1蛋白组血中病毒滴度低于pcDNA3/VP1和rAd/VP1组(P＜0.05),生存率明显高于这两组(P＜0.05).结论 VP1蛋白疫苗能诱导较高水平的体液免疫应答,对动物有明显的免疫保护作用,免疫效果优于质粒pcDNA3/VP1和重组腺病毒rAd/VP1.

Abstract：

Objective To compare the immune effects of Coxsackievirus B3 (CVB3) capsid protein VP1 expressed bacterially, recombinant adenovirus rAd/VP1 and recombinant plasmid pcDNA3/VP1which express VP1 protein in mice. Methods After expressed in prokaryotic cells, VP1 protein was purified. Recombinant adenovirus rAd/VP1 and recombinant plasmid pcDNA3/VP1 were amplified and extracted. Six to 8-week-old, male BALB/c mice were divided into four groups randomly. Each group contained 18 mice. The mice of pcDNA3/VP1 group or VP1 protein group were immunized intramuscularly with three injections at three weeks apart, of recombinant plasmid pcDNA3/VP1 at a dose of 100 μg/mouse or recombinant protein VP1 at a dose of 50 μg/mouse. The mice of rAd/VP1 group were immunized intramuscularly twice at two weeks interval with rAd/VP1 at a dose of 1.2 × 107 PFU. The control group was mock-immunized with 100 μl of PBS intramuscularly. Mice were bled from the retroorbital sinus plexus every two weeks after each immunization. ELISA and micro-neutralization test were used to detect levels of CVB3-specific IgG antibody and neutralizing antibody titers in the sera of immunized mice. Three weeks after the last immunization, the cytotoxic T lymphocyte(CTL) killing activity of spleen lymphocytes was detected with CCK-8 assay. Subsequently, virus titers in the sera of immunized mice were determined by the 50% cell culture infective dose( CCID50 ) assay on HeLa cell monolayers and percentage of animals surviving were observed after lethal CVB3 attack over a period of 21 days. Results The titers of specific IgG antibody and neutralizing antibody in sera of VP1 protein immunized mice were higher than other groups( P ＜0.05 ). While CTL killing activity of spleen lymphocytes of VP1 protein immunized mice was lower than mice in rAd/VP1 group( P ＜0. 05). Virus titers in sera of VP1 protein immunized mice were lower than the mice in pcDNA3/VP1 or rAd/VP1 groups ( P ＜ 0.05 ), while survival rate was significantly higher than these two groups ( P ＜ 0.05 ).Conclusion VP1 protein induced higher level of humoral immune response and acquired obvious immune protection effects in mice. The immunizing potency of VP1 protein vaccine surpassed plasmid pcDNA3/VP1or recombinant adenovirus rAd/VP1. It appeared to be a promising candidate among the three different vaccines.     

登革病毒非结构蛋白NS1群特异性单克隆抗体的制备及初步应用

目的制备登革病毒NS1群特异性单克隆抗体,建立可检测登革病毒1～4型NS1抗原的ELISA检测法,为登革热的早期快速诊断奠定基础。方法应用毕赤酵母表达系统分泌表达登革病毒2型重组非结构蛋白NS1,以此为抗原免疫BABL/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,经HAT选择培养、间接ELISA筛选和亚克隆,获得能稳定分泌登革病毒NS1群特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株;用所获得的单克隆抗体建立可检测1～4型登革病毒NS1抗原的双抗体夹心ELISA法。结果从登革病毒2型NS1重组毕赤酵母（Pichia Pastoris-NS1）中获得了大量纯化的登革病毒重组NS1蛋白;经免疫小鼠、细胞融合、间接ELISA筛选及3次亚克隆后,最终获得2株能高效分泌抗登革病毒NS1单克隆抗体的杂交瘤细胞株2D7B6B4和2D10E2F6,间接ELISA显示抗体效价高达1∶8000～1∶16000;ELISA及免疫荧光检测证实,其所分泌的抗体与1～4型登革病毒及其重组NS1蛋白均有特异性免疫反应,为登革病毒NS1群特异性单克隆抗体;两株单克隆抗体均为IgG2a亚类;初步建立了检测4个血清型登革病毒NS1抗原的双抗体夹心ELISA法。结论成功研制出两株能高效分泌抗登革病毒NS1群特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。初步建立了可检测1～4型登革病毒NS1抗原的双抗体夹心ELISA检测法。     

家族性肥厚型心肌病大家系肌球蛋白结合蛋白C3基因突变筛查

目的 研究一汉族家族性肥厚型心肌病(FHCM)家系患者的致病基因突变位点,分析其基因型与表型关系.方法 收集到一规模较大的FHCM家系,共5代89位成员,采集到67份血样.用primerexperss 2.0软件设计引物扩增肌球蛋白结合蛋白C3( MyBPC3)基因的各外显子及相邻内含子区,产物纯化后应用美国ABI PRISM 3700 DNA自动测序仪进行测序,用Autoassembler 2.0软件将测序结果与MyBPC3的基因组序列进行比较、分析.结果 该家系共14例患者(4例已去世,其中2例是年轻时猝死),在世的10例患者左心室壁厚度均超过13 mm.符合常染色体显性遗传病的特点.经突变筛查,发现2处碱基改变,经检索国家生物技术信息中心单核苷酸多态性数据库,这些碱基改变均为多态性.结论 MyBPC3基因不是该家系的致病基因,反映了肥厚型心肌病的遗传异质性,需对其他可能的候选致病基因进行筛查.     

黄体退化期用药治疗原发性痛经的临床疗效观察*

[目的]探讨经前三剂止痛方(JQF)不同服药时间对原发性痛经临床疗效的影响。[方法]选取2009年12月—2011年6月间在天津中医药大学附属保康医院及天津市妇产科医院门诊治疗的原发性痛经患者48例,随机分为黄体退化期给药组(A组)、黄体退化期加黄体成熟期给药组(B组)和月经周期给药组(C组),观察评定3组治疗效果。[结果]3组治疗后痛经症状积分均明显降低(P<0.01),A组、B组、C组治疗总有效率分别为93.75%、93.75%和100%,差异无统计学意义(P>0.05);A组、B组、C组治疗前差异无统计学意义(P>0.05)。停药随访3个月经周期,A组疗效明显优于C组(P<0.05)。A组与B组比较差异无统计学意义,痛经程度积分显示疗效有降低的趋势。治疗过程中2组均未见不良反应。[结论]黄体退化期给药治疗原发性痛经用药时间短,与长期用药比,治疗过程中等效,但远期疗效好,治愈率高,值得临床应用。     

芬太尼联合喷他佐辛在剖宫产术后静脉镇痛的临床观察

目的探讨芬太尼联合喷他佐辛在剖宫产术后静脉镇痛中的临床应用观察,并与芬太尼联合甲磺酸罗哌卡因连续硬膜外镇痛法比较。方法选择剖宫产术后自愿要求术后镇痛的病人200例,随机分为2组。P组：芬太尼联合喷他佐辛剖宫产术后病人自愿要求镇痛者100例,腰麻达成后,不放置硬膜外导管,于手术结束前静脉缓慢推注芬太尼0.05mg＋0.9﹪氯化钠稀释至5mL;镇痛药液：芬太尼0.45mg＋喷他佐辛60mg（30mg/支）＋0.9%氯化钠至100mL,手术结束后连接静脉三通并开启一次性CBI型输注泵,标称容量：100mL,标称流量：2mL/h。R组：芬太尼联合甲磺酸罗哌卡因剖宫产术后自愿要求镇痛者100例,腰麻达成后,放置硬膜外导管,于手术结束前10min硬膜外导管推注盐酸利多卡因5mL。镇痛药液：芬太尼0.5mg＋甲磺酸罗哌卡因360mg﹙90mg/支﹚＋0.9%氯化钠至100mL,手术结束后连接硬膜外导管并开启一次性CBI型输注泵,标称容量：100mL,标称流量：2mL/h。结论两组术后均能达到良好的镇痛效果。     

急性重症胰腺炎并发症的临床护理

目的探讨重症胰腺炎并发症的临床护理,以提高临床疗效。方法选取我院2011年3月至2012年6月收治的出现并发症的急性重症胰腺炎患者60例,并进行临床护理。结果本组急性重症胰腺炎并发症患者60例,经过综合治疗及有针对性的护理,都已经病愈出院。结论对急性重症胰腺炎并发症患者进行有效的护理,可以提高临床治疗效果,值得推广。     

蜂蜜:美丽的“误会”

两个人前后脚去探病。一个手上拎了两罐"一等蜂蜜",另一个拎的是两罐25%的葡萄糖液。病人会更领谁的情?相信许多人都看好送蜂蜜的人:"都说蜂蜜是好东西啊……(以下省略一千字)。"蜂蜜真有传说中那么美好吗?看完下面的文章,您可能会有不同的看法。说实话,蜂蜜是一种很难让人心生反感的食品。很多人想起它,脑子里可能会浮现出这样的画面:碧蓝的天空下,百花在绿林间怒放。镜头拉近,一朵白花舒展开柔嫩的花瓣,托着花心一只忙碌的金色蜜蜂……"采百花之精华,酿天然之蜂蜜。"浑厚的画外音适时响起。     

生大黄辅助治疗上消化道出血的效果观察

目的 探讨生大黄辅助治疗上消化道出血患者的止血效果及护理措施.方法 将60例肝硬化失代偿期并发上消化道出血的患者,随机分成对照组和治疗组各30例.两组均采用西医常规治疗,治疗组在此基础上采用生大黄泡水饮用或经胃管注入治疗,两组进行疗效对比.结果 治疗组治愈率为63.3%,对照组治愈率为36.7%,两组疗效比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 应用生大黄辅助治疗上消化道出血疗效显著,且不良反应少.     

内镜下腰椎间盘切除并发症的初步分析

通过对应用腰椎间盘镜技术(microendoscopic disectomy,MED)治疗腰椎间盘突出症并发症的分析和与常规开放式手术对比,探讨MED手术治疗腰椎间盘突出症的优、缺点.MED手术具有创伤小、手术时间短、术后恢复快、痛苦轻等优点,但并发症较多,需合理的掌握手术指征,不断提高技术技能.