慢病毒介导shRNA沉默巢蛋白表达对人黑色素瘤细胞转移特性的影响

摘要：目的应用慢病毒介导的RNA干扰技术,有效沉默黑色素瘤细胞株UACC903 巢蛋白（nestin）的表达,研究其对黑色素瘤
细胞转移能力的影响。方法以人nestin mRNA编码序列作为干扰靶点,以慢病毒基因PLL3.7 作为质粒载体,构建靶向人
nestin的shRNA表达质粒,另构建不针对任何已知mRNA的阴性对照shRNA表达质粒,分别感染UACC903细胞并流式分选获
得高纯度的nestin 干扰或对照组细胞。应用RT-PCR、免疫荧光及Western blotting 检测不同组别nestin 表达的变化。分别用
Transwell侵袭试验检测跨膜细胞的数量评估各组黑色素瘤细胞的侵袭能力,划痕法检测迁移能力改变。光镜观察各组细胞形
态变化,免疫荧光检测E-cadherin、N-cadherin 和β-catenin 在不同组别的表达变化。结果成功构建nestin shRNA慢病毒载体
nestin-RNAi-LV。RT-PCR 及免疫荧光结果显示干扰组UACC903 细胞nestin mRNA及蛋白表达水平较对照组显著降低。
nestin下调的UACC903细胞黏附、侵袭及迁移能力下降（P<0.05）。结论慢病毒介导的shRNA 能有效地静默食管癌细胞nestin
基因的表达,能抑制黑色素瘤细胞UACC903迁移。
     

卵巢上皮性肿瘤性质的判断

卵巢上皮肿瘤有良性、交界性和恶性之分,及时正确的诊断其性质对预后及指导治疗,至关重要。通过采用测定新鲜上皮性卵巢肿瘤组织细胞中的DNA和RNA含量,以及测定SPF、PI的值,提出一种卵巢上皮性肿瘤性质判别方法,为便于诊断和指导临床治疗,提供了有效手段。     

自体血液回输在非体外循环下冠状动脉旁路移植术后的应用

目的探讨应用一次性血液回输器在非体外循环下冠状动脉旁路移植(off-pump coronary artery bypass,OPCABG)术后回收自体引流血的临床效果。方法 2007年8月～2009年2月,我院连续对15例OPCABG患者在术后24小时内应用一次性密封血液回输装置收集心包引流血,并经滤膜滤过后把自体引流血回输体内。结果每个病例回输自体血量115～1350ml,平均562.4ml;回输自体血量占其引流血量的比例为27.8%～96.0%,平均45.5%;回输自体血量占总输血量27.1%～76.2%,平均46.0%。凝血酶原时间(PT)、凝血时间(TT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(FIB)术后即刻及术后24小时分别与术前比较,差异无显著性(P0.05)。术后均无输血反应,无凝血功能障碍,无新桥梗阻及血栓形成,全部按期出院。结论一次性回输器回收自体引流血回输在OPCABG术后的应用效果良好,未见不良反应及并发症。     

十二指肠乳头旁憩室与胆总管结石复发因素相关性

目的 探讨经内镜乳头括约肌切开取石后,结石复发与十二指肠乳头旁憩室的关系.方法 2001年1月-2004年1月,508例因胆总管结石做EST或EML取石的连续病例,其中合并十二指肠乳头旁憩室148例,随访复发率并回顾性分析患者的临床资料.结果 乳头位于憩室边缘或在憩室内时与结石再发有关,而邻近和远离憩室者与结石再发无关...     

应用部分削薄的轴型皮瓣修复手足软组织缺损创面

目的探讨应用不同类型部分削薄的轴型皮瓣修复手足部皮肤软组织缺损的临床效果。方法根据手足部皮肤软组织缺损的部位和大小,采取不同类型部分削薄的轴型皮瓣进行修复,其中带蒂皮瓣99例,游离皮瓣60例,急诊修复108例,择期修复51例。结果随访时间2个月～5年,152例皮瓣成活;2例骨间后动脉逆行岛状皮瓣、2例外踝上皮瓣及1例足底内侧皮瓣边缘表皮坏死,经换药而愈合;2例股前外侧皮瓣远端部分坏死,后经植皮而愈合。其中游离移植的皮瓣出现血管危象2例,及时手术探查后皮瓣成活。14例皮瓣二期行修整手术。结论根据手足皮肤软组织缺损的部位及创面大小,选择适当部分削薄的轴型皮瓣进行修复,皮瓣成活良好,不臃肿,感觉部分恢复,通过功能康复,达到较好的修复效果。     

血管内皮生长因子在动脉粥样硬化缺血性脑卒中模型大鼠脑组织中的表达

目的探讨动脉粥样硬化基础上缺血性脑卒中模型大鼠脑组织中血管内皮生长因子表达规律及意义。方法大鼠被随机分为对照组和模型组,后者制备动脉粥样硬化大鼠模型,然后再被分为动脉粥样硬化模型假手术组、动脉粥样硬化模型持续缺血0.5、6、12、24 h组,运用逆转录聚合酶链式反应技术检测血管内皮生长因子mR-NA表达及免疫组织化学法检测血管内皮生长因子蛋白表达及变化。结果各动脉粥样硬化模型组与对照组比较血管内皮生长因子表达有明显升高(P<0.05),各持续缺血组与假手术组比较血管内皮生长因子基因及蛋白表达均有明显升高(P<0.05),并随时间发生规律性变化,其中血管内皮生长因子的基因及其蛋白产物在持续缺血6 h组均达到峰值。结论机体长期存在动脉粥样硬化基础病变对缺血性脑卒中脑组织血管内皮生长因子基因及其蛋白产物的表达有正向调控作用,缺血后可随时间变化。本实验结果可为动脉粥样硬化基础上缺血性脑卒中的发生、发展、治疗及预后估计提供一定的理论基础。     

机器人辅助全膝关节置换术的护理配合

目的 总结机器人辅助全膝关节置换术的护理配合要点.方法 对26例患者实施机器人辅助全膝关节置换术,护理配合包括对手术室护士进行相关知识与技能培训;术中巡回护士重点做好机械设备布局,机器人不同机位调整,加强术中机械臂无菌管理;器械护士密切配合完成动力系统安装、截骨、胫骨平台打桩及假体置入.结果 26例患者均顺利完成手术,...     

高增殖潜能集落形成细胞的分类,富集与调控

高增殖潜能集落形成细胞（ＨＰＰ－ＣＦＣ）是存在于小鼠和人骨髓及入胎肝、脐血中的一类较为原始的造血祖细胞。它在体外培养中可产生直径大于０．５ｍｍ，５００００细胞／集落的巨大集落；对５－氟尿嘧啶有相对耐受性；对多种造血生长因子的刺激有反应性。     

小剂量罗红霉素对支气管扩张长期治疗的临床疗效评价

目的 分析口服小剂量罗红霉素治疗支气管扩张的长期临床效果.方法 选取30例支气管扩张患者作为研究对象,随机分成对照组和观察组,各15例;对照组给予常规方法进行治疗,观察组在对照组基础上施加口服小剂量罗红霉素进行治疗,2组患者均治疗6个月;对治疗后的临床效果进行观察分析.结果 观察组的总有效率为93.33%(14/15),对照组的总有效率为60.0%(9/15),2组数据对比差异具有统计学意义(P<0.05).结论 口服小剂量罗红霉素治疗支气管扩张具有显著的治疗效果,长期效果较为理想,无副作用,值得临床推广使用.