外源性胰岛素样生长因子Ⅰ促创面愈合的特征

目的：观察局部应用胰岛素样生长因子Ⅰ对大鼠皮肤创面愈合的作用，为临床应用胰岛素样生长因子Ⅰ加速创面愈合建立理论和实验依据。方法：实验于2002—05／06在北京世纪坛医院动物实验室完成。①清洁级SD大鼠32只，雌雄不拘，体质量180～200g。随机分为胰岛素样生长因子Ⅰ组、胰岛素样生长因子Ⅰ＋重组人生长激素组、重组人生长激素组、生理盐水组，每组8只。②在大鼠背部脊柱切除直径1．6～1．8em的圆形皮肤全层缺损，创面压迫止血后各组分别给药。③胰岛素样生长因子Ⅰ组：每次每个创面给液量0．1mL，胰岛素样生长因子Ⅰ浓度1mg/L；胰岛素样生长因子Ⅰ＋重组人生长激素组：每次每个创面给液量0．1mL，胰岛索样生长因子Ⅰ浓度1mg／L，重组人生长激素浓度0．2U／mL：重组人生长激素组：每次每个创面给液量0．1mL，重组人生长激素浓度0．2U／mL；生理盐水组：每次每个创面给生理盐水，给液量0．1mL。④分别于伤后1、4、7、11、14、17d创面取材，作组织切片观察。在取材同时剩余创面给药，药量同前，在伤后11—13d创面愈合后，14、17d取材为愈合部位组织。取材后即时以10％多聚甲醛固定10h，逐级脱水，作组织切片。⑤利用免疫组织化学和图像分析，研究局部应用胰岛素样生长因子Ⅰ、重组人生长激素后，创伤模型大鼠皮肤创面愈合过程中与创面愈合相关因素增殖细胞核抗原、Ⅰ型胶原之间的关系。结果：实验大鼠32只全部进入结果分析。①在局部应用外源性胰岛素样生长因子Ⅰ、重组人生长激素后，创面愈合过程中组织内I型胶原的变化：伤后1d，胰岛素样生长因子Ⅰ组和胰岛素样生长因子Ⅰ＋重组人生长激素组在胞浆里出现了Ⅰ型胶原表达，到伤后11d创面接近愈合及14d和17d创面愈合后在细胞间质中仍有增加的趋势。②增殖细胞核抗原的变化：在核内，胰岛素样生长因子Ⅰ组和胰岛素样生长因子Ⅰ＋重组人生长激素组的增殖细胞核抗原表达量于4d达到高峰值，重组人生长激素组和生理盐水组伤后增殖细胞核抗原的表达量随时间的推移逐渐增加，在7d时达到最高后就开始降低，14、17d创面愈合后，其表达量也就下降到正常范围。③胰岛素样生长因子Ⅰ的变化：胰岛素样生长因子Ⅰ组和胰岛素样生长因子Ⅰ＋重组人生长激素组伤后在胞浆和细胞间质胰岛素样生长因子Ⅰ的表达量就一直在高值，在重组人生长激素组和生理盐水组，伤后1d出现胰岛素样生长因子Ⅰ的表达，在7d时达到峰值，在伤后11d，表达量下降，14、17d创面愈合后，其表达量也就下降到正常范围。④组间采用t检验。结论：在创面应用胰岛素样生长因子Ⅰ能够促进成纤维细胞分裂增殖，合成分泌增加，是成纤维细胞增生的直接促进因子，能促进创面的愈合。创面应用的重组人生长激素促增殖作用不强。     

可注射性骨组织工程载体海藻酸钠-明胶共混体系的致畸突变试验

背景:利用组织工程学技术将各种凝胶系统作为支架材料对骨缺损进行修复日益受到重视.所选择的支架材料必须具有无毒、无致畸的特点.目的:观察海藻酸钠-明胶共混体系/成骨细胞凝胶修复兔颅骨缺损的愈合过程中对染色体畸变的影响.设计、时间及地点:材料学体内动物实验,于2007-10/2008-03在北京世纪坛医院和北京大学医学部组织胚胎学教研室完成.材料:清洁级2月龄新西兰纯种大白兔12只,随机分为2组:实验组8只,雌性4只,雄性4只,对照组4只均为雌性.海藻酸钠干粉为美国Sigma公司产品,明胶干粉为河北绿岛公司产品.方法:将12只兔编号后抽取骨髓,密度梯度离心法分离骨髓基质干细胞,加入成骨细胞诱导液进行体外培养,诱导分化的成骨细胞经传代增殖为10~7数量级.制备海藻酸钠与明胶质量比为2:3的透明粉红色胶状液体,引入兔成骨细胞,细胞终浓度为5×10~9L~(-1),与CaCl_2溶液混合,形成果冻样海藻酸钠-明胶共混体系/成骨细胞凝胶.12只兔颅骨均制备直径1.5 cm的极限缺损,1周后实验组植入凝胶复合体0.5 mL进行修复,对照组不植入任何材料.主要观察指标:缺损修复后3个月取心脏血观察细胞遗传学的变化.结果:①每只实验动物观察100个中期分裂细胞,均未见染色体型畸变.对照兔在400个中期分裂相中见4个,单体畸变率为1%.实验兔在800个中期分裂相中见12个,单体畸变率为1.5%.两组均在正常范围内.②每只实验动物做2个染色体核型分析,染色体数目2n=44,对照兔核型为44,XX,正常雌性;雄性实验兔为44,XY,未见异常;雌性实验兔为44,XX,未见到异常.结论:海藻酸钠-明胶共混体系/成骨细胞凝胶在细胞遗传学角度上是安全的.     

海藻酸钠-明胶共混体系/成骨细胞凝胶修复兔颅骨极限缺损的CT评估

背景:利用组织工程学技术将各种凝胶系统作为支架材料对骨缺损进行修复日益受到莺视,在骨修复过程中需要选择相对准确、方便的检测方式,以明确体内成骨过程.目的:利用螺旋CT和三维重建监测海藻酸钠-明胶共混体系,成骨细胞凝胶修复兔颅骨缺损的愈合过程.设计、时间及地点:材料学体内动物实验,于2007-10/2008-03在北京世纪坛医院和北京大学医学部组织胚胎学教研室完成.材料:清洁级2月龄新西兰纯种大白兔15只,由北京海淀区兴隆实验动物养殖场提供.海藻酸钠干粉为美国Sigma公司产品,明胶干粉为河北绿岛公司产品,螺旋CT为德国SIEMENS公司产品.方法:将15只兔编号后抽取骨髓,密度梯度离心法分离骨髓基质千细胞,加入成骨细胞诱导液进行体外培养,诱导分化的成骨细胞经传代增殖为107数量级.制备海藻酸钠与明胶质量比为2:3的透明粉红色胶状液体,引入兔成骨细胞,细胞终密度为5×109L-1,与CaCl2溶液混合,形成果冻样海藻酸钠-明胶共混体系/成骨细胞凝胶.15只兔颅骨均制备直径1.5cm的极限缺损,1周后植入凝胶复合体0.5 mL进行修复.主要观察指标:缺损修复后4,8,12周利用CT进行薄层扫描和三维重建检查,采用苏木精-伊红染色和Mallory三色染色观察骨组织愈合情况.结果:修复后4周,冠状位CT显示颅骨缺损区可见骨痂形成,三维重建仍显示有缺损;标本苏木精-伊红染色显示缺损为纤维结缔组织,并有软骨样组织形成,Mallory三色染色标本呈淡蓝色.修复后8周,冠状位CT显示缺损边缘圆钝,与凝胶材料有骨性突起连接,缺损处密度增高明显,三维重建显示缺损范围较之前有所减小;标本苏木精-伊红染色后缺损部可见大量含血管成分的纤维结缔组织,有骨样组织结构形成,Mallory三色染色显示有褐红色成熟骨组织形成,其旁边有淡蓝色软骨样组织.修复后12周,冠状位CT显示缺损区基本被骨痂填满,三维重建示缺损基本修复;缺损区域和周围骨组织形成骨性结合,骨小梁粗大,哈弗氏系统成熟.结论:海藻酸钠-明胶共混体系/成骨细胞凝胶以软骨化骨的形式成功修复了兔颅骨极限缺损.在修复过程中,CT冠状位扫描可准确反映出各阶段成骨的过程,但三维重建有一定的局限性,对成骨的判断会产生一定的误差.     

掺杂F3O4磁性纳米粒子壳聚糖凝胶的制备及其性质研究

目的:制备用聚丙烯酸(PAA)包裹的水溶性四氧化三铁(Fe3O4)纳米粒子(PAA@Fe3O4NPs)掺杂的壳聚糖水凝胶,并对其进行表征。方法:用戊二醛为交联剂,对壳聚糖进行交联,向其中添加PAA@Fe3O4NPs,获得Fe3O4磁性纳米粒子均匀掺杂的水凝胶。应用衰减全反射傅利叶变换红外线光谱(ATR-FTIR)分析仪和流变仪对凝胶的化学结构、流变学性质和溶胀率等进行表征。结果:ATR-FTIR结果显示,戊二醛交联的壳聚糖水凝胶中交联点-C=N-位于1 650 cm-1附近。Fe3O4磁性纳米粒子均匀掺杂在戊二醛交联的壳聚糖水凝胶中,其存储模量G’远大于损耗模量G″,具有高的溶胀率。结论:Fe3O4磁性纳米粒子可以均匀分布在戊二醛交联的壳聚糖水凝胶中,并显示出良好的弹性模量,是一种有潜力的烧伤瘢痕增生抑制辅助用凝胶材料。     

抑癌基因p53与p16及PCNA蛋白在皮肤增生期血管瘤中的表达及其对血管内皮细胞的干预

目的:应用免疫组化法检测抑癌基因p16,p53及DNA聚合酶δ的辅助蛋白PCNA在增生期血管瘤中的表达,及其对血管内皮细胞的影响。方法:实验选取2001-01/2005-04北京世纪坛医院病理科收集的手术切除皮肤增生期血管瘤组织标本36例作为增生期血管瘤组(患者术前均未经任何辅助性治疗),以痔静脉标本30例作为痔静脉对照组。患者均知情同意。①两组标本切片均采用DAKOEnvisions二步法进行免疫组化处理。切片以体积分数为0.03的过氧化氢消除内源性过氧化物酶,微波法抗原修复,92～95℃于pH6.0枸盐酸缓冲液浸泡10min;室温冷却10min,双蒸水洗涤,pH7.2磷酸盐缓冲液浸泡5min;体积分数为0.1的山羊血清(磷酸盐缓冲液稀释)封闭,去血清,加入Ⅰ抗,37℃浸泡30min;pH7.2磷酸盐缓冲液冲洗;Envision孵育,37℃下放置30min;二氨基联苯胺显色,苏木精复染后,脱水、透明、封固。免疫组化阴性对照以磷酸盐缓冲液代替Ⅰ抗,其他步骤维持不变,以确认试剂质量及控制染色效果。②p16,p53阳性信号为棕黄色,以内皮细胞浆和/或核染成棕黄色为阳性细胞。阴性对照除细胞核染成蓝色外,无棕黄色反应物。血管内皮细胞核内见棕黄色颗粒者为PCNA蛋白染色阳性。采用CMIAS高清晰彩色病理图像分析系统分别对两组切片p53,p16及PCNA蛋白的表达进行图像检测,测定每个视野下p16和p53阳性细胞的平均吸光度以及PCNA蛋白阳性表达指数。结果:实验选取手术切除皮肤增生期血管瘤组织标本36例,痔静脉标本30例,全部进入结果分析。①两组p53阳性表达检测及平均吸光度的比较:增生期血管瘤组内皮细胞核内有较多棕黄色颗粒,p53表达强;痔静脉对照组血管内皮细胞核内无棕黄色颗粒沉积,p53表达极弱。增生期血管瘤组p53阳性表达的平均吸光度明显强于痔静脉对照组(6.423±1.415,1.036±0.131,P<0.05)。②两组p16阳性表达检测及平均吸光度的比较:两组切片组织中除细胞核着色外,部分细胞浆有着色。p16的阳性表达在增生期血管瘤组和痔静脉对照组中基本相同,平均吸光度分别为1.241±0.373和1.206±0.267。③两组PCNA蛋白阳性表达指数的比较:PCNA蛋白阳性表达的细胞光镜下可见核内弥漫分布细小的棕黄色颗粒,这些内皮细胞围成血管腔及团块状,核椭圆,体积较大。增生期血管瘤组PCNA蛋白阳性表达指数明显高于痔静脉对照组(67.40±8.79,38.41±9.89,P<0.01)。结论:抑癌基因p53在增生期血管瘤组织中呈高表达,能够促进血管内皮细胞的增殖,但p16的表达与血管内皮细胞增殖的关系不明显。此外PCNA蛋白可作为增生期血管瘤的可靠标志物。     

不切皮肤腋臭切除术27例

腋臭是青春期后由于内分泌的影响，腋下皮肤中大汗腺病理性异常分泌，分泌物中所含的有机物与表皮细菌作用所产生的一种异味。常影响患者的生活和心理状态。目前腋臭切除采用直接缝合和“Ｚ”形手术、激光及皮下刮除等治疗方法虽各有其优点，但均有一定的不足之处。临床观...     

海藻酸钠-明胶共混体系/成骨细胞凝胶修复兔颅骨极限缺损的CT评估

背景：利用组织工程学技术将各种凝胶系统作为支架材料对骨缺损进行修复日益受到重视，在骨修复过程中需要选择相对准确、方便的检测方式，以明确体内成骨过程。 目的：利用螺旋CT和三维重建监测海藻酸钠-明胶共混体系/成骨细胞凝胶修复兔颅骨缺损的愈合过程。 设计、时间及地点：材料学体内动物实验，于2007-10/2008-03在北京世纪坛医院和北京大学医学部组织胚胎学教研室完成。 材料：清洁级2月龄新西兰纯种大白兔15只，由北京海淀区兴隆实验动物养殖场提供。海藻酸钠干粉为美国Sigma公司产品，明胶干粉为河北绿岛公司产品，螺旋CT为德国SIEMENS公司产品。 方法：将15只兔编号后抽取骨髓，密度梯度离心法分离骨髓基质干细胞，加入成骨细胞诱导液进行体外培养，诱导分化的成骨细胞经传代增殖为107数量级。制备海藻酸钠与明胶质量比为2∶3的透明粉红色胶状液体，引入兔成骨细胞，细胞终密度为5×109 L-1，与CaCl2溶液混合，形成果冻样海藻酸钠-明胶共混体系/成骨细胞凝胶。15只兔颅骨均制备直径1.5 cm的极限缺损，1周后植入凝胶复合体0.5 mL进行修复。 主要观察指标：缺损修复后4，8，12周利用CT进行薄层扫描和三维重建检查，采用苏木精-伊红染色和Mallory三色染色观察骨组织愈合情况。 结果：修复后4周，冠状位CT显示颅骨缺损区可见骨痂形成，三维重建仍显示有缺损；标本苏木精-伊红染色显示缺损为纤维结缔组织，并有软骨样组织形成，Mallory三色染色标本呈淡蓝色。修复后8周，冠状位CT显示缺损边缘圆钝，与凝胶材料有骨性突起连接，缺损处密度增高明显，三维重建显示缺损范围较之前有所减小；标本苏木精-伊红染色后缺损部可见大量含血管成分的纤维结缔组织，有骨样组织结构形成，Mallory三色染色显示有褐红色成熟骨组织形成，其旁边有淡蓝色软骨样组织。修复后12周，冠状位CT显示缺损区基本被骨痂填满，三维重建示缺损基本修复；缺损区域和周围骨组织形成骨性结合，骨小梁粗大，哈弗氏系统成熟。 结论：海藻酸钠-明胶共混体系/成骨细胞凝胶以软骨化骨的形式成功修复了兔颅骨极限缺损。在修复过程中，CT冠状位扫描可准确反映出各阶段成骨的过程，但三维重建有一定的局限性，对成骨的判断会产生一定的误差。     

改进倒“L”法一期矫治单睑伴内眦赘皮

目的：探索内眦开大术同时行重睑成形术的新方法。方法：根据内眦赘皮的倒＂L＂法,并设计内眦处微小三角瓣,同时行重睑术,利用重睑线切口调整内眦处微小三角瓣,矫正内眦赘皮同时行重睑成形术。结果：通过临床56例就医者的临床观察及术后随访,发现所有就医者术后内眦赘皮均达到矫正目的,同时形成了重睑,局部瘢痕不明显。结论：该方法适用于轻中度单睑合并内眦赘皮的矫正,它是一种远期效果确切、疗效稳定的内眦赘皮术,值得临床推广。     

大鼠皮肤创面自然愈合中胰岛素样生长因子I和增殖细胞核抗原的表达

目的：研究胰岛素样生长因子I(IGF-1)对大鼠皮肤创面愈合过程的影响。方法：以大鼠为动物模型，在伤后1，4，7，11，14，和17d取材，利用免疫组织化学和图像分析，研究皮肤创面自然愈合过程中创面IGF-1前体、内源性IGF-1和增殖细胞核抗原(PCNA)的动态变化，以及它们与创面愈合相关因素成纤维细胞之间的关系。结果：在皮肤创面自然愈合过程中，内源性IGF-1表达量的变化与成纤维细胞活动、PCNA表达的变化基本相符，与IGF-1前体的变化关系不密切。结论：刨面愈合过程中，在局部发挥生理效应的IGF-1主要来自刨面以外的来源。内源性IGF-1与成纤维细胞增殖、活跃程度密切相关。     

基于网络药理学和分子对接方法研究羚珠散抗小儿易感病毒的作用机制

目的 运用网络药理学和分子对接技术研究羚珠散抗小儿易感病毒的有效成分和作用机制。方法 利用TCMID数据库查找羚珠散的化学成分,利用TCMSP、Pubchem、Swiss Target Prediction、SEA和STITCH数据获得羚珠散活性化合物的作用靶点;通过GeneCards数据库获得相关病毒性疾病靶点,取交集后得到共有靶点,即为羚珠散抗小儿易感病毒的潜在作用靶点。通过STRING数据库构建交集靶点的蛋白质相互作用（PPI）网络,基于degree值筛选重要靶点。利用DAVID平台对重要靶点进行基因本体论（GO）功能和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。使用Cytoscape软件进行化合物–靶点网络拓扑分析,获得羚珠散抗小儿易感病毒的关键化合物和核心靶点。采用AutoDock Vina软件对筛选出的关键靶点和核心化合物进行分子对接验证。结果 共获得91个活性化合物以及184个药物–疾病交集靶点,经筛选获得羚珠散抗小儿易感病毒15个核心化合物（桉油烯醇、桉脂素、丁香烯、乙酸龙脑酯等）以及3个核心靶点[C反应蛋白（CRP）、趋化因子2(CCL2)、血红素加氧酶1(HM...