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中国版纳猪MHCI类P1分子全长的原核表达与纯化 总被引:8,自引:0,他引:8
目的:获得原核表达的中国版纳猪SLAI类P1蛋白质分子。方法:PCR扩增去信号肽的SLAI类P1cDNA序列,亚克隆至pGEMT载体,测序。将亚克隆的P1 cDNA片段插入表达载体pET42b(+),构建重组表达质粒pET-42b(+)/sla-pl,转化E·coli表达菌 BL21-CodonPlus(DE3)-RIL,IPTG诱导 P1-8 x his融合蛋白表达,经包涵体洗涤,8 mol/L尿素变性溶解,Ni2+亲和层析,梯度透析后,定量保存。SDS-PAGE、western-blotting鉴定目的蛋白的表达与纯化。结果:目的蛋白(分子量39.5 kD)表达量占细菌总蛋白 15%,每升表达菌获得纯度95%的目的蛋白 40 mg~60mg。结论:成功建立猪 SLA分子全长原核表达、纯化体系,为建立间接识别猪移植抗原SLAI类分子的人T细胞系及表位分析打下基础。 相似文献
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目的: 克隆小鼠pdx-1基因,构建其真核表达载体,并在小鼠胚胎干细胞中表达,为糖尿病的细胞移植治疗奠定基础。方法: PCR扩增小鼠胰腺pdx-1基因 cDNA,酶切后和携带绿色荧光蛋白报告基因的真核表达载体pEGFP-N1重组,将pdx-1基因 cDNA片段连接到pEGFP-N1载体的多克隆位点,形成重组载体pEGFP/pdx-1,转化大肠杆菌DH5α菌株,构建成pdx-1基因真核表达载体质粒。扩增DH5α后抽提质粒DNA,Hind Ⅲ 和BamHⅠ酶切,电泳,DNA测序鉴定。鉴定正确的质粒DNA用脂质体包裹后转染小鼠胚胎干细胞MESPU13。结果: 从小鼠胰腺cDNA扩增出876 bp的DNA片段并成功重组到pEGFP-N1载体中。经酶切和DNA测序验证,插入载体的DNA片段为pdx-1基因,插入方向正确。重组质粒经脂质体转染胚胎干细胞MESPU13,24 h 后观察到绿色荧光蛋白报告基因和目的基因的pdx-1表达。结论: 小鼠pdx-1基因的克隆和真核表达载体构建获得成功,为进一步研究其功能奠定了基础。 相似文献
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目的:研究准分子激光原位角膜磨镶术(laser in situ keratomileusis,LASIK)角膜瓣复位后的黏附机制。方法:实验组24只新西兰兔分别为8组,每组3只;对照组3只。左眼按近视-10.00D行LASIK术。分别于术后即刻、24h、1周、2周、1月、3月、6月及12月行裂隙灯显微镜检查,并取角膜行光镜观察及免疫组织化学染色,检测细胞外基质(extracellular matrix,ECM)成分,包括I型胶原、Ⅲ型胶原、Ⅳ型胶原、纤维连接蛋白(cellualr fibronection,cFN)、细胞黏合素(tenascin,TN)、Ⅳ型胶原及层黏连蛋白(laminin,LN)。结果: 裂隙灯显微镜检查术后角膜瓣贴附紧密;光镜观察角膜瓣交界面早期存在缝隙,晚期贴附紧密;免疫组织化学检测角膜瓣交界面术后早期有cFN的明显表达及Ⅲ型胶原、Ⅳ型胶原的表达,无Ⅰ型胶原、Ⅳ型胶原、LN及TN的表达。结论:LASIK术后早期,角膜瓣与其下的基质层之间的黏附由FN、Ⅳ型胶原及Ⅲ型胶原完成。 相似文献
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Candida krusei发酵生产甘油过程中,菌体生长由玉米浆限制,菌体对玉米浆的得率为1.63g/g,培养其中玉米浆浓度相同时,增加渗透压或通过流加补料限制生长阶段的菌体生长,可使甘油生产阶段的比耗糖速率减慢,比耗糖速率保持在不很高的水平,可以因消耗的葡萄糖用于生长,维持,甘油和副产物形成所占比例的变化而提高甘油得率。 相似文献
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三峡建坝生态环境改变与血吸虫病传播关系研究 总被引:18,自引:2,他引:16
三峡工程是一项规模宏大的开发治理长江的综合性工程 ,它具有防洪、发电、航运、养殖、供水等多项效益 ,它的建成对我国经济发展具有重大的影响。但国内外的一些水利工程建成后都不同程度地对生态环境带来一系列影响 ,造成血吸虫病的蔓延 ,三峡建坝与血吸虫病关系如何是一个需要深入研究的课题。1 研究方法1 1 水文、泥沙资料长江水利委员会提供 ,部分资料为实地调查所得。1 2 流行病学调查人畜感染情况 ,中间宿主分布及扩散情况。1 3 社会经济行为因素调查以问卷调查居民社会、经济行为状况 ,人畜流动情况。1 4 类比调查 选择与三峡… 相似文献
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医学中文期刊的刊名与其他文种的期刊明显不同,利用其文种的刊名的特点,进行编目与排架,制定一套专业化、系列化的管理模式,不仅能使工作去繁从简、省时省力,同时也能提高检索效果,使取刊、归架准确无误. 相似文献
40.
Objective To develop a Chinese-made electrolytic detachable coil (CEDC) that would allow patients to enjoy the benefit of electrolytic detachable coil without having to rely on the expensive Guglielmi detachable coil (GDC), and to test the safety and efficiency of CEDC. Methods Radiopacity of the marker of the CEDC was tested. The anti-strain force of coils and connection points were measured. In vitro and in vivo electrolyses were conducted. We produced 21 aneurysm models including lateral, bifurcation, and terminal aneurysm models, and embolized 18 models with CEDC. Results Radiopacity of the marker was satisfactory. Anti-strain of the coil and the connection point have shown the safety and efficiency of CEDC. Electrolysis in vitro and vivo, was similar to that of GDC. 83% of the aneurysm models were completely occluded. Coils were found to induce thrombosis in the aneurysm cavity, and could lead to a new endothelium over the entrance of the aneurysm, with organized tissue replacing thrombosis in 2 months. Conclusions CEDC is as efficient and safe as GDC. The marker, the ability to induce thrombosis inside the sac and the growth of new endothelium over the orifice are very satisfactory. 相似文献