波生坦对高糖诱导静脉内皮细胞血管表达的影响

目的研究波生坦对高糖诱导静脉内皮细胞血管表达的影响。方法提取健康剖腹产孕妇脐静脉内皮细胞,在体外人工培养、分化、制成细胞悬液并培养。将内皮细胞随机分为3组:正常组、模型组、实验组。正常组加入正常糖浓度5.5 mmol·L^-1;模型组加入糖浓度30 mmol·L^-1;实验组在模型组的基础上加入波生坦0.1 mmol·L^-1,各组培养24 h。用荧光实时定量PCR法检测人体静脉内皮细胞血管的内皮生长因子(VEGF)、转录活化因子3(STAT3)、Toll样受体4(TLR4)水平,用免疫印迹法检测人体静脉内皮细胞的磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶(pE RK1/2)表达水平。结果模型组加入高糖0,12,24 h后,VEGF水平分别为0.14±0.02,0.25±0.04,0.41±0.07,pE RK1/2水平分别为0.50±0.07,1.27±0.24,1.92±0.16,加糖24 h后与加糖前比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。加入药物24 h后,实验组、模型组和正常组VEGF水平分别为0.07±0.01,0.41±0.07,0.26±0.03;这3组的TLR4分别为0.70±0.07,1.94±0.32,1.28±0.12;这3组的p ERK1/2分别为0.66±0.05,1.92±0.16,0.92±0.02,模型组与正常组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);实验组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论波生坦可以有效减少高糖诱导静脉内皮细胞血管VEGF的表达,其机制可能与波生坦抑制ERK信号通路有关。     

同型半胱氨酸和视黄醇结合蛋白4与糖尿病视网膜病变的相关性研究

目的　检测并分析同型半胱氨酸（ｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ,Ｈｃｙ）及视黄醇结合蛋白４（ｒｅｔｉ-ｎｏｌｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ４,ＲＢＰ４）与糖尿病视网膜病变（ｄｉａｂｅｔｉｃｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ,ＤＲ）的关系,以探讨对特定人群ＤＲ的诊断方法。方法　选取２０１４年６月到２０１５年６月桂林医学院附属医院内分泌科就诊的２型糖尿病患者２００例,所有患者进行眼底检查必要时行眼底荧光血管造影（ｆｕｎｄｕｓｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎａｎｇｉｏｇｒａｐｈｙ,ＦＦＡ）,根据眼底情况分为增殖期糖尿病视网膜病变（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅｄｉａｂｅｔｉｃｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ,ＰＤＲ）组、非增殖期糖尿病视网膜病变（ｎｏｎ-ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅｄｉ-ａｂｅｔｉｃｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ,ＮＰＤＲ）组,以及非糖尿病视网膜病变（ｎｏｎ-ｄｉａｂｅｔｉｃｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ,ＮＤＲ）组;检测各组空腹血糖（ｆａｓｔｉｎｇｐｏｓｔｐｒａｎｄｉａｌｇｌｕｃｏｓｅ,ＦＰＧ）、餐后２ｈ血糖（２-ｈｏｕｒｐｏｓｔｐｒａｎｄｉａｌｇｌｕｃｏｓｅ,２ｈＰＧ）、糖化血红蛋白（ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｅｄｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ,ＨｂＡ１ｃ）、血脂、Ｈｃｙ、ＲＢＰ４水平。结果　ＰＤＲ组的Ｈｃｙ（１７．６０±４．４７）μｍｏｌ·Ｌ－１、ＲＢＰ４（１６．３２±３．５７）μｇ·ｍＬ－１及ＮＰＤＲ组的Ｈｃｙ（１３．０１±２．８０）μｍｏｌ·Ｌ－１、ＲＢＰ４（１２．２５±２．４５）μｇ·ｍＬ－１水平明显高于ＮＤＲ组的Ｈｃｙ（６．９９±２．３３）μｍｏｌ·Ｌ－１、ＲＢＰ４（８．８９±１．９０）μｇ·ｍＬ－１,且随着ＤＲ病情的进展逐渐升高,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）;ＰＤＲ组病程、２ｈＰＧ、ＨｂＡ１ｃ、ＴＧ、ＬＤＬ-Ｃ、Ｈｃｙ、ＲＢＰ４水平明显高于ＮＰＤＲ组、ＮＤＲ组（均为Ｐ＜０．０５）。相关分析显示,２型糖尿病患者的ＲＢＰ４与病程、年龄、ＨｂＡ１ｃ、ＦＰＧ、２ｈＰＧ、ＴＣ、ＴＧ、ＬＤＬ-Ｃ、Ｈｃｙ呈显著正相关,与ＨＤＬ-Ｃ呈负相关。对ＤＲ的危险因素进行多元回归分析结果显示,病程、ＨｂＡ１ｃ、ＲＢＰ４、Ｈｃｙ是影响ＤＲ的主要危险因素。结论　测定Ｈｃｙ及ＲＢＰ４可及早发现ＤＲ,为早期筛查及治疗提供一定的方向。     

T2DM 小型猪模型骨骼肌、 肝脏及胰腺组织蛋白激酶 B 表达及磷酸化的变化

摘要： 目的 研究高脂高糖饮食联合链脲佐菌素 （STZ） 构建巴马小型猪 2 型糖尿病 （T2DM） 模型的可行性, 并观 察小型猪模型骨骼肌、 肝脏及胰腺组织蛋白激酶 B（PKB）表达及磷酸化变化。方法 将健康雄性巴马小型猪 10 只 随机分为 2 组： 对照组 5 只, 喂养普通饲料; 糖尿病模型组 5 只, 高脂高糖饮食联合 STZ 构建巴马小型猪 T2DM 模 型。检测 2 组小型猪空腹血糖、 空腹胰岛素水平, 并计算胰岛素抵抗指数 （HOMA-IR）。采用 Western blot 法检测骨 骼肌、 肝脏及胰腺组织中 PKB 蛋白表达及磷酸化水平。结果 （1） 高脂高糖饲料喂养 10 个月后, 与对照组比较, 模 型组体质量、 空腹血糖、 空腹胰岛素水平及 HOMA-IR 明显升高 （P＜0.01）。（2） 与对照组相比, 模型组 STZ 给药后空 腹血糖水平进一步升高, 空腹胰岛素水平明显下降 （P＜0.01）。（3） 与对照组比较, 模型组骨骼肌、 肝脏及胰腺组织中 PKB 蛋白表达及磷酸化水平明显降低 （P＜0.05）。结论 高脂高糖饮食联合 STZ 多次腹腔注射可以成功构建 T2DM 小型猪模型, 模型组小型猪骨骼肌、 肝脏及胰腺组织 PKB 蛋白表达及磷酸化水平明显降低     

Graves眼病患者临床活动性评分与细胞免疫关系的探讨

目的:通过研究早期Graves眼病(GO)患者(病程＜2年)的T细胞亚群和其Th1和Th2细胞因子,探讨免疫机制在GO起病中的作用及与眼病炎症活动之间的关系.方法:①采用流式细胞仪检测早期Graves眼病和正常对照组的T细胞亚群和CD8-/IL-4 和CD8-/IFN-γ T细胞的百分含量;②对早期GO的临床活动性评分(CAS,clinical activity score )和T细胞亚群、CD8-/IFN-γ T细胞和CD8-/IL-4 T细胞之间的关系进行相关分析.结果:①在早期GO患者中,CD4 T细胞和CD4 T细胞/ CD8 T细胞比值增高,CD8-/IFN-γ 细胞的百分含量和CD8-/IFN-γ T细胞/CD8-/IL-4 T细胞比值显著增高;②在早期GO患者中,CAS与CD8-/IFN-γ T细胞的百分含量和CD8-/IFN-γ T细胞/CD8-/IL-4 T细胞的比值呈正相关(P＜0.05),与T细胞亚群、CD8-/IL-4 T细胞的百分含量无相关关系(P＞0.05).结论:①在早期GO中,存在着T细胞亚群的失衡,以CD4 Th1细胞介导的细胞免疫在早期GO的发病机制中起了重要作用;②CD8-/IFN-γ T细胞和CD8-/IFN-γ T细胞/CD8-/IL-4 T细胞的比值可以作为反映GO眼球后组织增生及眼病活动性的临床指标.     

老年2型糖尿病患者肾损害不同时期胱抑素-C测定结果分析

目的 分析和比较胱抑素-C（Cys C）、肌酐（Cr）、24小时尿微量白蛋白（MUAlb）等指标,测定在糖尿病不同肾功能损害期患者中的变化.方法 设正常对照组40例;收集2型糖尿病正常白蛋白尿组（NA组）58例;2型糖尿病微量白蛋白尿组（MA组）70例;2型糖尿病临床蛋白尿组即临床糖尿病肾病组（CDN组）47例.分别测定各组血清Cys C、血尿素（BUN）、Cr、MUAlb,根据公式计算内生肌酐清除率（Ccr）,对各指标进行统计学分析.结果 老年糖尿病患者慢性肾功能损害由NA组到MA组血清Cys C水平、MUAlb水平呈逐渐升高趋势,且MA组及CDN组均较对照组及NA组明显升高,差异有统计学意义（P ＜0.05）;BUN、Cr升高及Ccr降低仅在CDN组有明显统计学意义（P＜0.05）.结论 血清Cys C水平是反映老年2型糖尿病早期慢性肾功能损害的良好指标.     

妊娠糖尿病患者IR与脂肪细胞因子的关系

目的探讨妊娠糖尿病（GDM）患者胰岛素抵抗（IR）与脂联素（ADI）、瘦素（Leptin）的关系。方法测定40例GDM患者（GDM组）及34例正常人（对照组）空腹血糖（FPG）、胰岛素（FINS）、ADI、Leptin、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蚕白（HDL）,以及餐后2h血糖（2hPG）、胰岛素（0hINS）,计算胰岛素抵抗指数（IRI）.结果两组ADI、Leptin,IRI比较有统计学差异（P〈0.05）。Pearson相关分析显示,GDM组IRI与年龄、孕周、体质量指数（BMI）、TG、TC、LDL、FPG、FINS、2h INS、Leptin呈正相关（P〈0．05,〈0.01）,与ADI呈负相关（P〈0.01）。多元线性逐步回归分析结果显示,BMI、ADI、Leptin是影响GDM患者IR的独立危险因素。结论GDM患者存在明显IR,ADI、Leptin与GDM患者IR有关。     

普伐他汀和CRP对ADP诱导的血小板凝血酶受体 PAR-1表达的调节

目的：探讨普伐他汀对二磷酸腺苷（ADP）诱导的血小板PAR‐1表达的影响及机制。方法体外分离富血小板血浆,分别给予C反应蛋白（CRP）、普伐他汀干预和ADP刺激进行体外研究。试验分组分别为：对照组,单纯ADP组,低浓度普代他汀＋ADP组,高浓度普伐他汀组＋ADP组,CRP组,普伐他汀＋CRP联合组。采用流式细技术检测PAR‐1和LOX‐1平均荧光强度（M FI）。采用酶联免疫试验检测TXB2和F1＋2水平。结果5μmol／L ADP刺激能促使血小板PAR‐1表达增加35％。50μg／mL CRP显著降低ADP诱导的血小板PAR‐1的表达（P＜0．01）。1μmol／L、10μmol／L普伐他汀均显著降低ADP诱导的血小板PAR‐1的表达（P＜0．01）。联合应用CRP和普伐他汀更能降低ADP诱导的血小板PAR‐1表达,较单独使用CRP或普伐他汀降低更显著（P＜0．05）。单纯ADP刺激后TXB2较基础时明显增高（P＜0．01）,50μg／mL CRP、10μmol／L普伐他汀干预后ADP刺激的TXB2分别下降为（112．68±24．48）pg／mL、（146．48±46．54）pg／mL ,与单纯ADP刺激比较,差异均有统计学意义（P＜0．01）。50μg／mL CRP显著增加ADP诱导的F1＋2水平（P＜0．01）,10μmol／L普伐他汀对ADP诱导F1＋2的生成无明显影响。普伐他汀呈浓度依赖性的方式降低ADP诱导的血小板LOX‐1表达（1μmol／L和10μmol／L普伐他汀处理后M FI分别为：1．80±0．19和1．62±0．16）,与单纯ADP刺激后LOX‐1表达（MFI：3．16±0．23）比较,差异有统计学意义（P＜0．01）。50μg／mL CRP对ADP刺激的血小板LOX‐1表达无明显影响。结论 PAR‐1在ADP诱导的血小板活化中起重要作用,普伐他汀和CRP通过不同机制明显降低ADP诱导的血小板PAR‐1的表达,提示在炎症状态下他汀仍能起着重要的抗血栓作用。     

细胞相互作用对PAF、系膜细胞paf-R基因表达的影响及阿托伐他汀的干预作用

目的:探讨高糖高脂条件下内皮细胞与系膜细胞相互作用对PAF产生、系膜细胞paf-R基因表达的影响及阿托伐他汀的干预作用。方法:内皮细胞与系膜细胞共培养和系膜细胞单独培养后随机,分为对照组、甘露醇组、高糖高脂组、阿托伐他汀组,培养24h后,ELISA法检测各组细胞上清液PAF含量,实时荧光定量检测系膜细胞paf-RmRNA表达。结果:(1)高糖高脂促进共培养组和单培养组PAF升高(P0.05),共培养组PAF均较单培养组升高(P0.05);(2)高糖高脂可上调系膜细胞paf-R mRNA表达(P0.05);(3)共培养和单培养条件下,阿托伐他汀可抑制高糖高脂引起的PAF升高(P0.05),并可抑制高糖高脂引起的系膜细胞paf-RmRNA表达上调(P0.05)。结论:(1)高糖高脂环境下,系膜细胞和内皮细胞存在异常的相互作用,这种作用促进PAF产生;(2)高糖高脂促进系膜细胞paf-R基因表达,使PAF的生物效应进一步放大;(3)阿托伐他汀可影响高糖高脂条件下内皮细胞与系膜细胞之间的相互作用。     

Graves病病人外周血T淋巴细胞和甲状腺自身抗体的检测

目的：观察Graves病病人外周血T细胞亚群、Th1／Th2细胞极化的变化,探讨细胞免疫在Graves病发病中的作用。方法：①采用流式细胞仪检测20例未经治疗的Graves病病人的T细胞亚群和CD8^-／IFN-γ^＋细胞和CD8^-／IL-4^＋T细胞的百分含量;②化学发光法检测FT3、FT4、s—TSH,放射免疫法检测TRAb、TGAb、TMAb;③观察Graves病病人经他巴唑（30mg／d）治疗1个月后T细胞亚群和CD8^-／IL-4^＋T细胞和CD8^-／IFN-γ^＋T细胞的百分含量的变化情况。结果：①Graves病病人较正常对照人群的CD4^＋T细胞与CD4^＋T细胞／CD8^＋T细胞比值增高;CD8^-／IL-4^＋T（Th2）细胞的百分含量增高;CD8^-／IFN-γ^＋T细胞／CD8^-／IL-4^＋T细胞比值（Th1／Th2）下降（均P〈0．05）;②Graves病病人的FT3、FT4较正常对照组明显增高（均P〈0．01）,但s-TSH明显降低（P〈0．01）,TRAb、TGAb、TMAb明显增高（均P〈0．05）;③他巴唑治疗1个月后,T细胞亚群、CD8^-／IL-4^＋T细胞和CD8^-／IFN-γ^＋T细胞百分含量,以及CD8^-／IFN-γ^＋T细胞／CD8^-／IL^-4^＋T细胞比值与治疗前相比均无显著差异。结论：在Graves病人外周血中Th2细胞亚群比例占明显优势,Th1／Th2细胞极化向Th2偏移,甲状腺特异的自身抗体增高,证明Graves病的发病与Th2型细胞介导的体液免疫直接相关。     

Graves眼病患者T细胞亚群的研究

采用流式细胞仪检测早期Graves眼病（GO）组、非突眼Graves病（GD）组和正常对照组的T细胞亚群、IFN-γ^＋T细胞和IL-4^＋T细胞。结果显示早期GO存在T细胞亚群失衡，以CD4^＋Th1细胞介导的细胞免疫为主。