白藜芦醇对人CIK细胞功能的影响

目的探讨白藜芦醇对人C IK细胞生长以及体外杀伤活性的影响。方法体外常规法培养CD3＋CD56＋达15%以上的C IK细胞。用不同浓度的白藜芦醇诱导人CIK细胞48 h后：MTT比色法检测人CIK细胞增殖力、流式细胞术（FCM）测定CIK细胞表达的穿孔素和颗粒酶B的变化和乳酸脱氢酶释放法测定CIK细胞对胃癌细胞株SGC-7901的杀伤活性。结果白藜芦醇浓度在0～1.6μmol/L时能促进C IK细胞生长,并增加CIK细胞穿孔素、颗粒酶B的含量表达。当浓度大于3.1μmol/L时可抑制CIK细胞生长,并随着药物浓度的递增抑制率逐渐增加。结论白藜芦醇在一定浓度下可促进CIK细胞生长,提高CIK细胞的杀伤活性。     

白血病细胞、多种肿瘤细胞及胃癌组织中pokemon基因的定量检测

目的 建立检测pokemon基因表达的实时荧光定量PCR的方法,用以研究pokemon在白血病细胞、多种肿瘤细胞株及胃癌组织中的表达水平.方法 通过RT-PCR、T-A克隆、real-time PCR等方法精确测定并比较pokemon基因在白血病细胞、人结肠癌细胞株(SW480)、人胃癌细胞株(SGC)、人肺癌细胞株(LTEP)、人髓系白血病细胞株(U937)、人前列腺癌细胞株(PC3)、人宫颈癌细胞株(HELA)、人内皮细胞株(UEVC-304)、健康人外周血单个核细胞(PBMC)、胃癌组织中的表达水平.绘制pokemon基因real-time PCR的标准曲线.结果 急性淋巴细胞白血病(ALL)中pokemon的表达显著高于急性粒细胞白血病(AML)和慢性粒细胞白血病(CML)及健康人PBMC(P＜0.05);SW480中的表达量明显高于SGC、LTEP、U937、PC3、HELA和UEVC-304(P＜0.05);胃癌组织表达量高于胃癌旁组织,阳性率为5/7.结论 建立的测定pokemon基因表达的real-time PCR方法稳定、准确,pokemon基因可以作为某些肿瘤的一个新的靶点,其表达水平的检测可作为判断某些肿瘤发生的参考指标.     

手术分娩对产妇和新生儿血中NK细胞的影响

目的:探讨手术分娩对产妇和新生儿血NK细胞数量的影响?方法:足月分娩产妇60例,其中自然分娩(NL)组?择期剖宫产(PCS)组?临产后剖宫产(ECS)组各20例?分别采取分娩即刻的产妇外周血和新生儿脐血,采用流式细胞仪检测血中NK细胞的百分数?结果:血中 NK细胞百分数在产妇中3组无差异(P > 0.05);PCS组的新生儿血中NK细胞百分数明显低于NL组 (P < 0.05),同时也低于其母体产妇(P < 0.01)?结论:手术分娩不影响产妇血中NK细胞数;择期剖宫产减少新生儿血中NK细胞数,手术分娩儿增加了对病原体的易感性?     

PACAP对创伤性脑损伤大鼠CD4+/CD8+T细胞水平的影响

目的 观察垂体腺苷酸环化酶激活肽(pituitary adenylate cyclase activiting polypeptide,PACAP)对大鼠创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)的影响及对血液和脾脏CI4+、CD8+T细胞数量的影响.方法 所有实验均在在江苏省麻醉学重点实验室内完成.将雄性SD大鼠随机(随机数字法)分为假手术组(n=6)、生理盐水+ TBI组(n=6)、PACAP+TBI组(n=6),采用大鼠创伤性脑损伤模型,于创伤前20min侧脑室微量注射PACAP 1μg/5μl,创伤后24h取材,采用HE染色方法观察脑组织损伤程度,采用流式细胞术检测各组大鼠血液及脾脏中CI4+、CD8+T细胞的数量.实验结果采用完全随机设计方差分析法.结果 与假手术组比较,TBI大鼠创伤周围皮层神经元水肿、坏死,海马神经元排列紊乱,血液和脾脏CI4+T细胞的数量减少(P=0.000,P =0.005),CD8+T细胞的数量增加(P=0.01);侧脑室内微量注射PACAP后,能明显减轻TBI大鼠皮层和海马的神经元损伤,增加血液和脾脏CD4+T细胞的数量(P=0.019,P=0.839),降低CD8+T细胞的数量.结论 侧脑室微量注射PACAP能减轻大鼠创伤性脑损伤,可能与其对T细胞影响有关.     

Toll样受体7激动剂对K562细胞抑制作用的研究

本研究旨在探讨Toll样受体(TLR)7激动剂gardiquimod对人慢性髓系白血病细胞K562的抑制作用。以异戊烯焦磷酸法扩增人外周血γδT细胞。用不同浓度的gardiquimod处理γδT细胞和K562细胞48 h,用MTT法检测细胞增殖情况。以流式细胞术检测gardiquimod处理前后K562细胞内TLR7表达、细胞周期及凋亡的变化。用CCK-8试剂盒检测γδT细胞对K562的杀伤活性。结果表明,gardiquimod 0.69-11.0μg/ml可明显促进γδT细胞增殖,在5.5-11.0μg/ml浓度下抑制K562细胞增殖;gardiquimod处理K562细胞后未检测到凋亡,但细胞周期有明显变化,而且处理后的K562细胞更易被γδT细胞杀伤。结论:gardiquimod能够抑制K562细胞增殖,阻滞细胞周期,并增强其对γδT细胞杀伤的敏感性。     

葛根素对γδT细胞杀伤肝癌SMMC-7721细胞的影响

目的探讨葛根素对人γδT细胞杀伤肝癌SMMC-7721细胞的影响及机制。方法异戊烯焦磷酸法(isopentenylpyrophosphate,IPP)体外扩增人外周血γδT细胞,不同浓度葛根素作用于γδT细胞24,48,72 h,CCK8法检测葛根素对γδT细胞增殖率的影响,FCM检测γδT细胞穿孔素(perforin,PFP)、颗粒酶B(granzyme B,Gra B)及CD107a的表达情况,LDH释放法检测γδT细胞对肝癌SMMC-7721细胞的杀伤活性,Western blot法检测γδT细胞中P-ERK1/2和Bcl-2的表达情况。结果葛根素作用人γδT细胞48 h后,葛根素1.6~100μmol·L?1浓度组的γδT细胞增殖明显(P<0.05),葛根素12.5~50μmol·L?1浓度组人γδT细胞PFP、Gra B及CD107a表达明显高于对照组(P<0.05),葛根素3.125~50μmol·L?1浓度组人γδT细胞P-ERK1/2和Bcl-2表达显著增高(P<0.05),且葛根素3.125~50μmol·L?1浓度组人γδT细胞对肝癌SMMC-7721细胞杀伤活性较对照组明显增强(P<0.05)。结论葛根素能够促进人γδT细胞增殖,并能够提高γδT细胞对肝癌SMMC-7721细胞的杀伤活性,其机制可能与上调γδT细胞表面的PFP,Gra B和CD107a的表达及活化P-ERK1/2和Bcl-2的表达有关。     

白桦脂酸对人NK细胞杀伤SW1990胰腺癌细胞影响及机制探讨

目的观察中药白桦脂酸对人NK细胞杀伤SW1990胰腺癌细胞的影响,并初步探讨可能机制。方法分离健康人外周血单个核细胞,细胞因子诱导培养NK细胞达实验要求;不同浓度(0.025、0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2、6.25、12.5、25、50和100μg/mL)的白桦脂酸分别诱导NK细胞、SW1990胰腺癌细胞48h后,CCK8法检测白桦脂酸对NK细胞增殖的影响;四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法检测白桦脂酸对SW1990胰腺癌细胞株增殖的影响;流式细胞术(flow cymetory,FCM)检测白桦脂酸作用48h后NK细胞颗粒酶B、穿孔素、IFN-γ和CD107a的表达;乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放法检测白桦脂酸对NK细胞杀伤SW1990胰腺癌细胞的影响;蛋白质印迹法检测白桦脂酸对NK细胞表达磷酸化的ERK1/2(phosphorylation-ERK1/2,p-ERK1/2)的影响。结果培养10d的NK细胞比例达74.43%。与对照组比较,白桦脂酸在其浓度为0.4、0.8、1.6、3.2、6.25、12.5和25μg/mL时显著促进NK细胞增殖,F=129.476,P<0.01;并抑制胰腺癌细胞增殖,F=278.222,P<0.01。浓度为0.05、0.2、0.8和3.2μg/mL的白桦脂酸作用NK细胞48h后,与对照组比较均能促进NK细胞对SW1990胰腺癌细胞的杀伤,F=36.451,P<0.05。与对照组比较,白桦脂酸在浓度为0.2和0.8μg/mL时不同程度促进NK细胞颗粒酶B、穿孔素、IFN-γ和CD107a的表达,P<0.05。与对照组比较,浓度为0.8、3.2和12.5μg/mL的白桦脂酸可促进NK细胞表达p-ERK1/2,F=83.708,P<0.05。结论白桦脂酸在一定的浓度范围内能够增强NK细胞对SW1990胰腺癌细胞的杀伤作用,其作用机制可能通过促进NK细胞增殖,抑制胰腺癌细胞增殖,激活NK细胞内ERK信号通路,提高NK细胞颗粒酶B、穿孔素、IFN-γ和CD107a的表达。     

乙肝患者自身CD3AK细胞抗病毒近期疗效观察

目的　观察抗CD3单克隆抗体激活的杀伤 (CD3AK)细胞过继回输治疗乙型肝炎的近期治疗效果。方法　从乙肝病人外周血获得单个核细胞 (PBMCs) ,用抗CD3单抗和IL_2体外诱导培养 ,7天后将培养的CD3AK细胞回输给病人 ;平均 1个疗程回输细胞数为 8～ 10× 10 9;检测T细胞亚群和HBVDNA含量变化情况。结果　CD3AK细胞过继回输治疗后 ,CD3 + 、CD4+ 、CD8+ 细胞均比治疗前明显增高 ;随着免疫治疗时间的延长 ,HBVDNA含量呈下降趋势。结论　CD3AK细胞过继免疫治疗可增强患者的细胞免疫功能 ,降低血清病毒含量 ,是一种安全有效的乙肝治疗方法。     

肺结核引起类白血病反应误诊为慢性白血病1例

患者，男，27岁，因低热、乏力5月，咳嗽、咳痰1月于2002年4月3日入院。2001年11月患者在某省打工时出现午后低热、易出汗、乏力，未诊治，后又出现纳差、腹胀、夜间左上腹疼痛，自己于左上腹触及1肿块。2002年1月20日到某医院就诊。经骨髓检查诊断为慢性粒细胞性白血病。住院期间给予高三尖杉酯碱、阿糖胞苷、羟基脲等药物治疗。后因经济困难，     

白藜芦醇增强人NK细胞杀伤肺癌细胞株A-549的体外研究

研究白藜芦醇对人NK细胞体外增殖及杀伤肺癌细胞A-549的影响。用SCGM培养基体外扩增人NK细胞,10 d后用不同浓度的白藜芦醇作用于NK细胞48 h后,MTT法测生长曲线,流式细胞仪检测NK细胞表面穿孔素、颗粒酶B及CD107a的表达;LDH法检测NK细胞对肺癌细胞株A-549的杀伤活性。结果发现,培养10 d后NK细胞纯度达到68%左右,不同浓度白藜芦醇处理NK细胞48 h后,白藜芦醇在浓度0.05-12.5μmol/L可以促进NK细胞的生长,并增加NK细胞表面颗粒酶B、穿孔素及CD107a的表达,对肺癌A-549细胞的杀伤活性在白藜芦醇浓度为0.75μmol/L显著高于对照组。以上实验结果提示,白藜芦醇在一定浓度下能促进NK细胞的生长,且增加对肺癌细胞株A-549的杀伤活性。