应用白喉毒素-IL-2融合蛋白研究Q126D突变对IL-2功能的影响

IL 2是一非常重要的由 133个氨基酸组成的TH1细胞因子 ,从N端到C端依次为上、上后再下、下的 4个螺旋结构。位于C端的最后一个螺旋结构在其与相应受体的 β、γ亚基的结合中起重要作用。本文应用位点定向突变技术(Site directedmutagenesis)改造了位于第 4个螺旋结构中的第 12 6个氨基酸 ,使其由谷氨酰胺突变为天冬氨酸 ,并分别与白喉毒素 (DT)及其突变体组成融合蛋白 ,并以DT作指示系统 ,观察了这种改变对IL 2与受体结合及其功能的影响。首先将CRM 197(白喉毒素G5 2E突变株 )克隆入PSM30 8的EcoRⅠ与HindⅢ位点间 ,设计 1对分别…     

槲皮素和乙酸龙脑酯对细菌脂多糖诱导流产孕小鼠子宫组织中CD4+/CD8+ T细胞的影响

目的 探讨小鼠子宫组织中CD4⁺ 和CD8⁺ T细胞在早期胚胎丢失中的意义，研究槲皮素和乙酸龙脑酯对细菌脂多糖（LPS）诱导流产小鼠的保胎效果和对母胎界面免疫平衡的调节作用。 方法 采用LPS尾静脉注射，制造小鼠流产模型，孕4～7d分别口服不同保胎药物，用药前后检测各组（n=10）小鼠子宫组织CD4⁺/CD8⁺T细胞亚群的变化。 结果 LPS促流产后，小鼠子宫壁CD4+T细胞数量显著增多（P<0.01），CD8⁺ T细胞无明显变化（P>0.05），CD4⁺/CD8⁺比值显著升高（P<0.01）。预先口服保胎药物能不同程度抑制LPS的作用。其中以槲皮素和乙酸龙脑酯联合使用组的保胎效果最为明显，CD4^+/CD8⁺比值下降，较LPS流产模型组差异极显著（P<0.01）。 结论 小鼠子宫组织CD4^+/CD8⁺比值升高与早期胚胎丢失关系密切，槲皮素和乙酸龙脑酯能够调节小鼠子宫局部的免疫微环境，从而起到一定的促孕保胎作用。     

基于定向局部对比度的眼底图像视盘检测方法

视盘作为眼底图像的一个重要特征,其自动检测方法在眼底病变图像分析中有着重要的作用。提出一种基于定向局部对比度滤波的方法,有效地提取眼底图像中的局部亮度区域;结合视盘区域的局部血管特征,选择定位出正确的视盘感兴趣区域;采用数学形态学方法和区域主动轮廓模型,可较准确地检测出视盘轮廓。对开放的STARE数据库上的81幅眼底图像进行测试,其中含31幅正常和50幅病变图像（含严重病理图像）,用该方法正确检测出视盘73幅,准确率约为90.1%。结果表明,该方法有效地克服大块亮斑病灶对视盘检测的影响,且仅需提取粗血管,计算较为简单,说明了算法的有效性。     

无心跳供体肺支气管内气体三维流动的数值模拟研究

无心跳供体肺（NHBD）有望解决临床供肺严重不足的问题,肺内低温通气被公认为是NHBD肺在体低温保护的有效方法之一,可提高供肺的利用率。通过建立三维非对称四级支气管模型,运用计算流体动力学(CFD)方法对支气管内的气流流动特性进行数值模拟,并通过试验对数值模拟的边界条件进行验证。研究结果表明：在被动呼吸的吸气和呼气时,支气管截面上的无量纲速度分布不同,左肺支气管和右肺支气管截面上的速度分布也存在较大差异,其中左肺下叶支气管内中心线上的无量纲速度峰值最大,达到1.7,而右肺上叶支气管内中心线上的无量纲速度峰值最小,仅为0.8;由于分叉角度和管径不同,导致吸气过程中流入左主支气管内和右主支气管内的流量分别占55%和45%,而左肺下叶支气管内的流量比率在各肺叶支气管内的流量比率最高,约为35%;通过分析支气管内的流动压力损失,得出支气管的平均压降系数与Re的关系为p∝Re^－0.6。可见,由于支气管的非对称结构以及分叉处空间旋转角度的存在,使得支气管内的气体流动结构比较复杂,这对于无心跳供体肺原位通低温保存的临床实验研究有一定的参考价值。     

基于先验模板的表面肌电信号渐进分解算法研究

本研究通过将表面肌电信号（sEMG）分解为运动单元动作电位序列（MUAPTs）,来研究神经 肌肉系统中运动单元（MU）的募集与发放模式。针对高收缩力情况下MUAP叠加问题,首先采用FastICA算法和小波包去噪算法对信号进行预处理;然后基于先验知识构建了4种形态的可伸缩MUAP模板;最后,采用“先大后小”的渐进识别方式,逐个对MUAP进行自动提取。在此基础上,还将该算法应用于8名受试者（3组/人）不同手指活动模式下的指浅屈肌多通道（12通道）sEMG分解;单通道分解结果显示,高力量水平下sEMG中的主体MUAPTs能够被有效检测和分类;统计结果证实,随着力量水平的增加,MUAP的数目增加;不同大小MUAP比重的变化与活动手指和力量水平具有显著的相关性。本文的实验结果,初步验证了利用先验模板从sEMG中渐进提取MUAP的可行性,为sEMG分解和进一步研究MU发放规律提供于一种新的思路。     

鱼皮胶原蛋白海绵组织相容性的体内实验研究

为评价鱼皮胶原蛋白海绵作为植入型生物材料的组织相容性,对草鱼皮胶原海绵的体内细胞附着性、免疫原性、致炎性、稳定性与形变进行了实验研究,并与猪皮胶原海绵相比较。鱼皮酸溶性胶原蛋白（FA）、鱼皮酶溶性胶原蛋白（FP）和猪皮酶溶性胶原蛋白（PP）海绵均为细纤维组成疏松多孔显微结构。2 mm× 2 mm × 8 mm杆状胶原海绵植入SD大鼠后肢（每组n=6）长收肌1周,3种材料内部均有大量有核细胞入驻。比较炎性细胞浸润面积,FP组（（7.93 ± 0.77）mm2）与PP组（（7.49 ± 1.03）mm²）没有显著差异,FA组（（9.81 ± 1.42）mm²）与其他两组具有显著性差异。FP组材料截面变形但边缘清晰,疏松纤维结构完整。FA组材料边缘模糊,内部见散在断裂纤维。PP组材料边缘已失去,未见纤维结构。昆明小鼠（每组 n=5）接受胶原蛋白溶液注射后检测血清特异性IgG水平,酶联免疫吸光度值FA组（0.602 ± 0.036）、FP组（0.518 ± 0.019）、PP组（0.390 ± 0.085）,仅FA组与PP组间有显著性差异。以上结果显示三种材料均适于细胞附着,FP的免疫原性及致炎性接近于PP,FP海绵体内稳定性好于FA海绵与PP海绵。实验结果表明3种检测材料中鱼皮酶溶性胶原海绵（FP）具有组织相容性优势。     

基于超声体模的颈动脉血流介导血管扩张斑块高度测量方法比较

通过设计实验对超声体模的血管扩张功能(FMD)斑块高度进行了测量,对各种测量方法做出了定性与定量分析和比较,从而确定最佳的评估方法及软件,以用于颈动脉粥样硬化临床早期诊断和治疗。以颈动脉超声体模的实际尺寸作为金标准,对FMD斑块高度进行了测量,利用超声诊断仪专用软件和自行开发的分割软件,分别使用3种不同的测量方法：横向直接测量、横向间接测量和纵向直接测量,获取斑块的高度,并进行了比较和分析。结果表明,在横向间接测量方法中,超声诊断仪专用软件比自行开发的分割软件更为准确;而在横向直接测量和纵向直接测量中,自行开发的分割软件比超声诊断仪专用软件更为准确。自行开发的分割软件与超声诊断仪专用软件的测量结果在统计学上存在显著性差异(P<0.05),但两者相差的绝对值并不大（对应0.30、0.45、0.60 cm等 3种斑块高度,小于0.02 cm）。总体来说,超声诊断仪专用软件和自行开发的分割软件测量结果都接近于金标准,但自行开发的分割软件的精确性优于超声诊断仪专用软件     

基于改进的视觉CPT范式对注意缺陷多动障碍患儿额区ERPs的研究

采用事件相关电位（ERPs）来研究注意缺陷多动障碍（ADHD）患儿在选择注意任务下额区的神经活动。实验采用高密度的脑电采集仪来记录受试在执行改进的视觉持续性操作测试（Visual-CPT）范式下的ERPs,12名患儿（ADHD组）及13名健康儿童（对照组）参加本次试验。在Go和No-go条件下,分别对两组受试的行为学及ERPs进行分析和比较,并对结果进行双样本t检验。结果发现,ADHD组在实验过程中表现得较差,漏报率和错误率明显增加,而且反应时间明显延长;无论是Go条件还是No-go条件,潜伏期未见显著性差异,但是ADHD组相比对照组在额区表现出幅值显著低的N2成分（P<0.05）;此外,ADHD组在No-go条件下具有幅值显著高的P2成分（P <0.05）。结果表明,ADHD患儿在认知功能执行中产生障碍,而这种障碍可能与其额叶区域的ERPs波形幅值异常有关。     

乙型肝炎病毒X蛋白通过激活细胞外蛋白调节激酶转导机制上调大鼠系膜细胞肿瘤坏死因子-α的表达

目的 探讨乙型肝炎病毒(HBV)X基因编码的蛋白(HBx)导致大鼠系膜细胞(MC)增殖及TNF-α高表达的细胞外蛋白调节激酶(ERK)1/2信号转导机制.方法 PCR扩增HBV X基因,然后与真核表达载体PCI-neo质粒连接,构成含有HBV X基因的质粒(PCI-neo-X),采用限制性内切酶法及测序证实.采用脂质体法将PCI-neo-x转染入体外培养的大鼠MC,采用抑制剂U0126阻断ERK1/2通路,观察培养细胞增殖、TNF-α及其mRNA表达,以不加抑制剂作为对照.Western blot检测HBx、ERK1/2及磷酸化ERK(p-ERK)1/2表达.半定量RT-PCR检测TNF-α mRNA表达,酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养上清液TNF-α表达.甲基噻唑摹四唑(MTT)法检测MC增殖.结果 无论是否加入UO126,在转染PCI-neo-X 36,48 h后,肾小球系膜细胞(GMC)明显表达HBx,细胞TNF-αmRNA的表达加入U0126较不加入U0126显著下降.不加入U0126组上清液TNF-α水平在转染后36 h和48 h分别为(189.0±18.1)ng/L和(172.3±24.3)ng/L;加入U0126组上清液中TNF-α水平在转染后36、48 h分别为(65.6±11.6)ng/L和(84.0±24.6)ng/L,组间不同时间点比较均有显著性差异(Pa<0.05).加入U0126后MC增殖也显著下降.结论 HBx可促使MC增殖,细胞TNF-α mRNA及上清液TNF-α表达均增高,这一作用可能是通过HBx激活ERK1/2信号通路实现的.实用儿科临床杂志,2009,24(10):738-740     

实验性心包炎心钠素与内皮素变化及其临床意义

目的　研究实验性心包炎心钠素 (ANP)与内皮素 (ET)的变化 ,为临床诊治小儿心包炎提供实验依据。方法　家兔 2 4只 ,随机分为实验组 1 3只 ,在心包腔内注入 30 %尿素 (2ml/kg) ;对照组 1 1只 ,在心包腔内注入生理盐水 (2ml/kg)作为对照。注射前与注射后 1、4、7、1 0、1 5与 2 1d分别测定血浆ANP与ET。注射后2 1d测定心肌中ANP与ET ,同时切取心脏作病理与电镜检查。结果　注射后 1～ 1 0d血浆ANP和ET较注射前与对照组明显增高 (P <0 .0 5) ,注射后 1 5dANP下降 ,注射后 2 1d血浆与心肌中的ANP均较注射前与对照组明显下降 (P <0 .0 1 ) ,注射后 2 1d血浆与心肌ET则显著增高 (P <0 .0 1 )。届时心包病理与电镜检查示心包增厚 ,心肌萎缩与损害。结论　心包炎早期血浆ANP与ET均升高 ,说明心功能不全处于代偿期 ,应早期切开引流 ,心包炎后期血浆ANP下降而ET持续升高表示心包已增厚 ,心肌发生萎缩与损害 ,心功能处于失偿期 ,应及时行心包大部剥脱手术 ,解除心肌束缚 ,有望心功能得到恢复