新生牛小分子肝再生刺激物质的部分生物学特性

从新生牛肝中提取小分子组分，经高效液相色谱分析证明与从乳猪肝中提取的肝细胞生长素相似。说明不同种动物肝细胞中存在基本相同的物质。紫外分光扫描发现有两个主要吸收峰，分别位于２０４ｎｍ和２８８ｎｍ，主要为多肽及蛋白质成分。柱层析分离出６个峰，平均分子量＜５０００，排除该成分中有胰岛素、胰高糖素存在的可能性。在无血清培养条件下，该组分具有明显刺激原代大鼠肝细胞ＤＮＡ合成作用，为对照组的４．８８倍；其活性可被蛋白酶灭活，而不为核酸酶所影响。热处理对其活性有一定的影响。     

CD4~+ CD25~+调节性T细胞在HIV/AIDS患者中的作用及其与HIV病毒载量的相关性研究

目的研究HIV感染者/AIDS患者外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞(CD4~+CD25~+ regulatory T cell,Treg)频率、功能及其临床意义。方法选择31例HIV感染者/AIDS患者和30例健康对照者,采用流式细胞仪检测各组外周血Treg的表型和频率。采取MACS磁珠分选Treg,利用[~3H]胸腺嘧啶掺入法检测Treg在特异性HIV抗原刺激下对CD4~+CD25~+T细胞的增殖影响。结果HIV/AIDS患者组与正常对照组相比较,外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞在统计学上无显著性意义。与正常对照组比较,HIV感染者外周血Treg比例升高,差异有统计学意义(P<0.01);与正常对照组比较,AIDS患者外周血Treg比例降低,差异有统计学意义(P<0.0001)。HIV RNA病毒载量与患者外周血Treg细胞数量呈正相关性(P<0.01)。Treg具有抑制HIV特异性的CD4~+CD25~- T细胞的增殖作用。结论HIV感染者/AIDS患者的细胞免疫功能紊乱,Treg能抑制HIV感染者/AIDS患者的HIV特异性细胞免疫反应,促进HIV病毒复制,与形成持续HIV感染有关。     

成人H5N1亚型禽流感病毒性重症肺炎的CT表现与动态变化

目的 探讨成人高致病性H5N1亚型禽流感病毒性重症肺炎的CT表现及动态变化。方法 2006年6月所确诊的H5N1亚型禽流感病毒性重症肺炎成人男性患者于发病第7天、30天、40天、50天、65天及95天分别行螺旋CT及HRCT扫描。回顾性分析其CT资料并结合文献复习。结果 病情严重时,CT显示肺叶或肺段大片状实变影伴支气管充气征、小淡片影及胸腔积液。病情稳定后,表现为多肺叶斑片状实变影、磨玻璃影,病灶内仍见支气管充气征。同时部分肺叶体积缩小,小叶间隔增厚、胸膜下细弧线影,相邻胸膜增厚。临床治愈出院以及近期复查时,大部分病灶消失,肺间质病灶吸收缓慢,以中叶、下叶为著。两肺散在多处条索状影,肺纹理聚集,胸膜下小叶间隔增厚,间隔旁小气肿,支气管扩张、扭曲。结论 成人高致病性H5N1亚型禽流感病毒性重症肺炎的CT表现为早期肺叶实变影,逐渐发展肺实质与间质病变并存,恢复期则以肺间质病变为主。CT动态观察能较客观的反映本病的病理改变过程。     

献血人群感染TTV的检测及部分DNA序列分析

目的调查志愿无偿献血人群中输血传播病毒（TTV）的感染情况和分析TTV DNA部分基因序列。方法以TTV ORF1保守区设计两对引物,用巢式多聚酶链式反应（PCR）检测TTV DNA,并克隆和测序。结果在血液筛查合格的无偿献血人群中检出TTV DNA的阳性率为5．0％（5／100）。在单一转氩酶异常,HBV、HCV和HIV血清标记物正常的献血人群检出TTV DNA的阳性率为5．6％（4／71）。两者有非常显著性差异（P〈0．01）。与日本首例TTV-N22株相比,SZT1和SZT2株基因序列同源性为98．9％（3／272）和96．7％（9／272）,SZT3和SZT4株为67．3％（89／272）和86．0％（38／272）。结论在符合献血条件的人群中存在无症状TTV携带者。与之相比较,在ALT异常献血人群中TTV流行率相对较高,对其部分基因序列的比较显示了较大的变异性。     

乙型肝炎病毒基因型C亚型和核心启动子、前C/核心区基因变异的关系

目的 研究慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染者中HBV基因型C亚型（HBV／C）的核心启动子、前C／核心区基因变异情况，分析HBV／C亚型的病毒学特征。方法 用酶联免疫法（ELISA）筛选出79例HBV／C，再用聚合酶链反应．限制性酶长度多态性分析方法（PCR-RFLP）进行HBV／C亚型分析；同时针对HBV核心启动子、DreC／核心区基因进行半巢式PCR及PCR产物直接测序。结果 ①79例HBV／C中，33例（41．8％）为HBV／C1亚型，46例（58．2％）为HBV／C2亚型。②HBV／C1亚型仅见于来自中国南方的患者（P〈0．0001）。③A1898位点变异仅见于HBV／C1亚型（P=0．056），V1753位点变异在HBV／C1亚型中多见（P〈0．05）；HBV／C2以T1858（90％）、A1896（40％）位点变异多见（P〈0．008）。T1762／A1764位点变异在HBV／C两种亚型中均常见。④肝细胞癌（HCC）患者中，V1753和T1762／A1764变异最常见（P〈0．05）。结论 HBV／CI和HBV／C2在中国有明显的地区差异；V1753合并T1762／A1764双变异与发展为HCC相关，尤其在HBV／C1患者。     

肠道病毒71型重组VP1蛋白的表达和EV71型手足口病血清学诊断方法的建立

目的 获得纯化的具有免疫活性的肠道病毒71型VP1蛋白,建立EV71感染早期、快速和准确的ELISA血清学诊断方法.方法 通过PCR方法扩增出VP1基因,定向克隆到原核表达载体pET-21b(+),阳性质粒转化入E.coli B121(DE3)感受态细胞经IPTG诱导,SDS-PAGE电泳和蛋白免疫印迹分析目的 蛋白的表达水平.纯化的VPI蛋白用作包被抗原,建立手足口病(HFMD)患者抗-EV71-IgM和IgG的血清学诊断方法.结果 成功表达和纯化了VP1重组蛋白,所表达的蛋白能被EV71型手足口病患者血清所识别.调查发现,与正常人和EV71阴性手足口病患儿比较,EV71阳性手足口病血清中抗-EV71-IgM和IgG中A值显著升高.差异具有统计学意义(P<0.05).与RT-PCR结果比较,发现该方法IgM的诊断敏感性和特异性分别为73%和77%;该IgG诊断方法的敏感性和特异性分别为82%和83%.完成该试验仪需4 h.结论 利用pET原核表达系统成功克隆、表达和纯化了肠道病毒71型重组外壳蛋白VPI,且具有良好的抗原性.该抗原可用于研制EV71血清学诊断试剂盒.     

深圳地区不同人群TTV感染情况的调查

目的了解深圳地区不同人群ＴＴＶ的感染情况。方法在ＴＴＶＯＲＦ１保守区设计两对套式引物，建立了检测ＴＴＶＤＮＡ的巢式聚合酶链反应（Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ），用该法对深圳地区９０例一般人群、８８例职业献血员、７９例静脉毒瘾者及２９例非甲庚型肝炎病人进行ＴＴＶＤＮＡ的检测。结果ＴＴＶＤＮＡ在以上４种人群中的阳性率分别为７８％，９０％，４１７％与４４８％，前者与后两者比较差异均有显著性（Ｐ＜００５）。９０例一般人群与８８例职业献血员中，１４例ＴＴＶＤＮＡ阳性者丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）均正常。结论深圳地区一般人群与职业献血员中ＴＴＶ携带者较常见；静脉毒瘾者是ＴＴＶ感染的高危人群；部分非甲～庚型肝炎可能与ＴＴＶ相关     

深圳地区不同人群庚型肝炎病毒感染的分子流行病学调查

在庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）基因５’端非编码区（５’－ＵＴＲ）设计两对套式引物，建立检测ＨＧＶＲＮＡ的逆转录－巢式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎｅｓｔｅｄＰＣＲ）。对深圳地区１０６例职业献血员、１６８例肝炎病人及８０例静脉毒瘾者进行ＨＧＶＲＮＡ的检测，阳性率分别为８．５％、７．７％与４６．３％，前两者与后者相比较差异均有显著性意义（Ｐ＜０．０１）。６１例慢性乙型肝炎与３３例慢性丙型肝炎病人ＨＧＶＲＮＡ阳性率分别为８．２％与２１．２％。３３例慢性丙型肝炎病人中，１５例接触过血液或血制品的病人ＨＧＶＲＮＡ阳性率为４０．０％，明显高于１８例无血液或血制品接触史者（Ｐ＜０．０５）。本研究结果提示深圳地区职业献血员中ＨＧＶ携带者较常见；静脉毒瘾者是ＨＧＶ感染的高危人群；慢性丙型肝炎常重叠ＨＧＶ感染，主要与接触血液或血制品有关。故对献血员进行ＨＧＶ筛查将减少输血后ＨＧＶ感染的发生     

SARS冠状病毒核衣壳蛋白的克隆表达及其临床应用研究

目的　克隆、原核表达严重急性呼吸综合征冠状病毒 (SARS-CoV)核衣壳 (N)蛋白 ,分析、评价其抗原性和在SARS血清学诊断中的应用价值。方法　采用逆转录巢式聚合酶链反应 (RT-nested PCR)扩增SARS CoV的N蛋白基因 ,克隆入pBAD-Thio TOPO原核表达载体 ,表达、纯化重组融合N蛋白 ,WesternBlot分析其抗原性和特异性 ,建立以重组N蛋白为抗原的酶联免疫吸附测定(ELISA)法 ,并与以全病毒裂解液为抗原的ELISA法进行比较。结果　重组表达载体经诱导产生了高水平的重组融合N蛋白 ,融合蛋白经亲和纯化后 ,具备了较高的纯度和抗原反应性 ,以重组蛋白为抗原的ELISA法在特异性和敏感性方面优于以全病毒裂解液为抗原者。结论　重组SARS-CoV的N蛋白具有良好的抗原性和特异性 ,可作为新一代SARS-CoV抗体检测试剂盒的备选抗原     

HBV DNA及BCP、Pre-C突变株基因芯片检测方法的构建

目的　构建HBVDNA及BCP、Pre C突变株的基因芯片检测方法。方法　该基因芯片检测方法使用了PCR、寡核苷酸芯片二项技术 ,包含了对nt1896、nt 1899、nt186 2、nt176 4、nt176 2五个突变热点的检测 ,并用DNA测序法对该基因芯片进行验证。结果　该基因芯片检测HBVDNA方面结果与DNA测序法 10 0 %相符 ;检测突变株方面 14 6个位点两种方法结果相符 ,4个位点结果不相符 ,P >0 0 5。结论　该基因芯片具有便捷、高通量的特点 ,能同时检测多个BCP、Pre C突变位点。结果提示该基因芯片和DNA测序法检测结果阳性率相等 ,特异性与DNA测序法相当 ,检测混合株有更大优势 ,可用于临床检测。