人血红蛋白时间分辨荧光免疫分析试剂的研制及初步应用

目的建立人血红蛋白（Hb）时间分辨免疫荧光分析（TRFIA）试剂,探讨在大便潜血（FOB）检测中的应用。方法采用固相双抗体夹心法建立检测Hb的TRFIA方法,并对该试剂的各项性能指标进行评价。结果自制试剂盒的最低检测量为0．8ng／mL或32ng（Hb）／g（粪便）,线性范围为0．8—1000ng／mL或32—40000ng（Hb）／g（粪便）。分析内和分析间变异系数分别为3．4％-8．9％和5．2％-13．4％。与羊、鸡、牛、猪、兔、狗Hb不发生交叉反应。90份临床确诊标本用本试剂盒和胶体金免疫层析（GICA）试剂同时测试,TRFIA法的敏感性和特异性均为100％．GICA法的灵敏度和特异性分别为95．6％、100％。结论Hb—TRFIA试剂盒各项指标均达到临床检测要求,适用于临床上大便潜血Hb的检测。     

一种灵敏的干血斑葡萄糖-6-磷酸脱氢酶荧光分析法的建立

目的建立葡萄糖-6-磷酸盐脱氢酶（G6PD）荧光分析方法,用于新生儿足跟干血斑中G6PD酶活性的定量测定。方法选择干血斑配制基质,优化底物、复溶物和铜试剂组分,建立G6PD荧光分析法定量检测方法,并对该试剂的各项性能指标进行评价。结果自制试剂分析灵敏度为0.05U/gHb;分析内和分析间精密度分别为4.12%～8.93%、4.75%～9.86%;试剂的cutoff值为2.23U/gHb;1066份样本用该试剂与PerkinElmer（PE）公司同类试剂平行检测,两种试剂测值具有显著相关性（P=0.000）,相关系数为0.960;以PE公司试剂为对照,本试剂的阳性符合率为99.4%,阴性符合率为98.93%。结论该试剂灵敏度高、操作简便快捷,具有良好的精密度,临床检测性能良好,可以满足临床应用的需要。     

乙肝病毒前S1抗原时间分辨荧光免疫分析试剂盒的研制

目的利用时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术建立乙型肝炎病毒前S1抗原的检测试剂盒。方法应用双抗体夹心法建立乙肝preS1抗原TRFIA检测试剂盒,对试剂盒的各项性能指标进行评估。结果对280份血清样本进行检测并与国产酶联免疫法试剂盒对比,结果显示自制试剂盒的特异性更好;200份正常人血清样本检测结果表明,该试剂盒的cutoff值=阴性对照荧光值×4.5。用自制质控品检测分析内和分析间的精密度分别为3.4%～7.8%,6.9%～8.4%;检测HBsAg及HBeAg无交叉反应。结论试剂盒各项指标均达到临床检测要求,TRFIA法精密度和特异性有较大提高,可替代酶免法试剂盒。     

HCV 1b亚型ISDR变异影响PEG-IFN/RBV抗病毒疗效的新特点分析

目的探讨HCV干扰素敏感决定区（ISDR）氨基酸（aa）序列变异度对聚乙二醇干扰素（PEG-IFN）联合利巴韦林（RBV）治疗1b亚型慢性丙型肝炎（CHC）疗效的影响。方法 58例HCV1b亚型慢性感染者采用PEG-IFN/RBV联合方案治疗48周,并随访24周。定量检测血清HCV RNA,逆转录-聚合酶链反应扩增治疗前血标本中HCV ISDR片段并测序,MEGA4分析氨基酸序列变异度;二分类Logistic回归分析各变量与持续病毒学应答（SVR）之间的关系。结果治疗前血清HCV的ISDR氨基酸序列与HCVJ株比较,15例为野生型（未突变）,42例为中间型（1-3个突变）,1例为突变型（≥4个突变）。其中2218位点突变最多,约为60.3%（35/58）。ISDRaa突变数目与SVR关系密切（P=0.000）,ISDRaa突变数≥2的CHC组所获得的EVR和SVR明显高于aa突变数〈2的CHC组（P=0.041/P=0.012）。结论华南HCV1b亚型ISDR突变型（氨基酸变异≥4）极少。ISDRaa变异能够预测SVR;采用PEG-IFN/RBV联合方案治疗,对SVR有预测价值的ISDRaa突变数可由4个减少为2个。     

INHA基因的克隆表达以及多克隆抗体的制备

目的INHA的表达、纯化,以及多克隆抗体的制备。方法利用基因重组技术获得INHA基因以及去信号肽的INHA基因,将其都分别构建到原核表达系统并分离纯化得到相对分子质量为58000的带有组氨酸标签的重组INHA融合蛋白。用分离纯化后的INHA融合蛋白作为抗原免疫,获得抗INHA的多克隆抗体。结果成功地获得INHA基因,并且以包涵体的形式表达于大肠杆菌中,用间接酶联免疫吸附（ELISA）方法,Western blot检测结果显示．该抗体能特异性地与INHA的抗原以及胎盘组织产生明显免疫亲和反应。结论建立原核高效稳定INHA表达系统．获得具有生物学活性的蛋白,为进一步获得高特异性的抗体奠定基础。     

人催乳素时间分辨荧光免疫分析检测试剂的研制

目的建立人血清催乳素的时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)方法。方法采用双抗体夹心法建立人血清催乳素TRFIA检测试剂盒,对试剂盒的各项指标进行评价。结果试剂盒的定量范围为16～11000mU/L,灵敏度为1.36mU/L,批内批间的精密度分别为2.6%～7.6%,5.7%～9.0%;与人胎盘泌乳素(hPL)、人生长激素(hGH)、人黄体生成素(hLH)和人促卵泡激素(hFSH)无交叉反应。30份异常血样用本试剂盒与进口的同类试剂盒同时检测,其相关系数为0.997。结论试剂盒各项指标均达到临床检测要求,可替代国外同类产品试剂盒。     

免疫捕获乳酸脱氢酶活性测试在恶性疟诊断中的初步应用

近来发现 ,疟原虫乳酸脱氢酶 (L DH)与宿主红细胞 L DH在理化、免疫学特性和酶学方面差异较大。在催化乳酸生成丙酮酸的反应中 ,疟原虫 L DH能迅速利用烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 (NAD)类似物 3′-乙酰吡啶 NAD (APAD)作辅酶 ,而红细胞 L DH在存在时参与反应速率较慢[1 ,2 ] 。这一特性为利用疟原虫 L DH活性检测疟原虫提供了依据。另外 ,基于疟原虫L DH为检测靶抗原的免疫层析试剂盒 - Opti MAL法 ,其实验室和现场检测均作了评估 ,与传统镜检法相比 ,其诊断恶性疟的敏感性和特异性分别为 88%和 99% ,对间日疟分别为94 %和 10 0 % […     

PRM1基因SNP位点-190C-＞A多态性对精子畸形率的影响

目的:探讨鱼精蛋白基因1(protamine 1,PRM1)单核苷酸多态性(SNP)与畸形精子症的关系。方法:收集畸形精子症不育患者(病例组,n=157)和精子形态正常男性(对照组,n=37)精液样本,进行形态学分析并提取基因组DNA,应用Sequenom MassARRAY SNP分型技术对PRM1基因-190C->A SNP位点(rs2301365)进行基因分型,比较病例组与对照组基因型的分布差异及病例组不同基因型间精子形态参数的差异。结果:病例组中,基因型CC、CA、AA的分布频率及个体数分别为38.9%(61)、44.6%(70)、16.6%(26),对照组为45.9%(17)、51.4%(19)、2.7%(1),病例组AA基因型分布频率显著高于对照组(P<0.05)。病例组等位基因C、A的分布频率分别为57.6%、42.4%,对照组为71.6%、28.4%,病例组等位基因A的频率与对照组差异无显著性(P>0.05)。病例组基因型CC与CA、AA、CA+AA在精子形态学参数的比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:PRM1基因SNP位点-190C->A可能与中国汉族畸形精子症男性不育存在相关,该位点可能导致精子形态异常,但所致形态异常并无部位上的特异性。     

液体芯片技术定量测定人体血清CEA、AFP、NSE和tPSA

目的 应用液体芯片技术,联合定量测定人体血清癌胚抗原（CEA）、甲胎蛋白（AFP）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）和前列腺特异性抗原（tPSA）,并对其临床应用进行评价.方法 制备交联微球以及生物素标记抗体,利用双抗体夹心法对60个血清样本进行测定,并将其结果与化学发光免疫分析法（CLIA）作比较.结果 同时检测CEA、AFP、tPSA、NSE的线性范围分别为0.078～200 ng/mL、0.030～30.3 ng/mL、0.007～7.5 ng/mL、0.146～75 ng/mL;最低检测限为26.0 pg/mL、19.7 pg/mL、4.9 pg/mL、73.2 pg/mL;批内精密度CV〈9.0%,批间精密度CV〈13.2%;检测结果与CLIA测值的相关系数r分别为0.986、0.979、0.964、0.958（P〈0.001）.结论 液体芯片技术是一种具有极大优势的新型检测技术.该技术打破传统测定技术每次只能测定一个指标的限制,并且具有高通量、高灵敏度、检测时间短、样本用量少等特点.     

基因芯片技术对结核分枝杆菌耐药性检测的临床应用

目的 评价基因芯片技术对结核分枝杆菌耐药性检测的效果. 方法 选取我院结核科2014年3月至2016年3月收治的涂片阳性的肺结核住院患者238例,取其痰标本,分别用基因芯片、传统的罗氏培养和药敏试验3种方法进行结核分枝杆菌的异烟肼耐药性检测和利福平耐药性检测;把罗氏培养和药敏试验的结果作为金标准,评价基因芯片技术的临床应用价值. 结果 基因芯片技术检测涂片阳性患者痰标本异烟肼耐药的情况与金标准无显著差异(P＞0.05);利福平耐药的情况与金标准相比也无明显差异(p>0.05). 结论 基因芯片能够快速、准确地检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药情况,是一种值得推广的临床实验室检测方法.