抗凋亡蛋白Fortilin基因的克隆、表达与鉴定

目的在大肠杆菌中表达一种新近发现的抗凋亡蛋白Fortilin。方法用RT-PCR方法,从肺腺癌细胞中扩增出编码Fortilin蛋白的基因(GenBank中编码该蛋白的基因名为TPT1),克隆入pGEX-4T-1表达载体;重组质粒转入E.coliBL21(DE3),诱导表达Fortilin蛋白,并对表达产物进行免疫印迹鉴定。结果经双酶切及核酸序列分析鉴定,重组质粒pGEX-4T-1/TPT1成功构建,诱导后能高效表达可溶性Fortilin融合蛋白,SDS-PAGE及Western-blot验证该蛋白,表达的融合蛋白分子量为45000,与预期理论值相符。结论Fortilin蛋白在大肠杆菌中以融合蛋白形式进行表达,可提高其在宿主细胞中的稳定性和可溶性,且在大肠杆菌中获得高效表达,获得了充足的活性蛋白,这为进一步了解该蛋白的生物学功能,研究其抗凋亡机制奠定了基础。     

风疹病毒E1基因的克隆及原核表达

目的构建风疹病毒E1基因的原核表达质粒,诱导重组蛋白表达。方法通过反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）风疹病毒E1基因高活性片段,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳分离后连接于原核表达载体PET-28a（＋）,并于大肠杆菌中诱导目的重组蛋白表达。结果成功扩增出399bp的目的基因,有效表达出E1重组蛋白。结论在大肠杆菌中成功表达风疹病毒E1基因重组蛋白,为风疹病毒的血清学检测提供了一种新的抗原。     

时间分辨荧光免疫分析技术在寄生虫病诊断中的应用

时间分辨荧光免疫分析(Time-resolved fluomimmunoassay,TRFIA)是一种新型的体外超微量分析技术,被公认为是目前灵敏度最高的分析方法之一,并以其独特的优势近些年迅速发展,已延伸至生物医学、临床医学研究的各个领域.本文就该技术的研究进展及在某些寄生虫病检测诊断中的相关应用作一简要综述.     

一种新型慢病毒载体制备体系的改进

目的完善已初步建立的以痘病毒为辅助病毒的慢病毒载体(LV)瞬时制备体系。方法通过同源重组质粒pZIPPY-NEO/GUS,将vTF7-3痘病毒D13L基因的ORF通过同源重组被新霉素基因(neo)以及可视性筛选基因(GUS)替代,制备D13L缺陷性痘病毒(vTF7-3-ΔD13L)。结果经RT-PCR鉴定,D13L基因被完全敲除。制备体系中将vTF7-3-ΔD13L代替vTF7-3后,制备体系培养上清经RT-PCR、Western blotting分别检测到慢病毒载体特异性RNA序列以及特征性p24蛋白的存在,提示系统可以正常制备出慢病毒载体颗粒,并进一步评价了慢病毒载体的感染性。此外,对此系统的动力学特征也进行了初步分析。结论 vTF7-3-ΔD13L制备成功,通过此系统可制备出没有复制性痘病毒污染的慢病毒载体,本研究为该系统的大规模应用奠定了客观基础。     

降钙素原的临床诊断价值

降钙素原是有激素活性降钙素的前体物质。在正常人体中降钙素原的血清浓度极低未能检测出，而在严重全身细菌性感染其血清浓度可见明显增高，并且已证实降钙素原是脓毒血症时最早出现的炎症标记物之一。本文就降钙素原的结构，来源，生物学功能及临床应用作一综述。     

神经元特异性烯醇化酶光激化学发光免疫分析法的建立

研制检测人血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)的光激化学发光免疫分析(AlphaLISA)快速检测试剂盒。采用受体微球用一株NSE单克隆抗体包被,用生物素标记一株单克隆抗体,与链霉亲和素的供体微球共同组成检测试剂盒,优化反应体系并对试剂盒的各项性能指标进行评价。结果显示:自制NSE试剂盒灵敏度为0.149 ng/ml,线性范围为0.149~600ng/ml,分析内、分析间的精密度分别为3.7%~4.3%、3.9%~5.2%,与细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)、非神经元性烯醇化酶(NNE)均无交叉反应,154份临床血清样本用本试剂盒与罗氏化学发光试剂盒检测,其相关系数为0.979。发现自制NSE-AlphaLISA试剂盒的各项性能指标均能达到临床检测要求,可用于临床血清样本NSE浓度的测定。     

现代免疫分析方法最新进展

现代免疫分析技术是免疫分析技术在现代生物医学领域一个重要的研究课题.本文重点介绍现代免疫分析技术方法的最新进展情况,预测了其发展趋势为基于量子点技术的一种新型多元均相时间分辨荧光免疫分析方法,为今后实现快速便捷、高灵敏度、微量化及高通量化的现代免疫分析技术提供科学依据,具有十分广阔的发展前景.     

SARS-CoV GDH株N蛋白全长基因克隆及其可溶性表达

目的构建SARS冠状病毒N蛋白的原核表达质粒,诱导重组蛋白表达并纯化,鉴定其抗原性。方法以我国SARS冠状病毒GDH株总RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增N蛋白的全长基因,TA克隆后测序。构建pET-23d的N基因表达载体,用IPTG诱导目的蛋白表达,利用硫酸铵沉淀、分子筛层析及离子交换层析纯化重组蛋白,免疫印迹鉴定重组蛋白。结果RT-PCR扩增出1269bpSARS冠状病毒N蛋白的基因片段,其序列分析结果与SARS-CoVGD01、BJ01株的同源性为99.92%;该基因在大肠杆菌表达系统中高效表达,占可溶性蛋白的33.57%,表达产物为非融合的可溶性蛋白,Westernblot结果显示重组N蛋白具有良好的抗原性;纯化后重组N蛋白纯度为92.9%。结论成功构建了SARS冠状病毒N蛋白的重组表达质粒,并在大肠杆菌中以非融合蛋白的形式得到高效的可溶性表达,为SRAS的诊断和疫苗的研制奠定了基础。     

补阳还五汤加减治验二则

补阳还五汤出自《医林改错》。其组成:黄芪、当归、赤芍、川芎、地龙、红花、桃仁。功效:补气、活血、通络。适用于络脉空虚、风邪乘虚侵入,血脉瘀滞所致的病理变化。笔者应用此方加化痰药,结合针灸治愈二例由络脉空虚,风邪乘之,血脉不畅,痰瘀阻络引起口眼歪斜的“(口呙)僻”和右侧肢体麻木的“中风先兆”。现简介如下:例一:温×,女,25岁,农民,于1990—4—10来诊。患者午饭时,头部汗出,急理家务,不慎风邪入中。翌晨醒后,发现口     

类风湿关节炎并发冠心病实验室诊断及相关性

目的 探讨相应实验室指标在类风湿关节炎 (RA) 并发冠心病 (CHD) 中的诊断价值及相关性.方法 以性别和年龄匹配设置RA并发CHD组、单纯RA组, 单纯CHD组和健康对照组各102例, 回顾性分析RA特异性指标 (ESR、RF、ACCP、IL-6) 和CHD特异性指标 (CK、CK-MB、α-HBDH、hs-TnT、Mb) 在4组中水平变化, 统计分析2组特异性指标在RA并发CHD组中的相关性.结果 4组间RA患病组 (包括单纯和并发) 关节畸形率明显高于非RA疾患组 (P<0.001) , 单纯CHD组高血压患病率及吸烟率明显高于其余3组 (P=0.016, 0.021) , 4组间BMI、TC差异无统计学意义 (P>0.05) ;RA并发CHD患者中, RA特异性指标ESR、RF、ACCP和IL-6, 以及CHD特异性指标CK、CK-MB、hs-Tn T和Mb均出现明显的升高 (P<0.05) ;ACCP与CK、CK-MB明显正相关 (P<0.05) , IL-6与CK、CK-MB、Mb明显正相关 (P<0.05) .结论 对RA患者ACCP或IL-6的检测, 可预测RA并发CHD的发生.