全文获取类型
收费全文 | 166篇 |
免费 | 5篇 |
国内免费 | 3篇 |
专业分类
基础医学 | 32篇 |
临床医学 | 25篇 |
内科学 | 20篇 |
特种医学 | 1篇 |
外科学 | 2篇 |
综合类 | 79篇 |
预防医学 | 8篇 |
药学 | 1篇 |
中国医学 | 5篇 |
肿瘤学 | 1篇 |
出版年
2022年 | 1篇 |
2020年 | 1篇 |
2018年 | 1篇 |
2017年 | 8篇 |
2016年 | 4篇 |
2015年 | 3篇 |
2014年 | 5篇 |
2013年 | 4篇 |
2012年 | 8篇 |
2011年 | 17篇 |
2010年 | 17篇 |
2009年 | 22篇 |
2008年 | 7篇 |
2007年 | 10篇 |
2006年 | 15篇 |
2005年 | 13篇 |
2004年 | 7篇 |
2003年 | 8篇 |
2002年 | 9篇 |
2001年 | 6篇 |
2000年 | 4篇 |
1999年 | 1篇 |
1991年 | 1篇 |
1989年 | 1篇 |
1988年 | 1篇 |
排序方式: 共有174条查询结果,搜索用时 15 毫秒
171.
目的在痘苗系统中表达丙型肝炎病毒(HCV)各组分蛋白。方法将编码HCV大前体蛋白的开放阅读框(ORF)序列克隆至痘苗启动子后,构建重组质粒pVHCV。重组质粒转染BHK21细胞后,再用痘苗病毒vTF7-3株感染,培养48 h后收集细胞。Western blotting和免疫荧光技术鉴定HCV非结构蛋白NS3和NS5a的表达情况。结果Western blotting结果表明,在细胞中检测到相对分子质量为70 000 (NS3)和58 000 (Ns5a)的两条带;免疫荧光试验结果表明,无论采用抗NS3 单抗还是抗NS5a 单抗,大部分转染质粒细胞的细胞质中都具有较强的荧光反应。结论HCV非结构蛋白NS3和NS5a在BHK21细胞中得到表达。 相似文献
172.
目的在大肠杆菌中表达丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白基因片段。方法利用PCR技术,扩增出357 bp的HCV核心蛋白基因片段,双酶切后将其插入到原核表达载体pET-32a,构建重组表达质粒pET-32a/HCVc。转化到大肠杆菌BL21中,IPTG诱导表达。SDS-PAGE鉴定表达情况,Western blot鉴定表达产物的抗原性。结果经IPTG诱导后获得了目的蛋白的融合表达;SDS-PAGE电泳显示其在32 000处有一条融和表达条带;Western blot结果显示其具有HCV抗原特异性。结论HCV核心蛋白在大肠杆菌中获得高效表达,而且表达产物有良好的抗原性。 相似文献
173.
降钙素原的克隆、表达及多抗制备 总被引:3,自引:3,他引:0
目的合成降钙素原的全长基因,表达出降钙素原的融合蛋白并制备多抗,为降钙素原(PCT)的功能研究及单抗制备提供有力的实验基础。方法采用多引物人工一步合成基因技术合成降钙素原的全长基因.克隆至原核表达载体pGEX-4T-1表达出重组蛋白,将初步纯化的蛋白免疫小鼠制备多抗并进行Western blot鉴定。结果成功表达降钙素原重组蛋白并制备其多抗,Western blot证实所制备的PCT多抗可与所获得的融合蛋白和病人血清发生特异性反应。结论成功表达降钙素原重组蛋白并制备其多抗,为明确降钙素原来源和病理生理作用的研究奠定了基础,以及为制备其单克隆抗体提供实验材料。 相似文献
174.
以痘苗病毒为辅助病毒生产慢病毒载体的探究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的建立新型、高产量的慢病毒衍生载体的生产体系。方法构建主框架质粒pVECRNA、包装质粒pGAGPOL及包膜质粒pVSVG。通过脂质体将这三个质粒共转染至BHK21细胞,再用含有T7RNA聚合酶基因的重组痘苗病毒vTF-3感染细胞,培养4d后,收集培养上清,0.22μm滤膜过滤。结果将培养上清进行RT-PCR反应,结果能扩增出96bp长度的目的条带,将培养上清感染BHK21细胞,检测到BHK21细胞中GFP的表达,测定病毒载体滴度为(1.45±0.30)×107tu/ml。结论已初步生产出慢病毒载体,为下一步生产系统建立,系统产量优化奠定良好基础。 相似文献