解脲脲原体的耐药性分析及其耐氟喹诺酮的分子机制研究

目的检测128株临床分离解脲脲原体(UU)对9种药物的敏感性,并检测喹诺酮类耐药UU对5种喹诺酮药物的MIC以及gyrA和parC基因突变情况。方法应用支原体分离鉴定、计数药敏试剂盒检测UU对9种药物的敏感性,用微量肉汤稀释法检测耐药UU菌株对5种喹诺酮类药物的MIC,用PCR和DNA测序及序列比较检测基因突变。结果UU对多西环素最敏感,其次为米诺环素、交沙霉素、司帕沙星及克林霉素,对大环内酯类药物阿奇霉素和罗红霉素高度耐药。而司帕沙星、加替沙星和左氧氟沙星的MIC范围在0.25～8μg/mL,抑制UU活性强于氧氟沙星和环丙沙星。10株喹诺酮类耐药UU中有3株只有parC基因第80位TCA→TTA的突变,氨基酸由丝氨酸→亮氨酸,1株GyrA基因第95位密码子GAC→GAA的突变,氨基酸由天冬氨酸→谷氨酸。6株两者同时存在。结论在UU治疗中可首选多西环素,其次为米诺环素和交沙霉素。gyrA基因95位密码子和parC基因80位的突变密码子与UU耐喹诺酮类药物密切相关。     

44株HIV/MAV双重感染者MAV基因分型和药敏结果分析

目的 了解云南省西南地区人类免疫缺陷病毒(HIV)/鸟结核分枝杆菌(MAV)双重感染者MAV的基因型和耐药情况。方法 选取12个可变数目串联重复序列(VNTR)特异性位点,采用分枝杆菌串联重复序列(MATR-VNTR)基因分型法对MAV进行基因分型;采用聚合酶链反应(PCR)扩增菌株DNA后进行琼脂糖凝胶电泳,获得MAV的DNA指纹图谱,再应用Quantity One和BioNumerics 6.7软件对电泳图进行数字化处理并通过非加权组平均法(UPGMA)进行聚类分析。采用比例法测试44株MAV对10种不同抗菌药物的敏感性。结果 各位点VNTR基因分型的Hunter-Gaston指数(HGDI)存在差异,其中MATR-5最高,为0.68,MATR-1、2、3、4、6、7、9、13、15位点的HGDI值均≥0.5;通过聚类分析,44株MAV分为6个集群。药敏试验结果显示,利福布丁对MAV的体外抗菌活性最好(耐药率为0),其次是乙胺丁醇(耐药率86.4%,38/44),所有菌株对其余8种药物均耐药。结论 选取的12个位点VNTR基因分型法在云南省西南地区具有较高分辨率,来自云南省不同地区...     

屎肠球菌耐万古霉素的分子生物学机制及毒力因子

屎肠球菌与其他临床上重要的革兰阳性菌相比,具有更强的天然耐药性,而且也更易被诱导产生新的耐药性。近年来,屎肠球菌作为一种引起医院感染的重要病原菌已经引起了医学界的广泛关注。屎肠球菌感染率上升的主要原因可能与其毒力增强或获得新的毒力基因及获得耐药性有关,因此研究其耐药基因和毒力基因,发现屎肠球菌感染的耐药机制和发病机制,是控制屎肠球菌感染最有效的方法。     

幽门螺杆菌免疫学检测方法研究进展

幽门螺杆菌（helicobacter pylori,Hp）是1982年由澳大亚学者Warren和Marshall从胃炎和消化性溃疡病人胃黏膜活体组织中培养出来的一种革兰氏阴性螺旋形细长微弯杆菌。Hp感染不仅能引起慢性活动性胃炎、消化性溃疡、胃癌和胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤等多种胃肠道疾病,并且HP被证实为I类致胃癌致病因子[1,2]。     

医学微生物学精品课程建设的探索

在医学微生物学精品课程建设过程中,创建一支优秀的教学团队,全面进行教学改革,注重实验室建设和管理,以科研带动本科教育,收到了较好的效果。     

以学科建设为中心的优秀教学团队建设的实践

为提高教学质量、培养创新型医学人才,以病原生物学学科建设为中心,组建了病原生物学及免疫学教学团队,将学科优势转化为教学优势,为医药学人才培养作出了积极贡献.     

屎肠球菌透明质酸酶全长基因的克隆表达和免疫原性

目的构建屎肠球菌透明质酸酶（hyaluronidase，hyl）基因重组表达质粒，在大肠埃希菌中表达获得重组蛋白，探讨Hy1蛋白经口服免疫小鼠后，机体产生的免疫应答。方法PCR扩增hyl基因片段，克隆至pQE-30质粒上，构建重组质粒pQE-hyl，转化E，coli DH5α，经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导表达融合蛋白Hy1；Western印迹分析其免疫反应性。融合蛋白经镍离子柱纯化后，Hy1和屎肠球菌全菌蛋白TX0016分别给小鼠灌胃进行免疫，ELISA法检测小鼠血清IgG、IgA、小肠黏液sIgA和粪便sIgA。用TX0016进行腹腔攻击已免疫的小鼠，观察其免疫保护性。结果经测序hyl基因全长1662bp，为编码553个氨基酸残基的多肽。经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）分析相对分子质量约为60000。可溶性表达占全菌的38％以上，经亲和层析后可获得纯度为92％以上的重组蛋白。Western印迹证实了其免疫反应性。灌胃免疫小鼠后，ELISA法检测结果Hy1组血清IgA、IgG、粪sIgA、肠黏液sIgA分别为0．365±0．048、0，431±0，064、0．743±0，056和1．112±0．113，对照组则分别为0，051±0．013、0．098±0．019、0．102±0，032和0，187±0，051，差异有统计学意义（P〈0．01）。用半数致死量（I，D50）的细菌量攻击后，Hy1免疫组小鼠的存活率为70％，而对照组为50％。结论融合蛋白Hy1经口服免疫可有效诱导黏膜免疫应答，产生高水平的sIgA，发挥局部黏膜免疫作用。     

大理地区合并HIV双重感染者结核分枝杆菌MLVA法基因分型研究

目的 探讨MLVA基因分型法在云南大理地区合并HIV双重感染者结核分枝杆菌基因分型中的运用,初步研究其基因型特征。方法 选取大理地区61株合并HIV双重感染者结核分枝杆菌临床分离株,采用聚合酶链反应(PCR)分别对VNTR位点进行检测分析,应用BioNumerics(6.6)软件进行聚类分析。结果 共对61株合并HIV双重感染者的结核分枝杆菌的15个VNTR位点进行检测,呈现出明显的基因多态性。各个位点的分辨能力不同,其中MIRU26(0.839)最高,MIRU4(0.341)最低。经聚类分析,61株双重感染结核分枝杆菌菌株可分为5个基因群,61个基因型,以Ⅰ型占比例最大占51.6%(32/61);H37Rv减毒株在Ⅱ型。结论 大理地区合并HIV双重感染者结核分枝杆菌VNTR基因存在明显多态性,主要流行菌群为北京家族基因型。     

血管紧张素原基因核心启动子区A-6G多态性与白族原发性高血压的关联分析

目的:研究血管紧张素(angiotensinogen,AGT)基因核心启动子区A-6G多态性与白族人原发性高血压之间的关联.方法:以67例白族原发性高血压患者(高血压组)和54例健康体检者(对照组)为研究对象进行病例对照研究.用聚合酶链反应.限制性片段长度多态性方法分析AGT基因(-6)位点多态性;用自动荧光测序方法,对AGT基因核心启动子区DNA序列进行突变分析及验证基因分型.结果:(1)白族AGT基因核心启动子区域(-6)位点存在A→G突变.(2)AGT基因(-6)位点AA、AG、GG基因型频率及A、G等住基因频率在高血压组和对照组之间无统计学差异(P>0.05).(3)AGT基因(-6)住点各基因型收缩压和舒张压水平无统计学差异(P>0.05).结论:AGT基因A-6G多态性可能与白族人原发性高血压的发生无关.