与时俱进 开拓高等中医药教育的新局面（二）——北京中医药大学“九五”期间“211工程”及学科建设

北京中医药大学于1998年初启动“211工程”建设，在“九五”期间我校的学科建设、人才培养、科学研究、医疗保健和科学管理等的总体水平，在全国中医药院校中继续保持领先地位。“211工程”立项建设的重点学科在队伍建设、人才培养、科学研究、学术交流、条件建设等方面都比“八五”期间有了较大的发展，学术水平有了明显提高，超额完成了建设任务和既定目标。原6个重点学科共承担国家级科研项目73项，部局级科研项目96项：共获国家级科技成果奖11项、省部级科技成果奖52项。“九五”建设期间，根据我校各学科发展情况，准确调整学科建设方向和内容，重点学科建设取得突破性成就，使我校的国家重点学科达到6个，北京市重点学科3个，国家中医药管理局重点学科10个，成为全国中医院校中具有国家及市、局级重点学科数量最多、涵概学科最全面的院校。     

基于数据挖掘的当代医家治疗儿童咳嗽变异性哮喘风邪犯肺证用药规律探析

目的基于现代文献探析当代医家治疗儿童咳嗽变异性哮喘风邪犯肺证的用药特点和组方规律。方法以"咳嗽变异性哮喘""中医"为主题词,检索1997年1月—2017年4月中国期刊全文数据库、维普中文科技期刊全文数据库、万方数据库中当代医家治疗儿童咳嗽变异性哮喘风邪犯肺证的处方。通过Excel 2010建立药物数据库,然后应用SPSS 16.0、WEKA 3.9以及PAJEK 3.1等软件挖掘处方中的用药特点和组方规律。结果研究最终纳入文献55篇,涉及中药处方55首,中药112味,药物总频数575次,使用频率≥10%的药物30味。处方中的核心配伍药物包括麻黄、地龙、甘草、蝉蜕、苦杏仁、黄芩、桔梗、百部和僵蚕等。结论宣降肺气、止咳平喘是当代医家治疗儿童咳嗽变异性哮喘风邪犯肺证的核心用药治法。     

特异性增殖型腺病毒CNHK200-mIFN-γ表达mIFN-γ及体外肿瘤杀伤实验

目的:构建增殖型腺病毒CNHK200-mIFN-γ和增殖缺陷型腺病毒AdEasy-mIFN-γ,比较两者在肿瘤细胞中表达mIFN-γ蛋白的能力以及CNHK200-mIFN-γ,ONYX-015及野生型腺病毒Ad5在正常及肿瘤细胞中的增殖力,进一步观察其抗瘤效果.方法:以病毒增殖试验检测病毒在细胞中的增殖能力;透射电镜观察CNHK200-mIFN-γ在Hep3B细胞中的增殖复制;检测病毒感染肿瘤细胞后mIFN-γ的表达;CPE实验观察增殖病毒对细胞的杀伤效应.结果:CNHK200-mIFN-γ和ONYX-015仅在肿瘤细胞中增殖,且前者增殖力较强.CNHK200-mIFN-γ在肿瘤细胞中表达mIFN-γ,且表达量与病毒增殖密切相关,而AdEasymIFN-γ在肿瘤细胞中的mIFN-γ表达几乎不能测到.ONYX-015与CNHK200-mIFN-γ对正常的细胞无杀伤性,但能有效地杀伤癌细胞.结论:外源基因mIFN-γ的插人没有改变增殖病毒在肿瘤细胞中选择性增殖的特性.增殖型腺病毒CNHK200-mIFN-γ具有良好的肿瘤选择性及增殖性,且可以有效表达mIFN-γ,并且有效杀伤癌细胞,显示其良好的临床应用前景.     

原发性肝癌合并2型糖尿病患者临床病理特点的比较性研究

目的:对比分析原发性肝癌合并2型糖尿病患者的临床病理特点,为临床治疗提供一定治疗依据.方法:回顾性分析手术切除治疗且经病理确诊的原发性肝癌患者资料,比较合并2型糖尿病(T2DM组)与无合并2型糖尿病患者(无T2DM组)的临床病理特点,分析患者的性别、年龄、教育程度、吸烟、饮酒、BMI、Child-Pugh分级、实验室检查、病理TNM分期等的异同.结果:T2DM组的男性患者比例高于无T2DM组.T2DM组患者的年龄为(58.07 ±9.77)岁,高于无T2DM组(51.76±11.22)岁,P＜0.001.入院时的收缩压、舒张压、BMI、伴有慢性病高血压患者也高于无T2DM组(P＜0.05).两组间肝癌都以中分化肝细胞癌为主,但所占比例有统计学差异,T2DM组高分化所占比例高于无T2DM组.而在肝硬化、乙肝、AFP值中却是无T2DM组高于T2DM组.吸烟、饮酒、教育程度、肝功实验室检查、Child-Pugh分级、TNM分期等在两组间无明显统计学意义.结论:2型糖尿病可能加大肝癌的发生率,尤其是老年男性患者,建议肝癌患者应注意筛查2型糖尿病或糖尿病前期,关注肝癌合并2型糖尿病患者的治疗.     

siRNA干扰KLF8表达对鼻咽癌细胞上皮间质转化的作用

目的 探讨下调KLF8的表达对鼻咽癌CNE1-LMP1细胞侵袭能力的影响及其机制。方法 通过脂质体转染法将KLF8 siRNA真核表达质粒稳定转染至鼻咽癌细胞株CNE1-LMP1。Western blot和RT-PCR法检测CNE1-LMP1细胞中KLF8、E-cadherin、N-cadherin蛋白和mRNA表达水平的变化。Transwell侵袭实验观察siRNA后对CNE1-LMP1细胞侵袭能力的影响。结果 KLF8 siRNA转染的CNE1-LMP1细胞株与其阴性对照NC-si组比较KLF8蛋白和mRNA表达水平均下调,证实稳转细胞株建立成功。KLF8 siRNA可上调CNE1-LMP1细胞中E-cadherin的表达,而下调N-cadherin的表达。Transwell侵袭实验显示siRNA干扰CNE1-LMP1细胞侵袭能力下降。结论 KLF8在鼻咽癌CNE1-LMP1细胞中高表达;通过siRNA下调KLF8的表达能干扰上皮间质转化（EMT）相关蛋白E-cadherin、N-cadherin的表达,阻断EMT过程,抑制CNE1-LMP1细胞侵袭转移。     

MicroRNA-375表达对大肠癌细胞生物学特性的影响

目的:研究构建miRNA-375慢病毒表达载体并转染结直肠癌细胞,探讨其对结直肠癌细胞生物学特性的影响.方法:采用qRT-PCR法检测结直肠癌细胞株中miRNA-375表达水平.构建FUA-ZMCS-EF1-EGFP-miR-375/inhibitor慢病毒表达载体,建立稳定过表达miRNA-375及其抑制剂的HCT-116亚细胞系,体外观察细胞生长速度并绘制生长曲线,流式细胞仪检测细胞凋亡率,划痕实验检测miRNA-375对HCT-116细胞迁移能力的影响,Western blot法检测miRNA-375对细胞内ERK磷酸化水平的影响.结果:结直肠癌细胞株中miRNA-375低表达不但能促进细胞生长、抑制细胞凋亡,而且能促进细胞内ERK磷酸化水平、增加细胞迁移力和侵袭力.结论:结直肠癌miRNA-375发挥抑癌基因的作用,为miRNA-375在结直肠癌基因诊断及治疗中的应用提供了实验依据.     

抑癌基因TIP30启动子甲基化对大肠癌诊断及预后的影响

目的研究TIP30启动子甲基化在大肠癌与配对正常大肠黏膜中的表达差异,分析TIP30启动子甲基化状态与患者临床病理特征间的关系。方法对我院2009-2010年收治的50例大肠癌患者的手术切除标本和配对正常大肠黏膜组织,采用甲基化特异性PCR方法检测TIP30基因启动子甲基化状态。结果大肠癌TIP30启动子高甲基化与患者淋巴结转移情况（P=0.003）、CEA水平（P=0.005）及临床分期（P=0.048）之间存在显著相关性,与病变部位（结肠与直肠）之间未见显著相关性（P=0.309）。此外,TIP30启动子高甲基化在血清CEA水平较高（＞15 ng/ml）的患者中比血清CEA水平较低（＜15 ng/ml）的患者中更常见（P=0.005）。结论TIP30启动子高甲基化与大肠癌淋巴结转移、CEA水平及临床分期呈正相关,与病变部位无明显相关性。TIP30启动子甲基化有望成为一种新的大肠癌分子诊断肿瘤标志物,用于大肠癌患者的早期诊断与预后判断。     

基因表达谱芯片筛选鼻咽癌相关基因

背景与目的：基因表达谱芯片是一种高通量,快速的检测基因表达量的手段.本研究利用这种新兴技术来研究鼻咽癌组织与鼻咽慢性炎症组织基因表达差异,以寻找鼻咽癌新的肿瘤相关候选基因和分子标志.方法：采用BioStarH-141s（2004）型含14112点的人类全长基因cDNA表达谱芯片对20例鼻咽癌组织及15例鼻咽慢性炎症组织进行检测,并用生物统计学及生物信息学方法分析它们之间的基因表达差异.结果：和鼻咽慢性炎症组织相比,20例放疗前鼻咽癌组织存在着大量的差异表达基因,涉及基因包括癌基因与原癌基因、免疫相关基因、细胞分裂、分化、增殖和凋亡相关基因、信号与蛋白传递相关基因、DNA结合转录和转录因子,一些生物酶的酶活调节等.结论：用基因表达谱芯片可以筛选出许多不同种类的参与鼻咽癌病变过程的重要基因,这为揭示鼻咽癌复杂的病变机理提供了研究的方向.     

NDV7793体外激活的小鼠单核巨噬细胞(MΦ)对小鼠肝癌细胞的杀伤作用及其机制

 目的
初步研究NDV7793激活的小鼠单核巨噬细胞（MΦ）对小鼠肝癌Novikoff细胞的杀伤作用,并探讨其杀伤机制与TNF-
α和TRAIL的关系。 方法从腹腔分离6周龄BALB/C小鼠MΦ, 用NDV7793于体外刺激小鼠MΦ,以ELISA分别测定
NDV7793刺激小鼠MΦ后产生的TNF-α及TRAIL水平;NDV7793体外刺激MΦ后,与小鼠肝癌Novikoff细胞混合培养,
以LDH微量释放法测定小鼠MΦ对小鼠肝癌Novikoff细胞的杀伤效应。同时设立3组实验对照组：IFN-β阳性对照组
、紫外线灭活NDV（UV-NDV）对照组以及空白对照组。 结果与3个对照组相比,NDV7793在体外能提高MΦ分泌TNF-
α、TRAIL的水平;NDV体外刺激后的小鼠MΦ能杀伤小鼠肝癌Novikoff细胞。结论NDV7793在体外能激活小鼠MΦ,
小鼠MΦ被NDV7793刺激后,对小鼠肝癌Novikoff细胞的杀伤作用增强,NDV激活后的小鼠MΦ对小鼠肝癌Novikoff细
胞的杀伤机制可能与TNF-α和TRAIL有关。     

腺病毒介导的小鼠内皮抑素治疗胃癌的研究

目的:探讨人血管生成素-1(angiopoietin-1,Ang-1)对人脐静脉内皮细胞(human umbilican vein endothelia cell,HUVEC)增殖和凋亡的影响,以进一步研究其生物学作用及其在肿瘤发生中的作用机制.方法:构建pcDNA3.1-V5-HisC-Ang-1真核表达载体,并瞬时转染293细胞;取新生儿脐带经胶原酶消化等方法分离培养HUVEC;分别通过MTT比色和细胞计数法,分析Ang-1瞬时转染上清对HUVEC增殖的影响;通过流式细胞仪分析在血浆饥饿实验条件下,Ang-1对HUVEC凋亡的影响.结果:成功克隆了Ang-1基因,构建了其正义真核表达载体,并在293细胞中瞬时表达;成功进行了HUVEC的原代分离及传代培养;MTT法检测HUVEC增殖结果:只加培养液组、加空载体转染上清组、加Ang-1转染上清组HUVEC OD490值分别为0.36±0.11,0.40±0.03,0.68±0.10(P＜0.05);细胞计数法检测结果依次为:(10.13±2.06)×104,(8.7±1.73)×104,(15.03±1.98)×104(P＜0.05).流式细胞仪检测HUVEC凋亡率依次为:21%,19%和6%.结论:Ang-1能显著促进血管内皮细胞体外增殖,抑制血浆饥饿时HUVEC的凋亡.