森林脑炎病毒prM-E蛋白在昆虫细胞中的表达及免疫活性测定

目的为了表达森林脑炎病毒prME蛋白,为森林脑炎快速诊断试剂的研制奠定基础。方法经过RTPCR扩增、重组转移载体构建、细菌内转座和昆虫细胞转染,以杆状病毒昆虫细胞表达系统成功地表达了森林脑炎病毒MDJ01株prME蛋白。结果从感染细胞上清中电镜观察到重组蛋白形成的球型颗粒,说明重组病毒感染细胞后产生病毒样表达颗粒(viruslikeparticlesVLPs),并且分泌至细胞外。免疫印迹试验和间接免疫荧光试验表明,表达的重组蛋白能够与抗森林脑炎病毒抗体特异结合,具有良好的抗原性。ELISA和间接免疫荧光染色证实,重组prME蛋白可以作为抗原用于检测患者血清特异性抗体。结论在昆虫细胞中表达的prME具有良好的抗原性,本研究为森林脑炎快速特异诊断试剂研制奠定了基础。     

胸导管的形态结构

在50具儿童尸体上,借助注射法观察了胸导管的构成、形态、注入静脉的位置及瓣膜的存缺等问题。1.左、右腰干及肠干的数目极大多数都是一条。肠干的注入地点有很大变化,注入胸导管始端的只有34.0%。左右腰干的汇合是恒定的,故胸导管的始点以在左、右腰干汇合处为宜。始点多位于第1腰椎处,位于第12胸椎以上的有30.0%,在此情况下,胸导管便不具有腹部。 2.乳糜池的出现率为56.0%。其形态可为纺锤形、锥体形、念珠形、梨形或菱形。3.局部性双胸导管共发现8例。出现岛者胸部有12例,颈部有6例。左胸导管出现1例。注入右侧颈部静脉的异常胸导管及与右淋巴导管间的吻合支均未发现。4.胸导管由右向左偏斜的位置多在第4及第5胸椎处。5.胸导管末端呈单干型者占多数(66.0%)。末端呈弓形者占82.0%,弓的顶点越过锁骨约1厘米,多数都在第6及第7颈椎处。胸导管的注入地点以左静脉角处较多见(48.0%)。6.左颈干注入胸导管的占60.0%,左锁骨下干注入胸导管的占52.9%,左支气管纵隔干注入胸导管的占78.6%。7.胸导管具有瓣膜的共44例(88.0%)。瓣膜的数目以1个的较常见(22.7%),最多的可达19个。开口处具有瓣膜的占多数(70.4%),其次,以第6至第2胸椎处的瓣膜较集中。成对的瓣膜占59.0%,单瓣的只占41.0%。     

46,XX,t(10;21)(ql1;q21)伴三次流产

患者,女,32岁,汉族.结婚5年,因反复流产3次就诊.患者第1胎孕3个月自然流产,第2胎孕50余天自然流产,第3胎孕50余天又不明原因流产.患者非近亲婚配,夫妻双方表型及智力均正常,双方家族中无异常孕产史,孕期无有害物质接触史,妇科检查正常.     

重组人乳头瘤病毒6型病毒样颗粒的免疫原性分析

目的　研究重组人乳头瘤病毒 6型 (humanpapillomavirustype 6 ,HPV 6 )病毒样颗粒(virus likeparticle ,VLP)的免疫原性。方法　重组杆状病毒在昆虫细胞中表达制备的HPV 6L1VLP(L1 VLP)和HPV 6L1+L2VLP(L1+2 VLP)经鉴定后 ,用于免疫BALB/c小鼠 ,对诱导的体液免疫和细胞免疫反应进行了检测。结果　电镜观察显示L1 VLP和L1+2 VLP二者形态上无明显差异 ,为圆形颗粒 ,直径约 5 0nm ,SDS PAGE和Westernblot分析表明 ,L1+2 VLP中L1和L2蛋白摩尔比例为 4∶1。用ELISA法测定免疫小鼠血清抗体滴度 ,加佐剂L1 VLP免疫组和加佐剂L1+2 VLP免疫组血清针对HPV 6L1VLP的滴度在 1∶10 0 0 0以上 ,高于未加佐剂组免疫血清滴度 (1∶2 0 0 0 ) ,L1+2 VLP免疫诱导出了特异于L2抗原的抗体。血清抗体主要识别HPV 6构象依赖性抗原表位 ,与HPV 11抗原显示出一定的交叉反应 ,而与HPV 16无明显交叉反应。免疫小鼠脾淋巴细胞体外经HPV 6L1VLP再激活后出现了特异性增殖反应 ,3H TdR掺入值与未免疫组之间差异有显著性 (P <0 .0 1) ,L1 VLP和L1+2 VLP两组间差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,L1 VLP和L1+2 VLP免疫组刺激指数 (SI)分别为 6 .4和 6 .2 ,阴性对照组SI为 1.1。HPV 6L1VLP再刺激特异地诱导免疫组脾淋巴细胞IL 2和IL 10分     

恶性疟原虫FCC1/HN株环子孢子蛋白的原核表达、纯化及其对肝细胞靶向作用的观察

目的从恶性疟原虫FCC1／HN株基因组中扩增得到环子孢子蛋白(circumsporozoite protein,CSP)的全长编码基因,克隆至原核表达载体pET-32c中进行表达纯化,观察重组环子孢子蛋白对肝细胞的结合能力,探讨其作为原发性肝癌基因治疗的靶向分子的可行性。方法根据恶性疟原虫3D7株环子孢子蛋白的编码序列设计一对引物,利用聚合酶链反应(PCR)技术从恶性疟原虫FCC1／HN株基因组中扩增出CSP的全长编码基因,将其克隆到载体pGEM-T中,通过基因测序加以证实;进一步亚克隆至原核表达载体pET-32c中,在大肠杆菌BL21中用IPTG诱导表达,表达产物用Ni2+螯合柱亲和纯化,采用免疫印迹技术(WB)对纯化的融合蛋白进行免疫反应性检测;采用免疫组化(IHC)技术观察重组环子孢子蛋白对不同组织细胞的结合能力。结果从恶性疟原虫FCC1／HN株基因组中成功扩增到1263 bp的全长CSP基因,该基因在原核系统中经诱导表达出一相对分子质量(Mr)约62×103大小的融合蛋白,表达产物以包涵体的形式存在;通过Ni2+亲和柱纯化获得重组CSP融合蛋白;WB表明,重组CSP融合蛋白能被疟原虫阳性血清特异性识别;免疫组化结果显示重组CSP融合蛋白能够与肝癌和正常肝细胞特异性地结合,与其他组织来源的细胞则未见反应。结论CSP是疟原虫子孢子表面主要的蛋白,重组环子孢子蛋白作为原发性肝癌基因治疗的靶向分子具有一定的潜在应用价值。     

双关节骨外固定器在老年桡骨远端复杂性骨折治疗中的应用

目的：探讨双关节骨外固定器治疗桡骨远端复杂性骨折的效果。方法：对16例老年人桡骨远端复杂性骨折采用手法闭合复位、双关节骨外固定器固定进行治疗。结果：随访8～38个月，骨折均获得良好的复位与固定，疗效较满意。结论：手法复位，双关节外固定器治疗桡骨远端复杂性骨折，可有效矫正畸形，重建桡腕关节的稳定，是一种微创、安全、疗效确切的治疗方法。     

急性脑损伤病人血浆和脑脊液中内皮素含量的分析

内皮素(ET)是一种具有强烈收缩血管的物质,可加重脑损害。我科于1995年5月～1996年5月起对78例急性颅脑损伤病人,应用放射免疫法对血浆和脑脊液(CSF)中ET含量进行测定,现将结果报告如下。 临床资料 本组78例中(男55例,女23例),年龄14～65岁,平均32.5岁。在伤后24小时内入院,无合并伤及并发症,伤前无重要脏器疾患。入院时意识按GCS评分而分为轻度13～15分者18例,中度9～12分者28例,重度3～8分者32例。经CT检查诊断为硬脑膜外血肿11例,硬脑膜下血肿23例,局灶性脑挫伤12例,广泛脑挫伤合并血肿32例。行手术治疗42例,非手术治疗36例。另取20例非神经系统疾患病人,腰麻时取CSF与血浆各2ml为对照组。 入院后或手术后24小时内抽取全血和CSF各2ml,连同对照组,置入备有依地酸和抑肽酶试管内,按曾氏管测定ET含量,并在本组中的53例入院或术后,采用光纤探头硬脑膜外颅内压(ICP)监护。ET含量以±S表示,所有的计算过程皆来自微机MINIJAB软件,所用统计方法为推广的中位数检验过程。 本组病例均在入院一月后,参考GCS评分,分为预后良好痊愈、好转、中残60例,预后不良组(重残、植物状态,死亡)18例,将两组的ET值进行分析,以求出提示预后不良的ET值。 结果 一、伤情程度与ET含量:对照组血浆ET含量36.35±0.87ng/L,C     

共刺激分子B7.1在淋巴瘤组织中的表达

目的研究免疫共刺激分子Ｂ７．１在淋巴瘤组织中的表达及其在肿瘤免疫逃逸机制中的作用。方法利用ＲＴ－ＰＣＲ及原位杂交技术对１２例新鲜及２３例石蜡包埋淋巴瘤组织中Ｂ７．１的表达进行了检测。结果１０／１２例新鲜瘤组织及１６／２３例石蜡包埋瘤组织Ｂ７．１表达阳性，同时还意外发现，所有阳性标本中还强表达一种与正常Ｂ７．１分子不同但与其相关的ｍＲＮＡ转录子。结论该转录子与淋巴瘤的关系及在肿瘤免疫中的作用值得深入研究     

免疫组织化学显微图像分析技术进展

免疫组织化学是用特异性抗体显示组织化学成分的重要方法，是实验结果以显微图像的形式显示出来。对免疫组化图像的分析方法主要包括人工分析和计算机图像处理分析。前简便易行，对实验的标准化要求不高，但无法做精确的量化分析；后在精确性、客观性、分析速度等方面具有巨大优势，但目前仍不完善。本对两种分析技术的应用现状、实验要求及特点进行了综述，并指出了计算机图像处理技术已经成为免疫组化显微图像分析技术发展的趋势。     

BRAF V600E基因突变在发育不良痣综合征的黑色素瘤中的表达及意义

目的探讨源于发育不良痣综合征的黑色素瘤中BRAF基因的突变及其与预后的关系。方法收集2006年1月1日～2016年12月31日甘肃省人民医院发育不良痣综合征患者,术后病理检查均为黑色素瘤者5例,组织标本行BRAF V600E基因突变检测。结果源于发育不良痣的黑色素瘤免疫组化标记HMB-45、Melan-A蛋白高表达,肿瘤组织均无BRAF V600E基因突变,随访患者健康状况良好。结论源于发育不良痣综合征的黑色素瘤极少有BRAF V600E基因突变,比其他来源的黑色素瘤侵袭性低,预后相对较好。