人纤溶酶原激活物抑制物1转基因小鼠的建立

目的 建立人纤溶酶原激活物抑制物1（PAI-1）转基因小鼠。方法 利用构建的高效真核表达载体pCAGGS-PAI-1,制备注射用DNA。以显微注射法将目的DNA注入小鼠受精卵,再将受精卵移植到受体母鼠,制备转基因小鼠。经鼠尾组织DNA提取、PCR筛选、Southern杂交、DNA序列测定对转基因小鼠进行鉴定。结果 对获得的29只小鼠经PCR筛选、Southern杂交分析、DNA序列测定,得到了2只整合了人PAI-1 cDNA的转基因小鼠。在刚出生的转基因小鼠尾部及后肢发现出血性改变,免疫组织化学观察到肾脏局部PAI-1表达稍有增高。结论 本研究中,我们建立了人PAI-1基因传基因小鼠,为进一步研究PAI-1在肾脏疾病中调控细胞外基质降解的机制提供了动物模型,为研究利用抗凝、促纤溶疗法慢性肾炎奠定了基础。     

肾小球系膜细胞表达基质金属蛋白酶组织抑制物-1、-2及凝血酶调控的研究

目的探讨人肾小球系膜细胞基质金属蛋白酶组织抑制物(TIMP-1、-2)的表达及凝血酶对它们的调节作用,进一步阐明凝血酶促进肾小球损伤及硬化过程中的分子生物学机制.方法利用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)、Northern杂交和Western印迹等分子生物学方法,观察了凝血酶对体外培养的人肾小球系膜细胞表达TIMP-1、-2的诱导作用.结果在无血清RPMI 1640培养12 h后,RT-PCR、Northem和Western分析显示,系膜细胞可表达基础水平的TIMP-1、-2 mRNA及其蛋白质;凝血酶(0.5、1.5、4.5 HIU/ml)可浓度依赖性地上调系膜细胞TIMP-1、-2 mRNA的表达水平,Western印迹分析证明凝血酶还可以上调系膜细胞表达TIMP-1、-2蛋白水平;凝血酶的上述作用可被其特异性抑制物一水蛭素部分性阻断.结论正常人肾小球系膜细胞在基础状态下可以表达TIMP-1、-2,我们首次证实凝血酶在基因转录和蛋白质翻译水平促进系膜细胞表达TIMP-2,从而参与病理状态下肾小球内细胞外基质的异常代谢过程.     

凝血酶上调人肾小球系膜细胞PAI-1表达的细胞内信号转导研究

为探讨转录因子活化子蛋白１和相关的信号转导分子在凝血酶诱导人肾小球系膜细胞纤溶酶原激活物抑制物１表达中的作用,采用纤维蛋白平板法。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交,凝胶电泳阻滞实验和Ｗｅｓｔｅｒｎ杂交方法,分别检测凝酶刺激培养的人肾小球系膜细胞ＰＡＩ－１蛋白质活性和ｍＲＮＡ表达情况,以及ＡＰ－１ ＤＮＡ连接活性和ＡＰ－１组成蛋白质ｃ－Ｊｕｎ,ｃ－Ｆｏｓ量的变化。     

整合素αvβ3-RGDS位点相互作用介导纤维蛋白所致的肾小球内皮细胞表型变化

观察了体外培养的人类肾小球内皮细胞(GEC)在纤维蛋白凝胶上的生长状态,以及在GEC表面覆盖纤维蛋白凝胶对GEC表型的影响,并进行了干预试验.结果发现,GEC在纤维蛋白凝胶包被的细胞培养板上培养可以自发地形成典型的血管样结构.αvβ3整合素单抗23C6可以显著促进纤维蛋白介导的血管样结构的形成,而精氨酰-甘氨酰-天门冬氨酰-丝氨酸(RGDS)四肽、放线菌酮、放线菌素D对血管样结构的形成具有抑制作用(P<0.001).在融合态GEC细胞单层表面原位形成des-AA-纤维蛋白或des-AABB-纤维蛋白凝胶均可引起GEC单层结构破坏,肝素、放线菌酮、放线菌素D、非免疫小鼠IgG以及精氨酰-甘氨酰-甘氨酰-丝氨酸(RGGS)四肽不能阻断纤维蛋白诱导的GEC单层结构破坏,而23C6、RGDS四肽可以完全阻断上述改变.说明αvβ3整合素-RGDS位点相互作用介导了纤维蛋白所致GEC单层结构破坏和血管样结构形成,RGDS四肽防治纤维蛋白所诱发的GEC表型变化可能具有潜在的价值.     

深低温停循环前肺缺血预处理对肺组织的保护作用

目的 探讨肺缺血预处理在深低温停循环（DHCA）中对肺组织的保护作用.方法 18只幼猪随机根据DHCA前预处理方式分为缺血预处理组（n=6）、联合预处理组（缺血缺氧预处理,n=6）和对照组（不予预处理,n=6）.检测三组体外循环前和体外循环结束即刻（体外循环后）肺静态顺应性、肺血管阻力指数、肺湿干质量比以及左心房与肺动脉肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素（IL）8、10（IL-8、IL-10）浓度比值（TNF-α、IL-8、IL-10相对含量）;取左下肺叶组织,HE染色光学显微镜观察肺组织水肿和炎症细胞浸润情况.结果 体外循环前三组间各项指标比较差异无统计学意义;体外循环后,联合预处理组肺静态顺应性高于其他两组（P＜0.05）;缺血预处理组、联合预处理组肺血管阻力指数和IL-8、IL-10相对含量以及联合预处理组的肺湿干质量比均显著小于对照组（P＜0.05）.与体外循环前比较,体外循环后三组肺静态顺应性降低,肺湿干质量比显著增大,TNF-α、IL-8、IL-10相对含量增加（均P＜0.05）;对照组和缺血预处理组肺血管阻力指数增加（P＜0.05）,而联合预处理组体外循环前后肺血管阻力指数比较差异无统计学意义（P＞0.05）.组织学观察显示,与对照组和缺血预处理组相比,联合预处理组肺组织水肿和白细胞浸润程度较轻.结论 肺缺血预处理可减轻DHCA缺血再灌注对肺组织的损伤.与单纯肺缺血预处理相比,肺缺血联合缺氧预处理对肺组织保护作用更佳.     

竞争法酶联免疫吸附分析测定人类血浆载脂蛋白M监测方法的建立及应用

目的：建立人类血浆载脂蛋白M（ApoM）竞争法酶联免疫吸附分析检测方法。方法：建立人类血浆ApoM蛋白竞争法酶联免疫吸附分析（ELISA）检测方法,与人类重组ApoM蛋白标准含量进行对照,并利用该方法对932份健康人群血浆ApoM蛋白进行检测。结果：竞争法ELISA能准确测定人类血浆ApoM的浓度,健康人群血浆ApoM的中位数值为20.58mg/L。结论：竞争法ELISA操作方便、准确,可用于人类血浆ApoM蛋白的检测,为人类血浆ApoM的基础和临床研究提供了科学基础。健康人群血浆ApoM蛋白浓度为20.58mg/L。     

先天性冠状动脉瘘手术治愈2例

先天性冠状动脉瘘 (ＣＡＦ)是一种少见的心血管畸形 ,发病率在0 .3%以下[1 ] 。近年我科手术治愈 2例。1　临床资料例 1:女性 ,2 3岁 ,幼时体检发现心脏杂音 ,2年前曾在外院诊断为“细菌性心内膜炎” ,经抗生素治疗痊愈。近半年来胸闷 ,心悸。入院后体检发现胸骨左缘第四肋间连续性杂音 ,心电图示左室肥大伴ＳＴ -Ｔ改变 ,Ｘ线心脏检查示 :右心扩大 ,两肺充血 ,超声心动图示 :冠状静脉窦扩大 ,疑为肺静脉异位引流 ,未见房缺。升主动脉及选择性冠脉造影示 :左冠窦发出左副冠脉 ,呈瘤样扩张且与右房相通 ,诊为左副冠状动脉———右房瘘。于 19…     

非体外循环冠状动脉旁路移植术治疗重症冠状动脉粥样硬化性心脏病

目的探讨非体外循环冠状动脉旁路移植术治疗重症冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)的可行性. 方法回顾分析2002年1月～12月37例重症冠心病的临床资料.均采用全麻,胸骨正中切口,游离左乳内动脉及大隐静脉.心脏稳定器局部固定心肌,显露目标冠状动脉,切开后置入冠状动脉内血液分流器.一般先做左乳内动脉与左冠状动脉前降支的吻合,其余血管桥先做桥血管与主动脉的近心端吻合,然后再做桥血管与冠状动脉的吻合. 结果全组病例均在非体外循环下完成手术,搭桥1～6支,(3.2±0.5)支.术后10 d死亡1例,其余36例未发生围术期心肌梗死,无呼吸功能不全、肾功能不全、脑血管意外等严重并发症. 结论在成熟的手术技术和严格的围手术期管理的条件下,非体外循环冠状动脉旁路移植术治疗重症冠心病可行.     

糖基化终末产物对肾小球系膜细胞表达纤溶酶原激活物抑制物1的影响

探讨非酶促糖基化终末产物是否影响肾小球系膜细胞降解肾小球细胞外基质的丝氨酸蛋白酶－纤溶酶原激活物抑制物１（ＰＡＩ－１）基因表达和生物学活性。方法用体外制备的非酶促糖基化牛血清白蛋白（ＡＧＥ－ＢＳＡ）作用人肾小球系膜细胞２４小时和４８小时，观察对细胞增殖、纤维连接蛋白分泌、ＰＡＩ－１基因表达和生物学活性的作用。结果ＡＧＥ－ＢＳＡ抑制肾小球系膜细胞增殖，促进纤维连接蛋白分泌，上调ＰＡＩ－１生物学活性。ＡＧＥ－ＢＳＡ作用系膜细胞２４小时后，ＰＡＩ－１基因表达显著增加（０．６５％±０．０８％，对照０．４５％±０．０６％，Ｐ＜０．０５）；４８小时后ＰＡＩ－１基因表达增加更趋显著（０．９２％±０．１０％，对照０．５１±０．０８，Ｐ＜０．０１）。结论非酶促糖基化终末产物增加肾小球系膜细胞ＰＡＩ－１基因表达和生物学活性，参与了肾小球细胞外基质积聚和肾小球硬化的病理生理过程。     

细胞间粘附分子1反义寡核苷酸对小鼠肾小管间质病变的治疗作用

目的 探讨细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）在肾小管间质炎性病变中的作用。方法 将劳光标记的ＩＣＡＭ－１反义寡核苷酸经静脉注射至正常小鼠体内,观察其分布状况。小鼠在行单侧输尿管梗阻术后从尾静脉注射ＩＣＡＭ－１反义寡核苷酸（７只）,术后第７天留取输尿管梗阻侧肾脏检测肾组织ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ的表达并作病理检查。同时设立对照寡核苷酸（８只）和注射用水组（６只）作为空白对照。结果 ＩＣＡＭ－１反义寡核苷