HSV-tk和H60基因重组逆转录病毒载体的构建及鉴定

目的：构建携带自杀基因HSV-tk和免疫相关基因H60的逆转录病毒载体pIRKS-H60、pIRES-TK和pTK-IRES-H60。方法;以质粒pUC19-H60为模板,用PCR方法扩增H60基因,并亚克隆至pMD18-T载体,构建中介载体pMD18-H60。双酶切质粒pMD18-H60和tgCMV／HyTK,获得H60和TK基因片段,再克隆至逆转录载体pIRES,构建重组载体pIRES-H60和pIRES-TK。然后把HS0基因片段克隆至载体pIRES-TK,构建重组载体pTK-IRES-H60。转染重组载体至包装细胞PA317进行病毒包装,用病毒液感染NIH3T3细胞,检测病毒液的滴度。结果：测序结果显示PCR扩增的H60基因序列正确,重组载体经PCR和酶切鉴定得到相应的基因片段。经筛选得到稳定的产病毒细胞株PA317／pIRES-H60、PA317／pIRES-TK和PA317／pTK-IRES-H60,病毒滴度分别为8×10^4、1×10^5、7．1×10^4cfu／mL。结论：成功构建逆转录病毒载体pIRES-H60、pIRES-TK和pTK-IRES-H60,建立了稳定的病毒细胞株,所产生的假病毒颗粒具备一定的感染力。     

鼻内镜术后不同时间窗疗效与鼻息肉嗜酸性粒细胞的相关性研究

目的:探讨不同年龄段的慢性鼻窦炎伴鼻息肉(chronic rhinosinusitis with polyps, CRSwNP)患者的嗜酸性粒细胞(eosinophil, EOS)计数与鼻内镜术后的症状评分、鼻内镜评分相关性,预判患者年龄、手术疗效与随访干预密度。方法:选择慢性鼻窦炎伴鼻息肉患者204例,并分为青少年组、成年组、老年组。采用Messerklinger术式,息肉切除、鼻窦开放,鼻中隔偏曲影响引流者同期进行鼻中隔矫正,下鼻甲予射频消融。标本进行病理检查,HE染色后镜下作EOS计数,术后(0.5、1、3、6、12个月)进行鼻塞、鼻漏、头面部胀痛感或者头昏,嗅觉主观症状VAS评分,CT,鼻内镜Lund-Kennedy评分。分析各个评分对比及变量之间关联性。结果:鼻塞、鼻漏、头昏(术后0.5、1、3、6、12个月)、嗅觉、胀痛(术后0.5、3、6、12个月)在不同时间窗症状评分与EOS计数有相关性(P<0.01),而胀痛、嗅觉(术后1个月)时间窗无相关性(P>0.05)。EOS计数与CT、内镜评分有相关性(P<0.01),而青少年的鼻塞(术后3、6、12个月)、...     

骨肉瘤组织中MICA、MMP-9和NF-κB蛋白的表达及相关性

目的 探讨骨肉瘤组织中MHC Ⅰ类链相关蛋白A(MHC class Ⅰ chain-related A,MICA)、MMP-9和NF-KB的表达及相互间的关系,为研究骨肉瘤组织中MICA蛋白表达和脱落机制提供组织学依据.方法 应用免疫组织化学方法检测66例骨肉瘤、11例骨母细胞瘤,8例骨化性纤维瘤和6例正常骨组织中MICA蛋白的表达情况,并检测66例骨肉瘤组织中MMP-9和NF-KB蛋白的表达情况.结果 (1)MICA蛋白在骨肉瘤组织、骨母细胞瘤、骨化性纤维瘤和正常骨组织的表达率分别为51.6%(34/66)、9%(1/11)、0(0/8)、0(0/6),骨肉瘤组织中MICA表达与骨母细胞瘤(P=0.01)、骨化性纤维瘤(P<0.01)和正常骨组织(P<0.05的差异有显著性.(2)骨肉瘤组织中MMP-9和NF-KB表达率分别为55%(36/66)和73%(48/66);NF-KB与MICA(r=0.373,P<0.01)和MMP-9(r=0.536,P<0.01)的表达呈正相关关系.结论 MICA蛋白可作为骨肉瘤诊断的分子标志物;NF-KB可能参与MICA蛋白表达和脱落的分子机制,NF-kB可作为骨肉瘤免疫治疗的候选靶点.     

染色体脆性位点与肿瘤

染色体脆性位点(Fra)是基因组不稳定性的表现,以孟得尔方式遗传,肿瘤患者及家属Fra的表达率明显高于正常人.Fra与肿瘤细胞染色体断裂重排位点、癌基因位点、抑癌基因位点、病毒DNA整合位点高度一致,表明Fra可通过癌基因的扩增、抑癌基因的缺失、病毒DNA的整合参与肿瘤的发生发展,并与肿瘤的遗传易感性相关.     

外科危重病人的肠内营养临床观察

目的：探讨肠内营养（EN）支持对外科危重病人的安全性和有效性。方法：22例外科危重病人通过管饲进行EN支持；监测病人EN支持前后体重、上臂皮褶厚度、血红蛋白、血浆白蛋白、前白蛋白、转铁蛋白、总淋巴细胞计数、血糖、肝、肾功能及电解质等指标。观察其并发症的发生。结果：实验组EN后的血红蛋白、转铁蛋白高于对照组（P〈0．05），前白蛋白也明显高于对照组（P〈0．01）。主要并发症有腹泻、腹胀，经过调整EN制剂的浓度和滴速后好转。结论：对于外科重症病人，EN在防止肠道细菌易位和多脏器功能衰竭中起一定的作用，且具有安全有效、并发症少等优点，在临床上有较好的应用价值。     

男性外生殖器损伤诊治68例

目的：提高男性外生殖器损伤的诊治水平。方法：回顾性分析68例男性外生殖器损伤的临床资料。放性损伤49例，闭合性损伤19例。致伤原因以性行为损伤、车祸伤及斗殴损伤为主。结果：本组13例保守治疗，55例手术治疗，伤口感染4例。随访时间6个月～4年，无尿瘘、阴茎弯曲、睾丸坏死等并发症。结论：对男性外生殖器损伤应进一步了解是否合并海绵体、尿道和阴囊内容物的损伤，作出正确处理，减少并发症发生。     

胸腹水细胞块石蜡包埋及免疫细胞化学染色在胸腹水细胞病理学诊断中的价值

目的：探讨胸腹水细胞块石蜡包埋、免疫细胞化学染色技术在病理学诊断中的应用价值。方法：对45例胸腹水标本进行石蜡包理、切片、苏木精-伊红染色，CEA、CK（pan）、Cal、p53、PCNA、GST-Ⅱ、P-gp等免疫细胞化学染色。结果：胸腹水细胞块石蜡包埋技术，能收集到较多的有核细胞，苏木精-伊红染色色彩鲜艳、清晰，有时能观察到组织结构，免疫细胞化学染色，背景清，阳性颗粒定位准确，可靠性高。结论：该法的应用提高了胸腹水的阳性检出率，提高了疑难病例诊断的准确率，方法简单，值得推广。     

环境雌激素影响雄性胎鼠睾丸下降及睾丸引带肌动蛋白表达的实验研究

目的:探讨环境雌激素(EEs)对雄性胎鼠睾丸下降以及睾丸引带肌动蛋白表达的影响。方法:成熟雌性昆明小鼠140只随机分为14组,孕9～17d每天分别给予己烯雌酚、17α雌二醇和17β雌二醇[每种药物分别给予不同剂量25、50、100、200μg/(kg·d)],对照组、正常组分别给予等体积的二甲基亚砜、NS。孕17d处死母鼠后观察雄性胎鼠睾丸下降情况,应用透射电镜观察睾丸引带细胞超微结构,应用免疫组化检测睾丸引带组织中肌动蛋白的表达。结果:EEs可致睾丸发育较差,下降不全,与对照组比差异有统计学意义(P<0.05)。透射电镜观察发现正常组及对照组睾丸引带细胞内肌丝粗大,密体明显,胞浆中细胞器丰富;实验组睾丸引带细胞内肌丝明显细小,密体不明显,胞浆中细胞器较少,随EEs剂量增大此表现更明显。实验组肌动蛋白含量降低,EEs剂量越大,肌动蛋白含量越低(P<0.05),有显著的剂量效应关系。结论:孕期应用EEs可影响雄性胎鼠睾丸下降、睾丸引带细胞超微结构以及肌动蛋白的表达,这些改变可能是EEs导致多种生殖系统畸形的直接或间接原因。     

食管癌细胞系CSEC的建立及其生物学特性

目的建立人食管癌细胞系为潮汕沿海地区食管癌研究提供实验模型。方法采用胶原酶消化法建立人食管癌细胞系CSEC。研究培养细胞的形态特点、生长特征、对Scid小鼠的致瘤性、细胞遗传学特点及肿瘤相关标志物（AE3、p53）的表达。结果细胞系CSEC在体外持续稳定生长超过13个月，已传至80代以上，群体倍增时间为39．6小时。CSEC细胞具有鳞状细胞的形态和结构特点，胞浆富含张力原纤维束，细胞间可见桥粒。Sdd小鼠移植瘤的组织学形态与患者的原发肿瘤一致。细胞系CSEC呈近四倍体核型，染色体结构改变常见而且复杂。肿瘤相关标志物（AE3、p53）呈强阳性表达。结论人食管癌细胞系CSEC是一分化较高且生物学特性稳定的鳞状细胞癌细胞系，可为食管癌的发病机制和治疗研究提供有价值的实验模型。     

己烯雌酚影响雄性胎鼠睾丸引带ACTIN和PCNA表达的研究

目的研究环境雌激素(EEs)的经典代表己烯雌酚(DES)对雄性胎鼠睾丸引带肌动蛋白(ACTIN)和增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响。方法怀孕雌性昆明小鼠60只,随机分成6组,实验组于孕9~17 d分别给予DES 0、25、50、100、200μg.kg-1.d-1,二甲基亚砜(DMSO)作为溶剂,对照组给予等体积NS。孕17 d处死母鼠取出胎鼠,取下腹部,常规固定、制片,应用免疫组织化学方法检测睾丸引带ACTIN和PCNA的表达。结果实验组雄性胎鼠睾丸引带发育较差,ACTIN、PCNA表达明显降低(P<0.05),均有显著的剂量效应关系。结论DES降低雄性胎鼠睾丸引带ACTIN和PCNA的表达,从而影响睾丸引带的收缩及增殖活性,这可能是EEs影响睾丸引带发育及导致隐睾的机制。