大鼠ADSCs的生物学特性及向成骨细胞分化的实验研究

目的探讨脂肪源性干细胞(ADSCs)的生长增殖活性以及成骨分化能力。方法取SD大鼠,无菌条件下取腹股沟部脂肪组织,制成单细胞悬液进行常规培养。倒置显微镜观察细胞生长情况,取第3代ADSCs,采用流式细胞技术检测细胞的增殖周期情况,茜素红染色观察诱导成骨情况。结果在倒置显微镜下所观察到的传代培养的ADSCs呈现长梭型及多角形的贴壁分布状态,形态大小比较均一,突起较少,并且增殖迅速,一般在3~4d即可生长汇合成单层、平行或者漩涡状排列。流式细胞仪检测细胞阳性率CD29为92.47%,CD44为90.05%,CD34为0.95%。成骨诱导21d,细胞钙结节形成明显,经茜素红染色出现红色结节的阳性染色,不加诱导剂的对照组染色为阴性。结论分离黏附细胞具有间充质干细胞的生物学特性,可以向成骨细胞分化。     

人脐静脉间充质干细胞体外诱导分化为神经元的可行性

目的：探讨来源于人脐静脉内皮及内皮下层间充质干细胞体外诱导分化为神经元样细胞的可行性，分析体外分离纯化、原代及传代培养的最佳条件，为神经组织修复选择理想的种子细胞来源。 方法：实验于2006—04／12在辽宁医学院解剖学实验室完成。①对象：取正常健康产妇顺产或剖宫产的新生儿脐带20条，由辽宁医学院附属第一医院提供，产妇及其家属均签署知情同意书，实验经医院医学伦理委员会批准。②实验方法：无菌条件下用1g/L Ⅰ型胶原酶消化脐静脉内皮及内皮下层，收集的细胞按5× 10^7 L^-1，1× 10^8 L^-1，5× 10^8 L^-1，1× 10^9 L^-1，3× 10^9 L^-1密度接种进行原代培养，待细胞80％融合时胰酶消化传代。取第2代细胞，诱导组经含有3μmo／L β-巯基乙醇、20％胎牛血清的DMEM预诱导液处理后，换成含10g/L二甲基亚砜、100mmol／L丁化羟基茴香醚的无血清DMEM诱导液进行诱导。未诱导组将诱导液更换为无血清DMEM。③实验评估：记录原代培养过程中不同接种密度细胞贴壁所需时间。免疫细胞化学检测诱导前细胞表面抗原血管性血友病因子、CD166的表达及诱导后细胞巢蛋白、神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白的表达，倒置相差显微镜下计数阳性细胞分化率。 结果：①不同接种密度细胞贴壁所需的原代培养时间比较：5× 10^7 L^-1组仅有1孔细胞贴壁呈克隆样生长，但培养至28d时仍不能传代，其余培养孔均无细胞贴壁生长。与1× 10^8 L^-1组比较，5× 10^8 L^-1，1× 10^9 L^-1，3× 10^9L^-1组细胞贴壁生长的原代培养时间均明显缩短（P〈0．05），且后3组比较差异无显著性意义（P〉0．05）。②贴壁细胞表面抗原检测：CD166呈阳性，血管性血友病因子呈阴性。③诱导分化：诱导组脐静脉间充质干细胞巢蛋白、神经元特异性烯醇化酶呈阳性表达，不表达?     

miR-21在白藜芦醇诱导A549肺癌细胞株凋亡中的作用

目的探讨白藜芦醇对A549肺癌细胞株凋亡的影响,并揭示miR-21参与其中的机制。方法以高糖DMEM培养基培养A549肺癌细胞株,给予100μmol/L的白藜芦醇,过表达(或不过表达)miR-21培养3 d。Real-time PCR检测miR-21表达;MTT法检测细胞活力;Hoechst染色观察细胞凋亡;Western blot检测细胞凋亡因子4(programmed cell death 4,PDCD4)的表达。结果白藜芦醇能抑制A549肺癌细胞株miR-21的合成,上调PDCD4的表达,抑制细胞生长,降低细胞活力,诱导A549细胞凋亡(P0.05)。过表达miR-21能显著抑制白藜芦醇的抗肿瘤作用,PDCD4表达变化不明显,细胞生长状态、活力以及凋亡等均无明显变化(P0.05)。结论白藜芦醇能通过抑制miR-21合成,降低PDCD4表达,诱导A549肺癌细胞株凋亡。     

骨髓间充质干细胞和心脏Sca1阳性细胞移植治疗心肌梗死的效果比较及其机制研究

目的探讨骨髓来源的间充质干细胞(MSCs)和心脏来源的Sca1阳性干细胞移植对小鼠急性心肌梗死后的心功能恢复的影响。方法分别从成年C57BL/C小鼠的骨髓分离获取骨髓间充质干细胞,从心脏利用流式分选获取Sca1阳性干细胞,并在体外进行培养、扩增。C57BL/C小鼠雄性小鼠24只,按照以下方式分组,每组6只,假手术组,生理盐水对照组,MSCs治疗组和Sca1阳性细胞治疗组。小鼠麻醉后开胸,利用结扎心脏冠状动脉的左前降支建立急性心肌梗死模型,建模成功后分别在梗死区周围心肌内注射上述细胞或者生理盐水,假手术组小鼠不结扎冠状动脉。4周后,利用心脏超声观察小鼠左心室射血分数(LVEF)以及左心室舒张末期容积,以此评估心功能改变。细胞培养至第4代,采用荧光半定量PCR的方式分析细胞表达血管内皮生长因子(VEGFa和VEGFb)的情况。结果分离培养的骨髓MSCs贴壁生长,呈梭形;Sca1阳性干细胞在心脏组织的阳性率约为18%,培养后细胞贴壁生长,成短梭形,形态较MSCs更饱满。在细胞移植治疗后,与Sca1阳性干细胞治疗相比,MSCs治疗可以增加心梗后小鼠的存活率。细胞移植治疗4周后,骨髓来源MSCs治疗组的LVEF明显高于心脏来源Sca1阳性干细胞,且更有利于减少心梗后左心室舒张末期容积的扩大,改善心肌重塑。骨髓来源的MSCs表达VEGFa和VEGFb明显高于Sca1阳性细胞。结论心脏来源的Sca1阳性干细胞和骨髓来源的MSCs均可提高LVEF,促进心功能的恢复,且后者优于前者,这可能与MSCs高表达VEGF有关。     

2022年癫痫领域十大研究进展

2022年有关癫痫的基础与临床研究取得了引人瞩目且具有重要意义的成果,主要集中于癫痫的诊断与评估、神经重症患者脑电活动的干预、抗癫痫发作药物和疾病修饰治疗药物的应用、神经调控、基因治疗等领域。本文拟结合我国当前癫痫科研与临床需求,梳理2022年各相关领域的最新研究进展,并以此展望癫痫诊断与治疗发展的新方向。     

SR9009对人胶质母细胞瘤T98G细胞作用的研究

目的 探讨生物钟组分蛋白REV-ERB特异性激动剂SR9009对T98G细胞增殖、细胞活力、代谢活动及治疗时间的影响,以阐明其发挥作用的潜在机制.方法 体外培养人T98G细胞,分别与DMSO、SR9009以及硼替佐米(borte-somib,BOR)孵育后进行比较.MTT法测定SR9009处理后的T98G细胞活力,同时...     

FABP-5基因沉默联合放疗对人食管癌细胞株EC9706的抑制作用

目的 探讨脂肪酸结合蛋白-5(fatty acid binding proteins-5,FABP-5)基因沉默联合放疗对人食管癌细胞株EC9706的影响.方法 根据FABP-5mRNA编码序列设计并合成干扰SiRNA序列,转染入EC9706细胞,实验分为四组:空白对照组(Control)、转染FABP-5沉默组(FA...     

α-硫辛酸拮抗铅对幼年大鼠骨生长及代谢的影响

目的：探讨α-硫辛酸（LA）对染铅大鼠骨显微结构及骨髓生化指标的影响．方法：将SD大鼠随机分为2组,空白对照组和铅染毒组（230mg／L的醋酸铅灌胃）,40d后各组取3只大鼠测血铅和骨铅,将已染铅大鼠随机分为4组,即铅对照组、3个LA治疗组[30,60,100mg／（kg·d）]．LA治疗80d后处死动物,测定血铅、骨铅、HE染色观察骨小梁结构,免疫组化法检测碱性磷酸酶表达．结果：①LA各治疗组大鼠血铅、骨铅水平均低于铅对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）．②LA100mg治疗组大鼠,HE染色观察骨小梁结构,碱性磷酸酶表达与铅对照组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）．结论：LA能够拮抗铅的骨毒性．