腺病毒携带人乙型肝炎病毒表面前S2抗体基因转染大鼠移植肝预防乙型肝炎病毒再感染

目的探讨腺病毒携带人乙型肝炎病毒表面前S2抗体基因预防乙型肝炎病毒(HBV)再感染移植肝的作用。方法将人乙型肝炎病毒表面前S2抗原人源化抗体基因(Ab-H-HBV-S2)克隆入5型腺病毒穿梭质粒载体,在293细胞中重组,产生重组型腺病毒。用重组腺病毒感染冷保存时的大鼠供肝,获得人乙型肝炎病毒表面前S2抗体(简称为:前S2抗体)的表达。观察前S2抗体在体外保护人原代肝细胞不受HBV感染的效果。结果用50%组织培养感染剂量法(TCID50)测定重组腺病毒滴度为5.1×1010PFU/ml。受鼠肝移植后3d时,血清中前S2抗体的表达量为(16.7±10.5)mg/L,7d时的表达量为(30.9±13.6)mg/L。当受鼠血清中前S2抗体浓度≥0.5mg/L时,与HBV和人原代肝细胞共同培养后,检测上清液中乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)为阴性。结论全长Ab-H-HBV-S2基因克隆入腺病毒载体,感染大鼠供肝,获得人源化抗体的表达;表达的前S2抗体能保护人原代肝细胞不受HBV感染。     

miR-21调节缺血缺氧诱导的大鼠肝卵圆细胞自噬的研究

目的探讨miR-21在缺血缺氧诱导的大鼠肝卵圆细胞自噬中的作用。方法体外培养肝卵圆细胞,慢病毒转染肝卵圆细胞构建稳定的细胞株,分别提取各组细胞RNA逆转录后行SYBR Green实时荧光定量PCR,检测各组miR-21的表达,以转染好的稳定的细胞建立缺血缺氧模型,共分为3组:miR-21空载体慢病毒转染HOC自噬组,miR-21增强慢病毒载体转染HOC自噬组,miR-21-inhibition慢病毒载体转染HOC自噬组。Hoechst 33258染色观察细胞凋亡;应用丹(磺)酰戊二胺(Monodansylcadaverine,MDC)染色荧光定位法、观察各组细胞的自噬;免疫印迹法(Western blotting)检测各组细胞LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白表达情况。结果与空载体组比,增强组miR-21基因水平表达增强,而MDC染色减弱(自噬减少),蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值减少;而抑制组miR-21基因水平表达减少,MDC染色增强(自噬增强),蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值增多。结论抑制miR-21过表达可以增强缺血缺氧引起的肝卵圆细胞的自噬,有利于肝卵圆细胞在缺血缺氧微环境中稳定细胞内环境,维持细胞的存活。     

树状DNA原位杂交技术在子宫颈癌人乳头状瘤病毒DNA分型检测和细胞学定位中的应用

人乳头状瘤病毒(human papilloma virus，HPV)是一种环状双链DNA病毒，其基因组大小为7．9kb。目前，传统的细胞学和血清学方法诊断率较低，特异性欠佳。树状DNA杂交(DDH)技术是一种信号放大技术，它通过增加标记探针的拷贝数或标记物的信号强度来提高敏感度，具有与PCR技术相似的高敏感性。本研究采用以4层单体组成的3DNA树状体作为靶序列探针载体的DDH技术，并结合原位杂交方法，对45例临床诊断为宫颈癌患者的癌组织分别进行HPV16、18DNA检测，并就提高杂交敏感性的方法学做进一步探讨，为临床推荐一个行之有效的新方法。     

肝癌复发和转移的分子生物学研究

肝癌复发和转移一直是影响肝癌治疗效果的重要因素,肝癌的复发和转移有一系列基因参与调控,它涉及到细胞基因改变,表面结构、抗原性、侵袭力、粘附能力、产生局部血凝因子或血管生成的能力、分泌代谢功能以及肿瘤细胞与宿主、肿瘤细胞与间质之间相互关系的多步骤、多因素参与的过程。     

实习护生姑息护理知识掌握现状及学习需求的调查

目的了解实习护生对姑息护理知识的掌握现状及对姑息护理知识的需求程度。方法采用姑息护理知识问卷（PCQN）及自制“需求问卷”随机对温州市三甲医院的89名护理实习生进行调查。结果听过“她息护理”的护生占37．08％,而86．52％的护生感觉对此类患者的宣教护理知识匮乏,PCQN测试最高分为14分,最低分为2分,平均分为（8．618±2．560）分。正确率为43．09％。结论实习护生对姑息护理知识的严重缺乏,学校教育应加强姑息护理知识的开设和传授。     

乌司他丁联合血必净对重症急性胰腺炎的疗效

目的：研究乌司他丁联合血必净注射液治疗重症急性胰腺炎的临床疗效及其对氧化应激、肠黏膜保护作用的效果。方法：收集 134 例重症急性胰腺炎患者,按照随机数表方法分为对照组（常规治疗加用乌司他丁）、研究组（常规治疗加用乌司他丁联合血必净注射液）各 67 例,对比两组炎症因子指标（IL-6、IL-8、TNF-α、CRP）、氧化应激指标（SOD、 MDA、NO）、免疫功能指标（CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+）、肠黏膜受损程度指标（DAO、内毒素、D- 乳酸）、临床相关指标以及临床疗效。结果：治疗后研究组 IL-6、IL-8、TNF-α、CRP 水平均明显低于对照组（P<0.05）,研究组降低炎症反应效果优于对照组;研究组 SOD、NO 水平明显高于对照组,MDA 水平明显低于对照组（P<0.05）,研究组改善氧化应激明显优于对照组;研究组 CD3+ 略高于对照组,但无统计学差异（P>0.05）;CD4+、CD4+/CD8+ 明显高于对照组,CD8+ 明显低于对照组（P<0.05）,可见,研究组对调节机体免疫功能效果优于对照组;研究组 DAO、内毒素、D- 乳酸指标均明显低于对照组（P<0.05）,研究组改善肠黏膜受损程度的效果优于对照组;研究组腹痛消失时间、腹胀消失时间及血清淀粉酶恢复时间均明显的短于对照组（P<0.05）;研究组总有效率 96 %,与对照组比较有统计学差异（P<0.05）。结论：乌司他丁联合血必净注射液治疗重症急性胰腺炎,临床疗效显著,与单用乌司他丁相比,更有助于改善炎症反应,抑制氧化应激, 提升机体免疫功能,更好地保护肠黏膜,促进康复。     

腺病毒介导CD40Ig基因在大鼠肝脏移植中的作用

目的探讨腺病毒介导CD40Ig基因(AdCD40Ig)在大鼠肝脏移植中的作用。方法随机将供受体大鼠分4组,A:同基因移植组,B:免疫排斥组,C:AdLacZ对照组,D:基因治疗组。观察大鼠存活时间,CD40Ig、细胞因子水平和移植肝病理情况。结果 D组存活时间长于B、C组(P<0.05);CD40Ig浓度于术后7天达高峰;D、A组IL-2、IFN-γ水平较B、C组明显降低(P<0.05),D组IL-10较其他组明显增加(P<0.05);B、C两组术后出现中、重度排斥反应,汇管区淋巴细胞浸润明显,D组汇管区轻度炎症,无明显血管损伤证据,病理评级较B、C组有统计学意义(P<0.05)。结论 CD40Ig通过阻断CD40/CD40L通路,可延长移植肝存活时间,在受体内长期表达,减少汇管区淋巴细胞浸润,影响相关细胞因子的表达,对大鼠肝脏急性排斥反应有抑制作用。