针对Fas基因RNA抑制作用前后帕金森病细胞相关因子变化的凋亡作用

近年来研究表明，细胞凋亡在帕金森病的病理机制中起重要作用。细胞凋亡涉及多种基因的复杂变化，其中凋亡促进基因Fas与之关系密切。基因干预可通过降低凋亡基因的表达而对细胞凋亡起到干预作用。本实验用6-羟基多巴胺作用于NGF诱导后PC12细胞，建立帕金森病细胞模型，用RNAi方法对Fas基因表达进行抑制，从而观察该方法以帕金森病细胞凋亡的影响。     

胸腺五肽基因转化烟草及其表达的研究

目的研究在烟草中表达胸腺五肽（Thymopentin，TP5）。方法合成TP5基因，构建重组载体pB1121＋TP5，以烟草叶盘为外植体，通过根癌农秆菌介导转染烟草，取卡那霉素抗性植株用PCR方法筛选转染阳性植株及RT—PCR、质谱检测阳性植株叶片外植体中的TP5表达。结果抗性植株整合并表达TP5。结论成功构建了含TP5的植物表达载体pB1121＋TP5，并能在烟草中表达。     

慢性脑缺血致认知功能障碍大鼠皮层ROCK2、MBS表达的变化

目的 探讨Rho激酶(ROCK)2及下游底物肌球蛋白结合亚单位(MBS)在慢性脑缺血致认知功能障碍大鼠皮层中的表达变化及法舒地尔对其的影响.方法 健康雄性Wistar大鼠54只,随机分为假手术组、缺血组和ROCK抑制剂(法舒地尔)组.各组再根据缺血时间分为3、6、9 w三组,每组6只.采用双侧颈总动脉永久性结扎(2VO)建立慢性脑缺血模型,Morris水迷宫检测学习记忆功能,RT-PCR和Western印迹检测ROCK2及其下游作用底物MBS的表达水平.结果 与假手术组相比,模型组和法舒地尔组大鼠逃避潜伏期和游泳路径均明显延长(P＜0.05)；缺血3 w起,大鼠皮层ROCK2、MBS表达明显增高；法舒地尔干预后,大鼠逃避潜伏期和游泳距离缩短(大鼠学习记忆成绩不同程度改善),ROCK2、MBS表达水平均有不同程度降低,与模型组相比差异显著(P＜0.05).结论 ROCK2及其下游作用底物MBS参与大鼠慢性脑缺血致认知功能障碍,脑组织存在ROCK2表达上调与功能活化,ROCK抑制剂法舒地尔能够减轻神经功能损伤,从而改善学习记忆功能.     

脂肪来源基质细胞的扩增及多分化潜能研究

目的建立人脂肪来源的基质细胞(ADSCs)的分离和扩增方法,探讨ADSCs的多向分化潜能。方法采用胶原酶消化法分离扩增人ADSCs,测定其生长的经时变化、累积生长倍数等;应用不同因子诱导ADSCs向脂肪细胞及神经元样细胞分化并进行鉴定。结果每100ml脂肪抽吸物中可分离得到2×107~4×107个有核细胞,60d内扩增至P8;油红O染色、免疫细胞化学染色及RT-PCR证实ADSCs经诱导可分化为脂肪细胞及神经元样细胞。结论建立了ADSCs的扩增培养方法,扩增培养的ADSCs具有旺盛的增殖能力,并且具有向脂肪细胞及神经元样细胞分化的潜能。有望作为一种成体多能干细胞应用于组织工程及细胞治疗。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注ICRmRNA表达动态变化研究

目的 探讨白细胞介素1-β转化酶（ICE）在局灶性脑缺血再灌注后的表达及作用。方法 线栓法复制大脑中动脉脑缺血再灌注模型。逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）技术检测大鼠局灶性脑缺血再灌注后ICEmRNA表达。结果 缺血3h及缺血3h再灌注随缺血及缺血再灌注时间延长,缺血中心区与半影区ICEmRNA表达处于动态变化之中,再灌注24h、48h半影区表达持续高水平,而中心区表达下降。结论 局灶性脑缺血再灌注过程中ICEmRNA表达增强,促进神经细胞凋亡,ICE参与局灶性脑缺血再灌注神经细胞凋亡的调控。     

Bcl-2基因家族与细胞凋亡及其在脑缺血中的表达

研究表明原癌基因 Bcl 2是调节细胞凋亡途径中的一个重要调节基因。随着研究的不断深入 ,又发现许多基因结构与 Bcl 2相似 ,具有保守的 BH1和BH2区 ,序列却与 Bcl 2均具有不同程度同源性的基因参与细胞凋亡的调节 ,它们通过相互作用 ,正向或反向调节细胞的凋亡 ,因此将这些基因统称为Bcl 2基因家族。根据它们对细胞凋亡作用结果的不同 ,可将 Bcl 2家族成员分为两类 ,一类能促进细胞凋亡 ,有Bax、Bcl xs、Bad、Bak;另一类能抑制细胞凋亡 ,有 Bcl 2、Bcl x L、Mcl 2、Bag l、Al、ced 9和一些病毒基因。研究表明 ,Bcl 2基因及其家族成…     

针对Fas的RNA抑制对缺血再灌注神经细胞的保护作用

目的探讨Fas-RNAi对缺血再灌注(I/R)损伤后神经细胞凋亡的保护作用。方法细胞随机分四组对照组、模型组、GFPsiRNA组、FassiRNA组。对照组用完全培养液培养,其他三组细胞制作体外(I/R)模型,GFPsiRNA组、FassiRNA于转染24h后造模,造模后6h进行Caspase-3、Fas表达检测,24h进行细胞凋亡相关检测。结果(1)Fas、Caspase-3阳性率模型组模型组的Fas阳性率(37.25±8.37)%、caspase-3阳性率(28.79±6.23)%明显高于对照组(7.21±3.28,8.01±2.31)%,差异有统计学意义(P<0.01)。GFPsiRNA组Fas阳性率(14.35±7.31)%、caspase-3阳性率(16.33±4.15)%明显低于模型组,差异有统计学意义(P<0.01)。(2)凋亡率模型组细胞(39.13±10.63)明显高于对照组(2.85±0.43),差异有显著性(P<0.01)。FassiRNA组(1.70±0.31)明显低于模型组(P<0.01)。结论针对Fas的siRNA能有效地抑制I/R损伤后神经细胞凋亡。对神经细胞I/R损伤有一定的保护作用。