胎儿毛乳头细胞分化为类成骨细胞的实验研究

目的 研究胎儿毛乳头细胞的体外成骨能力，为骨组织工程提供一种新的种子细胞。方法 Ⅰ型胶原酶消化法分离毛乳头，常规成纤维细胞培养液培养毛乳头细胞。第3代和第7代细胞经成骨诱导液诱导培养7d，以免疫荧光、Von Kossa等方法鉴定毛乳头细胞及检测细胞的成骨特性。结果 培养的毛乳头细胞呈聚集性生长，表达平滑肌肌动蛋白和Ⅰ型胶原。经成骨诱导后表达骨桥蛋白，有钙结节形成。结论 毛乳头细胞具有成骨活性，可作为骨组织工程的种子细胞。     

人工真皮替代物的构建及其生物相容性评价

目的　构建人工真皮替代物并评价其生物相容性。方法　取自健康小白猪的异种皮肤先用 0 .5 %安多福浸泡消毒后 ,在无菌操作下 ,取厚度为 0 .3～ 0 .4mm ,经胰蛋白酶消化、冷冻干燥及戊二醛等处理后检测其理化性能和生物学相容性。结果　去细胞真皮底物具有良好的弹性、强度和组织学结构 ;人包皮成纤维细胞均能在 5～ 10min内很好地粘附 ,且生长良好 ,说明人工真皮对细胞生长无毒性 ;人工真皮在大鼠体内的免疫排斥反应轻微 ,组织相容性好。结论　本实验所构建的人工真皮具有良好的理化性能 ,生物相容性好 ,免疫排斥反应小 ,且成本低、来源广 ,是构建组织工程皮肤理想的真皮材料。     

积雪甙加中药外洗剂治疗烧伤增生性瘢痕

目的：探讨积雪甙结合中药外洗剂治疗烧伤增生性瘢痕的疗效。方法：９０例烧伤增生性瘢痕患者，随机分为３组，第１组应用积雪甙＋中药外洗剂治疗，第２组单用积雪甙治疗。第３组应用弹力绷带加压包扎治疗（对照组）；观察其症状与体征的变化以及毒性与副作用。结果：在缓解症状、改善体征，以及不同阶段的疗效方面，效果依次是第１组〉第２组〉第３组，其中第１组明显好于第３组（Ｐ〈０．０５）。结论：积雪甙结合中药荏产生性瘢痕     

糖尿病并发皮肤慢性溃疡患者相关因素10年回顾性分析

目的：通过对组内近10年来糖尿病病例的回顾，总结糖尿病皮肤慢性溃疡的流行病学特征，并分析影响治疗效果的相关影响因素。方法：对1991／2000两所医院的11369例糖尿病患者一般资料进行回顾性统计，并对其中234例糖尿病皮呋慢性溃疡病例的不同治疗方法进行比较。结果：11369例糖尿病患者234例发生慢性皮肤溃疡，发病率2．058％，均为2型糖尿病患者。糖尿病皮肤慢性溃疡好发部位依次为：下肢，骶尾部及其他部位。234例患者中，非手术50例，48例痊愈，愈合时间52—84d。手术184例，180例痊愈，愈合时间21—30d。血管超声检查显示糖尿病足患者皆有动脉壁(股总动脉、股浅动脉、国动脉胫后动脉、足背动脉)增厚，内膜粗遭，管腔不规则狭窄，血流阻力数较高。结论：糖尿病皮肤慢性溃疡的治疗应是综合性的。控制血糖水平、改善局部血液、准备创面床、手术植皮是治疗糖尿病皮肤慢性溃疡的有效方法。     

荷负电气溶胶治疗对大鼠烫伤创面白细胞介素-8、10表达的影响及意义

Objective To discuss the influence of aerosol bioelectricity on the expression of interleukin (IL) -8 and IL-10 in wound healing of burned rats. Methods The deep Ⅱ degree scalding models were established in Sprague Dawley (SD) rats. Rats were randomly divided into experimental group (n1 =20) and control group (n2 =20). The rats in experimental group were treated with aerosol bioelectricity.Samples were collected at the first to eleventh day post-scalding. Immunohistochemistry and image analysis methods were conducted to examine the expression of IL-8 and IL-10 in both experimental and control groups. Results The average wound healing time in experimental group was 7. 00 ± 1. 15 days, and that in control group was 9. 00 ± 1. 34 days. IL-8 and IL-10 were observed mainly in polylmorphonuclear and mononuclear cells in both experimental and control groups on the 1 st day. On the third day, fibroblasts abounded, IL-8 expression was increased evidently and reached a peak. The peak value (6. 73 ± 1. 36) in experimental group was lower significantly than that in control group ( 2. 85 ± 0. 72, P ＜ 0. 01). From the 5th to 11th day, IL-8 expression was declined rapidly. IL-10 was expressed in keratode cells and had the peak value in experimental group (1. 24 ±0. 15) and control group (5. 69 ± 1. 32) on the 3rd day. IL-10 expression was declined gradually from the 5th to 11th days. The expression level of IL-10 in experimental group was significantly higher than in control group from the 3rd day to 11th days post-scalding (P＜0. 01). On the 3rd day, both IL-8 and IL-10 in experimental and control groups were expressed abundantly , and there was negative relationship between them (r = - 0. 862, P ＜ 0. 01). Conclusion Aerosol bioelectricity can indicate active cells proliferation through down-regulating the expression of IL-8 and up-regulating the expression of IL-10, accelerating burned wound healing.     

人Ⅰ型前胶原基因反义寡核苷酸抑制增生性瘢痕成纤维细胞胶原合成

目的 探讨阳离子脂质体介导Ⅰ型前胶原基因(Col Ⅰ A1)反义寡核苷酸(antisense oligodeoxyneucleotide,ASODN)转染对人增生性瘢痕成纤维细胞Col Ⅰ A1表达的影响.方法 取患者自愿捐赠瘢痕组织,采用组织块法培养人增生性瘢痕成纤维细胞并传代.于6孔板内按32.25×104个/孔的密度接种第4代细胞,根据转染液不同分为4组:A组为脂质体加Col Ⅰ A1 ASODN,B组为Col Ⅰ A1 ASODN,C组为脂质体,D组为空白对照.转染后8 h,1、2、3、4 d分别提取细胞总RNA,行RT-PCR后测定Col Ⅰ A1 mRNA表达量;胃酶消化法提取ECM中Col Ⅰ A1蛋白,ELISA测定其浓度.结果 扩增产物经琼脂糖凝胶电泳榆测显示条带清晰,无杂带、明显的引物二聚体及拖尾现象.Col Ⅰ A1 mRNA相对表达量:转染后8 h,A组小于B、C、D组,B、C组小于D组,比较差异均有统计学意义(P＜0.05);B、C组间比较筹异无统计学意义(P＞0.05);转染后1 d,A、B组小于C、D组(P＜0.05),A、B组间和C、D组间比较差异无统计学意义(P＞0.05):转染后2 d,各组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05);转染后3、4 d,A组小于B、C、D组,B组小于C、D组(P＜0.05),C、D组间差异无统计学意义(P＞0.05).Col Ⅰ蛋白浓度:转染后8 h,A组小于B、C、D组,B、C组小于D组,比较差异均有统计学意义(P＜0.05),B、C组间差异无统计学意义(P＞0.05);转染后1 d,各组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05);转染后2、3、4 d,A、B组小于C、D组,C组小于D组(P＜0.05),A,B组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 Col Ⅰ A1 ASODN抑制Col Ⅰ A1 mRNA和蛋白表达;阳离子脂质体作为载体有增强效果,促进ASODN进入细胞并在核内分布.     

解毒烧伤膏的抗菌作用研究

[目的]探讨解毒烧伤膏有无抗菌作用.[方法]采用纸片扩散法,分别将解毒烧伤膏、聚乙烯吡咯烷酮碘(聚维酮碘)软膏、京万红软膏和湿润烧伤膏涂于直径6mm的纸片上,置于接种了烧伤创面常见菌种包括金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、不动杆菌等的琼脂平板培养皿中,37℃孵育24 h,观察并测量抑菌圈直径大小.[结果]四种外用药中,以聚维酮碘软膏抗菌作用最强,解毒烧伤膏次之,再次为京万红软膏,湿润烧伤膏基本无抗菌作用.聚维酮碘软膏抑菌圈大小分别与其它三者两两比较,差异有显著性意义(P＜0.01);解毒烧伤膏抑菌圈大小与京万红软膏及湿润烧伤膏两两比较,差异有显著性意义(P＜0.05).[结论]解毒烧伤膏对烧伤科常见的革兰阴性及革兰阳性菌包括部分耐药菌具有一定的抑制作用.     

老年人皮肤多能干细胞的分离及有效扩增

目的探讨老年人皮肤多能干细胞分离、扩增方法。方法 6例老人皮肤标本,在限制性培养基和血清作用下筛选克隆和扩增传代;免疫细胞化学技术、克隆分析等方法评价其生理特性。结果 1 cm2老年人皮肤原代获得400～600个克隆;扩增后每代获(2～3)×105个克隆。克隆向神经元、神经胶质、平滑肌和脂肪样细胞分化;单克隆增殖细胞也能向上述细胞分化。克隆表达 Nestine、fibronectin、c-Myc、信号转导和转录激活因子3、端粒体逆转录酶蛋白。结论老年人皮肤多能干细胞在限制性培养基和血清交替作用下能有效分离和扩增,使老年人干细胞自体移植成为可能。     

反义α_1(Ⅰ)型前胶原基因片段真核细胞表达质粒的构建与鉴定

为利用反义RNA下调成纤维细胞Ⅰ型胶原基因的表达，根据α1（Ⅰ）前胶原基因的核苷酸序列，我们自行设计了6条寡核苷酸引物，从正常人外周血全基因组DNA中分别扩增α1（Ⅰ）前胶原基因的转录起始区域及第Ⅰ，Ⅱ外显子区域3个基因片段。片段长度分别为229、166、195hP。为了后续进行定向克隆，在引物上分别引入了限制性内切酶酶切位点，并附加酶切保护碱基。由于1、刀、皿、V、力型多种胶原由不间断的重复的氨基酸序列（Gly－X－Y）n组成，其中X多为脯氨酸，而Y多为羟瞄氨酸，放各种胶原基因的结构极为相似，而且基因中GC含量很高（Gl…     

α_1(Ⅰ)型前胶原基因反义重组质粒对成纤维细胞的影响

目的　研究反义RNA对成纤维细胞胶原蛋白的调控作用 ,探讨基因治疗增生性瘢痕的可能性。方法　将α1 (Ⅰ )型前胶原基因片段反向克隆至非整合型哺乳动物表达载体pREP9的多克隆位点中 ,以构建α1 (Ⅰ )型前胶原基因反义RNA表达载体pREP9 AScoll,并籍脂质体 lipofectamine将其导入人胚肺HLF细胞中 ,运用MTT试验、电镜、3H 脯氨酸掺入法检测反义RNA表达载体对HLF细胞的影响。结果　外源重组体pREP9 AScoll对胶原蛋白的合成有明显抑制作用 ,但对细胞增殖无任何影响。结论　α1 (Ⅰ )型前胶原基因反义重组质粒能有效调控胶原蛋白的合成 ,从而有在基因水平防治瘢痕的前景。