重组异种骨二次免疫的实验研究

目的：研究重组异种骨（ＲＢＸ）重复植入动物体内引起的二次免疫应答及其对成骨活性的影响。方法：将ＲＢＸ间隔不同时间重复植入雄性Ｂａｌｂ／ｃ小鼠股部肌肉内，通过ＥＬＩＳＡ测定体液免疫水平，检测局部组织的碱性磷酸酶（ＡＬＰ）活性反映成骨情况。结果：ＲＢＸ第１次植入后，血清中可检测到特异性抗体；局部组织中的ＡＬＰ活性略低于正常小鼠骨骼。间隔３周或６周再次植入ＲＢＸ，血清中特异性抗体水平明显增高（Ｐ＜０．０５）；ＡＬＰ活性降低（Ｐ＜０．０１）。结论：重复植入ＲＢＸ可诱发机体产生免疫应答；ＲＢＸ诱导成骨活性受到抑制，成骨作用延迟。     

骶骨肿瘤切除后腰骶关节稳定性重建中 USS钉棒系统的应用

TheapplicationofUSS（universalspinalsystem）screw－podssys－temandfixationofdistalscrewintheiliacplanewhichcanprovidesupportforinternalfixationcanimprovewellreconstructionoflum－bar－sacrumjoint，restorepelvicring，preventlumbarvertebrade－creaseandpromotepostoperativeearlyweightloadingandactivity．５patientswithlumbar－sacrumtumorhadacceptedthetreatmentfromFeb．２０００toAug．２００１，andrecenteffectsweresatisfactory．１Subjectandmethods１．１SubjectAgroupof５patients（aged３４to６０averag…     

恶性骨肿瘤保肢手术后的骨关节返修术

目的 分析四肢恶性骨肿瘤保肢手术后进行返修术的原因及手术治疗经验。方法 1994年1月－1997年12月进行保肢手术后骨关节返修术8例,平均无瘤生存时间8年。主要返修原因是严重的创伤性骨关节炎、骨折、骨吸收。影响返修手术的主要困难是软组织挛缩和肢体短缩。结果 行全髋返修1例,股骨下端长段同种异体骨移植再建3例,在原移植物基础上行全膝关节置换3例,更换髓内钉1例。术前骨扫描结果提示原移植的4例长段同种异体骨已有较活跃的骨代谢,术后病理学检查显示移植骨段存活。术后疼痛症状明显改善,功能满意。结论 保肢手术后的返修术主要原因是植入的异体骨或灭活瘤段发生骨折、关节功能较差。在有良好的软组织覆盖下,应用绞链式可旋转全膝关节假体或长段异体骨复合半限制球轴式表面置换人工膝关节假体可获得较理想的术后功能。     

骨保护素对破骨细胞分化和骨吸收活性的抑制作用

背景骨保护素(osteoprotegerin,OPG)可抑制破骨细胞的分化,抑制成熟破骨细胞的骨吸收活性并诱导其凋亡,在骨质疏松、类风湿性关节炎、癌症骨转移的领域有潜在的应用价值.目的鉴定在CHO细胞中表达的人骨保护素生物学活性.设计随机对照的实验研究.地点和对象实验在解放军第四军医大学西京医院骨科研究所完成,研究对象人骨肉瘤细胞株MG63、中国仓鼠CHO细胞株、克隆质粒pUC19及真核表达质粒pcDNA3为本室保存,12只6～8周龄BABL/c雄性小鼠由本校动物中心提供.干预RT-PCR法获得人OPG编码区cDNA并构建真核表达载体,在脂质体介导下转染CHO细胞,经Western blot鉴定筛选稳定表达OPG的细胞系.获取含有OPG蛋白的条件培养基浓缩液,实验组体外培养的鼠破骨细胞培养基中加入含有OPG蛋白的条件培养基浓缩液.对照组1只加入转染pcDNA3空载体的CHO细胞培养基的浓缩液.对照组2只加入完全培养基.主要观察指标观察人OPG对破骨细胞的分化和骨吸收的影响.结果转染人OPG编码区基因的CHO细胞能分泌表达OPG.小鼠骨髓细胞在1α,25(OH)2D3(1×10-8mol/L)的存在下可稳定分化出具有骨吸收功能的破骨细胞样细胞,在该培养体系中加入含有OPG的CHO细胞培养上清浓缩液,TRAP染色阳性细胞数明显减少(t=5.547,P＜0.01),骨吸收陷窝的数量显著减少(t=3.409,P＜0.01).结论人骨保护素可在CHO细胞中分泌表达,并对体外培养状态下的破骨细胞的分化和骨吸收功能有抑制作用.     

内锁髓内钉并异体骨植骨治疗肱骨肿瘤切除术后骨缺损

目的：评价肱骨内锁髓内钉复合异体骨段（关节）移植重建肱骨恶性肿瘤所致的大段骨缺损提临床效果。方法：应用肱骨内锁髓内钉复合异体半关节或骨段移植治疗须骨恶性骨肿瘤１１例,随访时间１１￣３８个月。结果：８例植骨愈合,２例骨不连,１例肿瘤局部复发后截肢。术后总评优良率６３．６％。植骨延迟愈合及肩关节无力是主要的并发症。结论：肱骨内锁髓内钉固定牢固,复合异体骨段（关节）移植允许患者早期活动,值得推荐。     

肢体骨转移癌的大段异体骨关节移植术后康复

目的探讨肢体骨转移癌患者行大段异体骨关节移植术及肢体功能康复方法并进行评价。方法１７例肢体骨转移癌患者接受大段异体骨关节移植或复合异体骨段的人工股骨头置换术,根据Ｅｎｎｅｋｉｎｇ肢体恶性肿瘤保肢术后功能评价系统及Ｋａｒｎｏｆ－ｓｋｙ评分标准对患者进行手术前后比较并做统计学分析,平均随访１６．５个月。结果（１）术后８２．４％（１４／１７）的患者肢体功能明显改善, Ｋａｒｎｏｆｓｋｙ评分增加（Ｐ＜ ０． ０１）,８８． ２％（１５／１７）患者疼痛减轻（ Ｐ＜ ０． ０１）。（２）骨不连（２／１７）、假体松动（１／７）及肩关节无力（３／５）是主要的术后并发症。结论选择合适的手术适应证后,异体骨关节移植可使骨转移癌患者的骨骼系统得到坚强的固定;术后早期锻炼有利于患者肢体功能康复。     

人GST-OPGL融合蛋白的原核表达与抗体制备

目的:克隆人骨保护素配体(OPGL)编码区基因,构建融合表达载体,在大肠杆菌中表达,并制备抗体。方法:采用RT-PCR法得到人骨保护素配体(OPGL)编码区cDNA,克隆入原核表达载体pGEX-4T-3,转化大肠杆菌感受态细胞JM 109,0.1mMβ-D-半乳糖苷(IPTG)诱导后收集菌体蛋白,行SDS-PAGE电泳。将此融合蛋白免疫新西兰兔,W estern b lot鉴定。结果:获得人骨保护素配体编码区cDNA,构建原核表达载体pGEX-OPGL,转化菌株可表达人GST-OPGL蛋白,蛋白分子量约为43KD,蛋白表达量约为菌体总蛋白的21%。W estern b lot检测表明获得了免疫活性强的兔抗人的多克隆抗体。结论:获得人骨保护素配体编码区cDNA,在大肠杆菌中表达了人GST-OPGL融合蛋白,并获得了高效多抗。     

大段同种异体骨移植后骨密度变化与骨折的关系

目的:探讨大段同种异体骨移植后的骨密度变化及骨折发生的规律和特征。方法:对1985-01/2001-01解放军第四军医大学西京医院骨科48例四肢骨肿瘤切除,行大段同种异体骨移植患者,每6个月测定异体骨和对侧相应部位正常骨骼骨密度并进行比较。结果:异体骨和对侧相应部位正常骨骼骨密度术后12个月分别为(1.12±0.12)g/cm和1.13±0.10)g/cm,两者间的差异无显著性意2(2义(t=1.48,P>0.05);手术18个月后分别为(1.04±0.11)g/cm和2(1.10±0.10)g/cm,两者间的差异有显著性意义t=2.42,P<0.05);2(手术30个月后分别为(0.91±0.10)g/cm和(1.11±0.11)g/cm,两者22间的差异有非常显著性意义(t=3.78,P<0.01)。结论:异体骨移植后骨密度降低,是由免疫反应和爬行替代修复造成,多发生在植入术18个月后,异体骨移植后骨密度降低与骨折发生密切相关。提示:异体骨骨折多发生在植入术18个月后,降低免疫反应和加速爬行替代,坚强、持久内固定,术后延迟内固定物取出,适当控制患肢活动量等,均能有效预防异体骨骨折。     

肢体骨肉瘤瘤段灭活再植的术后并发症

目的：分析骨肉瘤患接受瘤段灭活再植的术后并发症，评价该术式的临床价值。方法：1986年11月到1989年7月，39例肢体骨肉瘤患行瘤段灭活再植术，平均随访43．5个月。瘤段灭活方法为液态氮冷冻24例，^60Co照射13例，煮沸2例。结果：（1）29名患发生了41例次的术后并发症，发生率为74．4％。11名患因术后感染、肿瘤局部复发等原因而截肢。术后总评优良率为41．0％。（2）瘤段灭活再植术后主要并发症的发生率：肿瘤局部复发33．3％，术后感染15．4％，皮瓣坏死7．7％，骨折25．6％，骨不连10．3％。结论：采用液态氮冷冻、^60Co照射、煮沸等方法行瘤段灭活再植，术后并发症发生率高，患肢体功能较差。     

人破骨细胞生成抑制因子编码区基因的克隆及在成肌细胞中的表达

目的：克隆人破骨细胞生成抑制因子（OPG／OCIF）编码区基因并在真核细胞中的表达。方法：以人骨肉瘤细胞系MG63的总RNA为模板，采用RT－PCR法得到OPG／OCIF的编码区cDNA，构建真核表达载体pIRES2-OPG-EGFP，在脂质体介导下转染小鼠成肌细胞系C2C12，经G418压力筛选建立稳定转染人OPG／OCIF的细胞系，共聚焦荧光显微镜及核酸杂交方法检测OPG／OCIF在细胞中的表达，结果：获得的人OPG／OCIF编码区全长cDNA序列与文献报道的核苷酸序列一致，核酸杂交证实稳定转染人OPG／OCIF编码区cDNA的小鼠成肌细胞系中有OPG／OCIF，mRNA的表达。结论：获得人破骨细胞生成抑制因子编码区全长cDNA并证实在真核细胞中稳定表达。