腺病毒介导的基因治疗在骨创伤及骨病中的应用

目的 介绍腺病毒介导的基因治疗的特点及其在骨创伤和骨病中的应用。方法 广泛查阅有关重组腺病毒载体的制备原理、特点及应用研究进展等方面的文献，并总结腺病毒介导的基因治疗在促进骨愈合、治疗骨质疏松及类风湿性关节炎等骨病研究中的应用情况。结果 腺病毒载体具有高转染率、目的基因的高表达率及在宿主细胞内的表达有一定的时限等特点，能有效转染软骨细胞、成骨细胞、破骨细胞、骨髓基质细胞、关节滑膜细胞、椎间盘髓核细胞及成纤维细胞等，适用于骨折愈合、脊柱融合、骨质疏松及类风湿性关节炎等骨病的基因治疗。结论 腺病毒介导的基因治疗可望为骨创伤、骨病的治疗提供新的途径。     

膝十字韧带移植重建术中韧带末端缝合固定的生物力学研究及临床应用

膝十字韧带移植重建术中韧带末端缝合固定的生物力学研究及临床应用[张春礼 ,范宏斌 ,李明全 ,王　臻 ,王海强 ,刘继中 ,李新奎 .中华骨科杂志 ,2 0 0 2 ;2 2 (12 ) :735 - 737]　　目的 :研究膝十字韧带移植重建术中韧带末端缝合固定的方法及固定强度 .方法 :将 2 4条带髌骨的髌韧带标本分为 3组 ,对其末端分别采用Ｋｒａｃｋｏｗ双锁边缝合法缝合 2针、3针 ,缝合材料为Ｅｔｈｉｌｏｎ缝线及直径 0 .4ｍｍ钢丝 ,对样本分别进行拉伸力学检测以比较强度 ,探讨最佳的缝合针数和方法并应用于临床 .结果 :Ｋｒａｃｋｏｗ双锁边缝合法缝合 2针 ,…     

人 BMP2和 OPG共表达真核载体的构建与骨质疏松基因治疗相关性的研究

Boneisadynamictissue，thelevelofbonemassreflectsthebalanceofboneformationandresorption，whichinvolvesthecoor－dinateregulationofbone－formingcells（osteoblasts）andbone－resorbingcell（osteoclasts）．Avarietyoflocalgrowthfactorsandcytokinesaswellassystemicpeptideandsteroidhormonesregulatethedifferentiationofimmatureprecursorcellsandtheactivityofmaturecellsinboththeosteoblasticandtheosteoclasticlineage，suchasbonemorphogeneticprotein－２（BMP－２）andosteoprotegenin（OPG）犤１犦．Inaddition，…     

恶性骨肿瘤术后免疫联合治疗对免疫状态的影响及其无瘤生存影响意义

 目的　探讨手术后的恶性骨肿瘤患者经自体瘤苗及TF联合免疫治疗对T4 T8值影响作用 ,研究T4 T8值变化和免疫综合治疗对无瘤生存率的影响。方法　抗人T细胞OKT系统OKT4 、OKT8检测T4 T8值 ,自体瘤苗的转移因子分别皮内注射和皮下注射 ,复查随访无瘤生存率。结果　治疗使无瘤生存率提高 ,使T4 T8值升高 ,而T4 T8值与无瘤生存相关不大。结论　联合免疫治疗提高无瘤生存率 ,可提高整体免疫水平 ,而整体免疫水平无显著变化者也有显著无瘤生存率。提示手术后免疫联合治疗恶性肿瘤的作用主要是特异性抗瘤免疫的激活及敏感性升高 ,这种效应即使在较低的宏观整体免疫水平下也可起作用。     

人护骨素-谷胱甘肽转硫酶融合蛋白基因的构建与表达

目的 克隆人护骨素(OPG)成熟肽段编码区基因并研究在大肠杆菌中OPG-谷胱甘肽转硫酶(GST)的融合蛋白的表达。方法 采用RT-PCR从人骨肉瘤细胞系MG63的总RNA中扩增OPG成熟肽段编码区cDNA，构建原核表达载体pGEX-4T-1，转化大肠杆菌后经0．1mmoL／L异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后收集菌体蛋白，以SDS—PAGE电泳及Western印迹鉴定蛋白表达，应用谷胱甘肽-Sepharose4B柱亲和层析纯化目的蛋白。结果 获得人OPG成熟肽段编码区cDNA，转化菌株可表达人OPG-GST融合蛋白，蛋白表达量约为菌体总蛋白的15．5％。Western印迹表明在相对分子质量66000处融合蛋白能与人OPG多克隆抗体特异性结合。经亲和层析后获得纯度为95．7％的OPG—GST融合蛋白。结论 获得人OPG成熟肽段全长cDNA，在大肠杆菌中表达OPG—GST融合蛋白并以亲和层析法进行纯化。     

异体骨关节移植修复肢体大段骨缺损的内固定选择

目的 :对肢体恶性肿瘤患者接受同种大段异体骨关节移植的不同内固定方法进行评价。方法 :87例患者应用不同内固定方式行深低温冷冻异体骨关节移植 ,平均随访 35 .5个月。结果 :不同内固定方式术后骨不连的发生率不同 ,而骨愈合时间无显著差别 ;与内锁髓内钉和异体骨段复合人工关节相比 ,应用加压钢板和自制内锁髓内钉的患者术后更易发生与内固定相关的并发症 (χ2 =9.6 9,P <0 .0 1) ,但两组患者术后肢体功能差异不显著 (χ2 =2 .99,P >0 .0 5 )。结论 :内锁髓内钉、异体骨段复合人工关节置换术固定牢固 ,结果总评优于普通自制内锁髓内钉和加压钢板。     

重组异种骨二次免疫的实验研究

目的：研究重组异种骨（ＲＢＸ）重复植入动物体内引起的二次免疫应答及其对成骨活性的影响。方法：将ＲＢＸ间隔不同时间重复植入雄性Ｂａｌｂ／ｃ小鼠股部肌肉内，通过ＥＬＩＳＡ测定体液免疫水平，检测局部组织的碱性磷酸酶（ＡＬＰ）活性反映成骨情况。结果：ＲＢＸ第１次植入后，血清中可检测到特异性抗体；局部组织中的ＡＬＰ活性略低于正常小鼠骨骼。间隔３周或６周再次植入ＲＢＸ，血清中特异性抗体水平明显增高（Ｐ＜０．０５）；ＡＬＰ活性降低（Ｐ＜０．０１）。结论：重复植入ＲＢＸ可诱发机体产生免疫应答；ＲＢＸ诱导成骨活性受到抑制，成骨作用延迟。     

骶骨肿瘤切除后腰骶关节稳定性重建中 USS钉棒系统的应用

TheapplicationofUSS（universalspinalsystem）screw－podssys－temandfixationofdistalscrewintheiliacplanewhichcanprovidesupportforinternalfixationcanimprovewellreconstructionoflum－bar－sacrumjoint，restorepelvicring，preventlumbarvertebrade－creaseandpromotepostoperativeearlyweightloadingandactivity．５patientswithlumbar－sacrumtumorhadacceptedthetreatmentfromFeb．２０００toAug．２００１，andrecenteffectsweresatisfactory．１Subjectandmethods１．１SubjectAgroupof５patients（aged３４to６０averag…     

骨保护素对破骨细胞分化和骨吸收活性的抑制作用

背景骨保护素(osteoprotegerin,OPG)可抑制破骨细胞的分化,抑制成熟破骨细胞的骨吸收活性并诱导其凋亡,在骨质疏松、类风湿性关节炎、癌症骨转移的领域有潜在的应用价值.目的鉴定在CHO细胞中表达的人骨保护素生物学活性.设计随机对照的实验研究.地点和对象实验在解放军第四军医大学西京医院骨科研究所完成,研究对象人骨肉瘤细胞株MG63、中国仓鼠CHO细胞株、克隆质粒pUC19及真核表达质粒pcDNA3为本室保存,12只6～8周龄BABL/c雄性小鼠由本校动物中心提供.干预RT-PCR法获得人OPG编码区cDNA并构建真核表达载体,在脂质体介导下转染CHO细胞,经Western blot鉴定筛选稳定表达OPG的细胞系.获取含有OPG蛋白的条件培养基浓缩液,实验组体外培养的鼠破骨细胞培养基中加入含有OPG蛋白的条件培养基浓缩液.对照组1只加入转染pcDNA3空载体的CHO细胞培养基的浓缩液.对照组2只加入完全培养基.主要观察指标观察人OPG对破骨细胞的分化和骨吸收的影响.结果转染人OPG编码区基因的CHO细胞能分泌表达OPG.小鼠骨髓细胞在1α,25(OH)2D3(1×10-8mol/L)的存在下可稳定分化出具有骨吸收功能的破骨细胞样细胞,在该培养体系中加入含有OPG的CHO细胞培养上清浓缩液,TRAP染色阳性细胞数明显减少(t=5.547,P＜0.01),骨吸收陷窝的数量显著减少(t=3.409,P＜0.01).结论人骨保护素可在CHO细胞中分泌表达,并对体外培养状态下的破骨细胞的分化和骨吸收功能有抑制作用.     

6His-hEra融合蛋白的高效表达

目的 :在原核表达系统中对人Era基因进行表达。方法 :人era编码区基因克隆入pUC19质粒中 ,经全自动序列分析仪测序正确后 ,再克隆入表达载体pRSETB中 ,构建成融合 6个组氨酸的高效表达载体pRSETB Era ,转化大肠杆菌BL2 1DE3(plysS)诱导表达。结果 :经IPTG诱导后 4h ,SDS PAGE及凝胶密度扫描分析 ,表达出分子量约 4 1kD的蛋白 ,占菌体总蛋白的 5 1 2 %。结论 :该基因在大肠杆菌中的高效表达为人era的功能研究打下了基础。