单链探针反向杂交试验技术检测结核分支杆菌链霉素耐药基因

[目的]建立同时检测结核分支杆菌链霉素耐药基因突变的单链探针反向杂交试验技术(PCR-LiPA),同时从分子水平分析结核分支杆菌链霉素耐药性表型与耐药基因rpsL、rrs突变的相关性,评价单链探针反向杂交技术检测结核分支杆菌链霉素耐药性的应用价值.[方法]采集临床标本,按照实验规程培养、鉴定结核分支杆菌,并对分离到的结核分支杆菌进行药敏试验;PCR扩增结核分支杆菌rpsL、rrs耐药基因,单链探针反向杂交试验技术检测耐药基因.将PCR-LiPA方法结果与DNA测序比较验证方法的准确性,将PCR-LiPA方法结果与药敏结果比较.[结果]50株结核分支杆菌传统药物敏感性试验结果显示,15株耐SM.PCR-LiPA方法分析分析结果:耐SM菌株中7株rpsL基因突变、SM敏感株1株rpsl基因突变,rrs基因未发现突变;与DNA测序结果的符合率为100%.[结论]用PCR-LiPA可简便、快速、灵敏、特异地检测出一部分结核分支杆菌链霉素耐药株的rpsL、rrs基因突变,可作为临床结核分支杆菌链霉素耐药性的辅助诊断手段.     

氢气对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用及研究进展

肝脏缺血再灌注损伤是肝脏手术过程中常见的、多因素参与的病理生理变化,可产生氧自由基,损伤肝细胞超微结构,影响肝脏的功能,是导致肝脏外科患者术后肝功能衰竭甚至死亡的主要原因。因此,如何减轻或防治肝脏缺血再灌注损伤是目前肝脏外科研究的热点,然而到目前为止尚没有可以治疗肝脏缺血再灌注损伤的有效方法。     

缺血性脑血管病介入诊治医生的系统培养

缺血性脑血管病的介入诊断及治疗是近年来神经病学发展最快的领域之一。怎样培养合格的神经介入医师是能否成功开展这一工作的关键。建立系统工程的观念、在教学中采用任务驱动法、案例教学法等先进教学方法能够有效地解决缺血性脑血管病介入诊治医生系统培养中存在的主要问题。     

EPEC的分离鉴定及耐药性分析

肠致病性大肠埃希氏菌(ＥＰＥＣ)是引起婴幼儿腹泻的主要病原菌[1],但引起食物中毒的报道较少。1996年1月、1999年3月在深圳市龙岗区共发生了两起由ＥＰＥＣ所致的集体性成人细菌性腹泻。从流行病学调查分析表明均系食源性的细菌性食物中毒。其临床症状基本一致:呕吐、腹痛、腹胀、腹泻、水样便、微发烧、潜伏期为2～10小时。经对症治疗全部康复,无死亡病例。从两起病人粪便标本中分别分离到Ｏ125:Ｋ70、Ｏ44:Ｋ74二种型别3株ＥＰＥＣ。现将实验结果报告如下。1　材料与方法11　标本来源　分别采集两起典型急性腹泻病人大便标本各5份及10份…     

细菌性食物中毒的病原学分析

目的：快速准确地分析细菌性食物中毒的原因和不同菌株之间的相关性。方法：对分离的9株副溶血性弧菌和3株产毒大肠埃希菌进行生化分型，并抽取6株副溶血性弧菌和3株产毒性大肠埃希菌进行脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析。结果：9株副溶血性弧菌的生化相同，血清学分型同是K29型；3株产毒性大肠埃希菌的生化相同，血清学分型同是O20型；其中抽取的6株副溶血性弧菌的DNA指纹图谱相同，3株产毒性大肠埃希菌DNA指纹图谱相同，提示了不同菌株之间有密切相关性。结论：这是一起由副溶血性弧菌K29型和产毒性大肠埃希菌020型引起的混合型食物中毒。     

食品中大肠埃希菌整合子与耐药性的关系研究

目的：研究食品中大肠埃希菌的整合子携带情况及其与耐药性之间的关系。方法：PCR检测细菌总DNA中1、2、3类整合酶基因，确定细菌携带整合子的情况。阳性菌株进一步检测整合子的可变区，分析插入基因盒的序列。结果：50株大肠杆菌中19株携带1类整合子，2株携带2类整合子，集中分布在对4种以上抗生素耐药的菌株中。插入基因盒主要是dfr和aadA类基因盒，各种基因盒组合中最常见的是dfr17-aadA5。结论：细菌的多重耐药性与整合子携带高度一致，但是单个菌株的耐药谱与整合子的耐药基因盒缺乏对应关系。     

食品中沙门菌整合子与耐药性关系研究

目的：研究食品中沙门菌的整合子携带情况及整合子与耐药性之间的关系。方法：PCR检测细菌总DNA中1、2、3类整合酶基因，确定细菌携带整合子的情况。整合子阳性菌档进一步检测整合子的可变区，分析插入基因盒的序列。结果：69株大肠菌中25株携带1类整合子，集中分布在对4种以上抗生素耐药的菌株中。插入基因盒主要是dfr(甲氧苄氨嘧啶)和aadA(氨基糖甙类)基因盒，各种基因盒组合中最常见的是difrl—aadA1。结论：细菌的多重耐药性与整合子携带高度一致，但是单个菌株的耐药谱与整合子的耐药基因盒缺乏对应关系。     

臭氧消毒机对空气微生物消毒效果试验观察

目的：探讨臭氧消毒机的机器性能和消毒灭菌效果。方法：按卫生部《消毒技术规范》、‘紫外分光光度法测定空气中臭氧含量’测定，开机不同时间实验室内臭氧浓度及关机后臭氧残留浓度，臭氧消毒机对试验菌的杀灭效果。结果：臭氧消毒机开机30min实验室内臭氧浓度达到8．28mg／m^3，开机30min、45min对空气中白色葡萄球菌气溶胶的平均杀灭率分别为99．96％、100％；现场试验中开机2h，对空气中自然菌的平均消亡率可达96．．48％，该机消毒效果可靠。结论：臭氧消毒机是一种高效、安全、可靠、广泛适用的医疗消毒器械。     

BPDE—DNA加合物体外生成实验研究

目的：探讨体外合成苯并（a）芘与DNA形成加合物的条件.方法：以一定比例混合苯并（a）芘丙酮溶液、DNA溶液、S9混合液、于37℃孵育24 h后,紫外分光光度计扫描DNA图谱,得出DNA结构改变的信息;同时用HPLC检测反应体系中的苯并（a）芘含量、苯并（a）芘代谢物及DNA加合物酸水解后的产物.确定BPDE-DNA加合物生成,质谱验证生成物的结构.结果：反应后DNA紫外最大吸收峰红移;HPLC检测发现孵育后反应体系中苯并（a）芘含量降低,反应管有新的物质生成;质谱分析生成物的分子量同于目标产物.结论：一定条件下体外可合成苯并（a）芘-DNA加合物.     

食品中大肠埃希氏菌、沙门氏菌整合子的耐药性水平传递研究

探讨整合子在细菌耐药性的获得及传递中的作用。方法 :采用膜接合试验。结果 :菌株之间的接合频率在 1 0 - 1～ 1 0 - 5之间。结论 :整合子可发生水平传递 ,同时整合子可捕获或丢失基因盒 ,造成耐药基因的水平播散。