HLA-A*0201与EGFP融合蛋白表达载体的构建及其在K562细胞的表达和定位

目的:构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)与HLA-A^*0201(A^*0201)融合蛋白哺乳动物细胞表达载体,分析其在K562细胞中的表达和亚细胞定位。方法:以RT-PCR方法克隆A^*0201cDNA,构建A^*0201-EGFP融合蛋白表达载体,转染K562细胞,以流式细胞仪和激光共聚焦显微镜分析融合蛋白的表达及其亚细胞定位。结果:从两个HLA-A2阳性供者外周血细胞中克隆到A^*0201cDNA编码区全长序列。通过PCR方法在起始位点前加入Kozak序列并删除终止密码,成功构建A^*0201-EGFP融合蛋白表达载体。以该质粒转染K562细胞,5h后A^*0201和EGFP的表达百分率分别为25.12±2.26、27.37±3.59,24h后表达水平无明显提高。表达的融合蛋白主要分布于细胞膜上,胞内分布较少。相反,转染空载体的细胞不表达A^*0201分子,仅表达EGFP,且其在细胞内呈弥散样分布。结论:成功构建A^*0201-EGFP融合蛋白表达载体,并在K562细胞中得到表达,表达产物主要分布于细胞膜表面,提示表达该融合蛋白的K562细胞是潜在的人工抗原提呈细胞。     

重组FN多肽CH50抑制黑色素瘤B16细胞体内转移的研究

目的研究重组纤黏连蛋白(FN)多肽CH50对小鼠黑色素瘤B16细胞体内转移的影响,以探讨CH50多肽抑制肿瘤转移的可能分子机制。方法体外培养黑色素瘤B16细胞,用荧光染料CFSE标记,接种脾脏后24h取脾、肝、肺做冰冻切片,观察肿瘤细胞在3种组织中的侵袭情况。从脾脏接种B16细胞,建立体内肿瘤转移动物模型,采用基于流体动力学的体内基因转染方法于小鼠体内表达CH50多肽,RT-PCR检测CH50 mRNA在肝组织的表达,Western印迹检测CH50多肽的表达。通过比较原位肿瘤结节及转移结节在数量、大小、分布上的差异及检测原位肿瘤组织中MMP-2、MMP-9表达差异,观察CH50多肽的治疗效果。结果注射24h后即可在脾脏形成荧光结节。pCH510质粒通过尾静脉注射后,可在肝组织中检测到CH50 mRNA及CH50多肽的表达。从脾脏接种B16细胞后第14天可在脾脏形成原发肿瘤,至第35天肝脏表面已形成转移瘤结节,成功建立了体内器官间(脾转肝)肿瘤转移动物模型。体内转染表达CH50多肽能抑制肿瘤生长、侵袭和转移,抑制原位肿瘤结节中MMP-2、MMP-9的表达。结论CH50多肽可以通过对MMP-2、MMP-9蛋白表达的抑制作用来抑制黑色素瘤B16细胞的成瘤能力和体内侵袭、转移能力。     

PD-L2剪切异构体与EGFP融合蛋白的表达及其亚细胞定位研究

目的　探讨PD L2的剪切异构体在哺乳动物细胞的表达和亚细胞定位。方法　以RT PCR方法克隆人PD L2基因的常规剪切体和新型剪切异构体的cDNA ,构建其与EGFP融合的表达载体 ,分别转染K5 6 2细胞进行表达 ,经抗PD L2抗体染色后以流式细胞仪和激光共聚焦显微镜分析融合蛋白的表达及其亚细胞定位。结果　从活化的人白细胞中克隆到常规剪切体PD L2Ⅰ和新型剪切异构体PD L2Ⅱ的cDNA ,后者删除了编码胞外区Ig C结构域的外显子 3。进而构建了PD L2Ⅰ EGFP和PD L2Ⅱ EGFP融合蛋白表达载体 ,分别转染K5 6 2细胞。流式细胞仪分析显示 ,转染前者的细胞中既可检测到EGFP的表达又可在细胞膜上检测到PD L2表达 ;而转染后者的细胞中只能检测到EGFP的表达 ,在其细胞膜上不能检测到PD L2表达。共聚焦显微镜观察显示 ,PD L2Ⅰ EGFP主要分布于细胞膜表面 ,PD L2Ⅱ EGFP则主要分布于细胞内。结论　常规剪切体PD L2Ⅰ能正确定位于细胞膜表面 ,而新型剪切异构体PD L2Ⅱ则位于细胞内 ,不能运输至细胞膜 ,提示不同PD L2剪切异构体可能与其功能的调变有关     

足内侧皮瓣的应用解剖

解剖观测了30侧成人下肢足内侧区皮肤血管.足底内侧动脉深支、浅支、内踝前动脉和跗内侧动脉,分别发4.5(3～8)支、7.4(3～12)支、5.9(2～12)支和2.8(1～6)支,外径在0.2～0.8mm之间的皮支分布足内侧区,动脉间吻合恒定.经选择性动脉注射显示,皮瓣面积约为9×6cm～10×8cm.以上述动脉为蒂的足内侧皮瓣,可转位修复内踝、跟腱、足跟和足底远侧区的软组织缺损,临床应用了12例均获得成功.     

医防融合背景下基层卫生技术人员的培训现状和相关知识需求调查

目的 调查5省基层卫生技术人员医防融合相关培训状况以及相关知识能力的需求状况,为完善我国基层医防融合建设,提高基层卫生服务机构防病治病能力提供参考建议。方法 对五个省15个区县的乡镇卫生院和社区卫生服务中心（站）的卫生技术人员进行分层抽样问卷调查,对调查数据进行描述并对各种医防融合相关知识能力需求进行单因素χ²检验和多因素logistic分析。结果 76.0%的基层卫生技术人员近一年参加过培训,乡镇卫生院卫生技术人员培训参与率（73.2%）低于社区卫生服务中心（站）（84.3%）（χ²= 83.812,P＜0.001）,不同特征基层卫生技术人员培训参与率不同（P＜0.01）。各类培训参与率均低于相关知识技能的需求率,公共卫生相关知识技能的需求率最高。χ²检验和多因素logistic分析显示不同特征基层卫生技术人员对各类知识技能的需求率不同:相对于社区卫生服务中心（站）,乡镇卫生院人员对传染病防控技能（OR = 0.756,95%CI:0.666～0.858）和一般病与常见病诊疗技能（OR = 0.860,95%CI:0.762～0.971）的需求程度更高;临床医疗岗位人员对传染病防控技能及一般病与常见病诊疗技能、的需求程度更高（P＜0.001）;年轻人员对慢病管理与病因监测技能的需求更高（OR = 0.937,95%CI:0.885～0.992）;公共卫生岗位人员（OR = 1.346,95%CI:1.114～1.626）和专职管理岗位人员（OR = 2.334,95%CI:1.707～3.191）对信息化技能的需求程度更高。结论 应以需求为导向,加强基层卫生技术人员的培训强度,提升培训内容和知识技能需求的匹配程度,建立完善医防交叉培训机制和医防能力兼备的复合型人才培养供给体系。     

医防融合背景下我国基层医疗卫生机构医防工作现状及认知调查

目的 通过调查我国5省基层卫生人员医防工作的参与情况与对开展医防融合工作的认知现状, 探讨目前基层医防融合工作存在的问题,为促进基层医疗卫生机构医防融合工作提供参考依据。方法 采用多阶段分层抽样,根据地域方位差异分别抽取四川、贵州、江西、江苏和广东5个省,再依据经济状况每省选取3个区县,共15个区县的乡镇卫生院和社区卫生服务中心(站)的卫生人员(6 439名)进行问卷调查与访谈, 对调查数据进行描述并对医防融合工作参与情况与认知现状进行检验。结果 从事公共卫生工作的958名卫生人员中,仅有292人(30.5%)同时参与公共卫生服务与医疗服务,有615人(64.2%)只参与公共卫生服务; 51.7%的公共卫生工作人员以独立公共卫生服务的方式参与基本卫生服务。从事公共卫生工作的卫生人员主要以护理学和临床医学专业为主,仅15.6%的人员具有预防医学专业背景。从事临床医疗工作的1 964名人员中,1 464人(74.5%)医疗服务与公卫服务均参与,但对基本公共卫生服务的投入时间相对较少。不同岗位的卫生人员参与医防工作的情况不同(=2 208.874,P<0.001)。结论 基层临床医疗工作与公共卫生工作机制相对独立。公共卫生工作人员因缺乏疾病诊断治疗能力或无处方权而不能很好地参与到临床医疗工作中; 临床医疗工作人员因缺乏公共卫生知识和技能对公共卫生服务的参与受限。 建议整合医防融合服务机制,打造基层整合型服务; 培养基层医防复合型人才,加大全科医生培养力度。     

珍珠风

别名:珍珠柳、鲤鱼下子。基原:马鞭草科灌木植物珍珠风Callicarpa bodinieri Lévl.的根或枝叶。生长环境:山坡林地或山地。云南分布:全省各地。性味:辛、平。功效:活血通经,祛风胜湿。主治:月经不调、崩漏、带下、产后瘀血腹痛、外感风寒、风湿疼痛。用法:水煎或浸酒服,10~15g。研末调麻油外用,治带状疱疹、皮肤瘙痒。别名:珍珠柳、鲤鱼下子。基原:马鞭草科灌木植物珍珠风Callicarpa bodinieri Lévl.的根或枝叶。生长环境:山坡林地或山地。云南分布:全省各地。性味:辛、平。功效:活血通经,祛风胜湿。主治:月经不调、崩漏、带下、产后瘀血腹痛、外感风寒、风湿疼痛。用法:水煎或浸酒服,10~15g。     

鹦鹉热衣原体肺炎患者临床特点分析

 目的 探讨分析鹦鹉热衣原体肺炎患者的临床表现及辅助检查结果特征,以提高对该病的认识。方法 回顾性分析某医院2019年6月- 2021年8月经宏基因组二代测序（mNGS）诊断鹦鹉热衣原体肺炎的9例患者临床资料。结果 9例患者中男性7例,女性2 例,包含1例妊娠36⁺²周孕妇;年龄25~70岁,中位年龄63岁;临床主要表现为高热（9例）、咳嗽（9例）、咳痰（7例）。白细胞计数正常8例,淋巴细胞计数降低9例,CRP升高9例,ESR升高9例,PCT正常4例,门冬氨酸氨基转移酶和丙氨酸氨基转移酶升高6例。9例患者胸部 CT均表现为斑片或斑片实变影。经血及肺泡灌洗液mNGS确诊后使用多西环素、莫西沙星、左氧氟沙星、阿奇霉素单药治疗方案,疗程14~21 d,均好转出院。结论 鹦鹉热衣原体肺炎临床表现多样、诊断困难,mNGS检测可以快速明确病原学诊断,有助于及时启动特异性抗感染治疗,可减少抗菌药物的使用,改善预后。     

中药配合高压氧治疗高粘滞血症98例

高粘滞血症是心脑血管疾病的高危因素之一,近年来笔者运用中药配合高压氧（ＨＢＯ）治疗本病,疗效满意。现报告如下。１ 临床资料 本组９８例均为住院病人,其中男６７例,女３１例;年龄３７岁～７０岁,平均５５．４岁。其中原发性高血压病者３３例,缺血性脑血管疾病者２４例,缺血性心脏病者２３例,糖尿病（Ⅱ型）１８例。高血压病人血压控制在２１,３／１３．３ｋＰａ以下,所有病例均无ＨＢＯ禁忌症。２ 治疗方法 口服通脉活血汤（自拟方）：桃仁、红花、苏木、地龙、桂枝各１０ｇ,丹参、黄芪各３０ｇ,赤芍１５ｇ,水蛭３ｇ,土…     

肾上腺偶发瘤18例临床分析

目的：提高肾上腺偶发瘤的诊治水平。方法：报告18例并结合文献讨论其不宜被早期发现的原因,潜在的手术危险性,及需警惕恶性病变等临床特点,结果：采用影像学,细针穿刺活检等方法诊断,除2例肿瘤无法切除外,共余均行手术切除,病理证实：皮质癌4例,其余均为良性病变,结论：对大于3cm的肿瘤需采取外科手术治疗,小于3cm的肿瘤可密切随访,根据其生物学行为采取不同的处理方法。