肝心康对肝纤维化大鼠血清学指标及TGF-β1的影响

目的:观察肝心康对实验性肝纤维化的作用.方法:用40%四氯化碳复合因素皮下注射致大鼠肝纤维化模型,肝心康治疗结束,断头取血分离血清,检测肝功能、血清透明质酸(HA)、层粘连蛋白;分离肝组织,用免疫组化方法检测肝组织内转换生长因子β1(TGF-β1)的表达.结果:肝心康能明显降低肝纤维化大鼠的转氨酶,增加肝脏对白蛋白的合成,降低肝纤维化血清学指标,抑制TFF-β1的表达.结论:肝心康具有保肝及抗肝纤维化作用,其作用机理可能和抑制TFF-β1的合成表达有关.     

肝心康抗肝纤维化的临床疗效观察

目的:观察肝心康对慢性肝炎患者血清肝纤维化指标的影响.方法:60例慢性肝炎患者,用药前抽血检测肝纤维化标志物HA、LN、PLD、pCIII、pCIV,口服肝心康胶囊0.75克/日治疗3个月,治疗结束时采血再次检测肝纤维化血清标志物.结果:治疗前后比较,血清HA、LN、pCIII、pCIV有明显降低,患者肝区不适等症状得到改善.结论:肝心康能改善慢性肝炎患者肝纤维血清学指标.     

人肝再生增强因子单克隆抗体的制备:以非纯化的大肠杆菌表达抗原筛选杂交瘤

目的 :利用杂交瘤技术、以非纯化的大肠杆菌表达重组蛋白作为筛选抗原 ,制备小鼠抗人肝再生增强因子(hALR)的单克隆抗体。方法 :用实验室纯化的重组hALR 硫氧环蛋白融合蛋白免疫BALB c小鼠 ;小鼠脾细胞与SP2 0骨髓瘤细胞融合后经HAT选择培养基筛选杂交瘤 ;以重组质粒pQE30 hALR与空质粒pQE30在大肠杆菌中诱导表达后的细菌裂解产物作为筛选抗原和对照抗原 ,用ELISA方法筛选能分泌抗hALR单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞克隆 ;进一步以ELISA方法和免疫印迹方法检测该杂交瘤细胞产生的抗体对真核细胞表达的重组hALR及人体血清中天然hALR的反应性。结果 :成功筛选出一株能稳定分泌抗hALR单克隆抗体的杂交瘤细胞 ;其产生的抗体能对真核细胞表达的重组hALR及人体血清中天然的hALR发生特异的抗原抗体反应。结论 :大肠杆菌表达的重组蛋白在以空质粒表达产物作为对照下 ,不经过任何纯化步骤也能够用于单克隆抗体制备中的杂交瘤筛选 ;hALR单克隆抗体为深入研究hALR提供了研究手段。     

5种多房棘球绦虫续绦期幼虫的制备RNA方法比较及长片段DNART-PCR扩增方法研究

目的探讨从多房棘球绦虫续绦期幼虫制备RNA的最佳方法,研究逆转录PCR扩增DNA长片段目的基因的方法。方法应用改良的琼脂糖核酸电泳方法和RT-PCR技术比较观察了5种商品化RNA/mRNA提取试剂/试剂盒用于提取多房棘球绦虫续绦期幼虫RNA的效果;用琼脂糖凝胶电泳方法观察比较了不同的DNA聚合酶用于RT-PCR扩增长片段EMⅡ/3(1.72kb)和EM10(1.76kb)的效果。结果总RNA提取试剂盒(RNeasyTotalRNAKit)提取的多房棘球绦虫续绦期幼虫RNA电泳显示出清晰的28S、18SrRNA条带和弥散于0.8kb至20kb之间未降解的mRNA,是唯一能逆转录扩增出单一目的条带的核酸提取物。TaqDNA聚合酶与高保真DNA聚合酶Pfu的混合制剂TaqPlus应用于RT-PCR可扩增出大量1720bp和1760bp单一目的基因。结论总RNA提取试剂盒(RNeasyTotalRNAKit)对多房棘球绦虫续绦期幼虫RNA的提取效果最好;TaqPlus适合用于RT-PCR扩增长片段目的基因。     

超声微泡造影剂对心肌组织的生物学效应及介导VEGF基因转染大鼠心肌的实验研究

目的 探讨超声微泡造影剂对心肌组织的生物学效应及其介导VEGF基因转染大鼠心肌的有效性。方法 18只健康雄性Wistar大鼠，取3只采用超声波在鼠胸壁破坏微泡造影剂，观察对心肌组织显微结构的影响。将另15只急性心肌梗死3天后的雄性Wistar大鼠分为3组，每组5只。第一组采用超声破坏微泡造影剂的方式，将pcDzVEGFm基因转染大鼠心肌至造影剂不再显影(约6min)；第二组尾静脉输入同等剂量携pcD。VEGF。基因的造影剂；第三组为对照。2周后，取缺血心肌组织行VEGF免疫组织化学染色，观察心肌组织血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达情况。结果超声波破坏微泡造影剂能使心肌组织充血，产生大量空泡，并有部分心肌细胞坏死。采用超声微泡造影剂介导的VEGF基因转染，能明显增强大鼠心肌组织VEGF蛋白的表达。结论 超声微泡造影剂能明显增强对组织的空化效应，其介导的VEGF基因治疗是一种无创、新型、高效的基因转移方法。     

FK506对淋巴细胞趋化反应的影响

通过研究ＦＫ５０６在体外对人淋巴细胞趋化反应的影响。发现在ＦＫ５０６的浓度为０．５ｎｇ／ｍｌ时，对蛋－亮－脯氨酸甲酯多肽（ＦＭＬｐ－ＭＥ）、酵母多糖激活血清（ＺＡＳ）和趋化性胆汁（ｃｈｅｍｏｔａｃｔｉｃｂｉｌｅ，ＣＢ）引起的淋巴细胞趋化反应的抑制率分别为４７．３％、３２．２％和４８．９％；对经ＰｈｏｒｂｏｌＭｙｒｉｓｔａｔｅＡｃｅｔａｔｅ（ＴＰＡ）激活的淋巴细胞，ＦＫ５０６的抑制作用更强，抑制率分别达７１．２％、５５．４％和６９．６％。ＦＫ５０６也抑制ＴＰＡ激活的淋巴细胞产生趋化因子。比较经不同处理的淋巴细胞培养上清液引起的白细胞趋化反应，发现ＴＰＡ组与ＴＰＡ＋ＦＫ５０６组间存在显著性差异（淋巴细胞趋化反应Ｐ＜０．００１、单核吞噬细胞Ｐ＜０．０００５、中性粒细胞Ｐ＜０．０００５），而对未激活的淋巴细胞产生趋化因子无影响。可见对淋巴细胞趋化反应的抑制可能是ＦＫ５０６作用的一种方式。     

乙酰半胱氨酸注射液对40例慢性乙型肝炎的临床疗效观察

目的:对乙酰半胱氨酸(NAC)注射液治疗慢性乙型肝炎重度的疗效进行评估.方法:选择慢性乙型肝炎重度的住院病人40例,采用随机、双盲、平行对照的临床试验,治疗前做常规体检,B超、心电图等检查;给药方案:乙酰半胱氨酸8g/d,静脉滴注,疗程45天,同时配合基础综合治疗,并于用药前、用药后15天、30天、45天分别抽血检查肝功能、凝血酶原时间、肾功生化、血常规等检查.结果:揭盲后A组(治疗组)20例;B组(对照组)20例,脱落6例(A组2例,B组4例),乙酰半胱氨酸能显著降低血清TBIL、DBIL、ALT、AST,A组的凝血酶原活动度改善情况明显优于B组.结论:乙酰半胱氨酸能明显减低患者血清总胆红素、转氨酶,改善凝血酶原活动度,试验过程中病人耐受性好,没有严重的不良反应,主要不良反应为恶心、呕吐等消化道症状,但坚持用药2～3天后消失,1例出现皮肤过敏反应停药后好转.     

重组人肝再生增强因子原核表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达

目的 用聚合酶链反应法（ＰＣＲ）和基因重组技术构建重组人肝再生增强因子原核表达载体并在大肠杆菌中进行表达。方法 利用ＰＣＲ方法从我们构建的ＰＵＣ１９－ｈＡＬＲ质粒中扩增出带ＮｄｅⅠ和ＢａｍＨⅠ酶切位点的ｈＡＬＲ编码区ＤＮＡ。ＰＣＲ产物和质粒ｐＥＴ１１ａ分别被相应内切酶消化,然后被Ｔ４ ＤＮＡ连接酶连接以获取重组表达质粒。重组表达质粒ｐＥＴ１１ａ－ｈＡＬＲ经电转化入大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中,在Ｉ     

肝窦内皮细胞与免疫耐受

肝脏似乎是一个免疫耐受多于免疫原性的器官．众多的肝脏组成细胞中许多参与肝脏免疫调节,如肝血窦内皮细胞(LSEC)．LSEC是定居在肝脏肝血窦的细胞,与经过肝脏的淋巴细胞直接作用,有大量的清道夫受体,能有效摄取抗原．LSEC处理抗原后以MHC限制性呈递给CD4T或者CD8T细胞．与LSEC作用的CD4T, CD8T细胞产生耐受性,是LSEC在肝脏重要的免疫功能:对循环中的可溶性抗原或口服抗原控制了免疫应答的类型．     

ALR基因RNA干扰慢病毒表达载体的构建及其在肝癌细胞中对ALR表达的抑制

目的：构建肝再生增强因子（augmenter of liver regeneration,ALR）基因RNA干扰（RNA interference,RNAi）慢病毒载体,并检测其对人肝癌细胞株HepG2和QGY中ALR基因表达的干扰效率。方法：针对ALR基因RNAi的有效靶序列,合成靶序列的OligoDNA,退火形成双链DNA,与经HpaⅠ和XhoⅠ双酶切线性化的GV118慢病毒载体连接产生LV-ALR-shRNA重组慢病毒载体,经转化感受态细胞后筛选出阳性克隆,并进行测序鉴定。用293T细胞包装产生慢病毒,逐孔稀释法测定病毒滴度。再将包装浓缩后的慢病毒转染人肝癌细胞株HepG2和QGY,应用Real-time PCR和Western blot方法检测HepG2和QGY细胞中ALR基因mRNA和蛋白的表达情况。结果：酶切鉴定证实成功构建了针对人ALR基因的RNAi慢病毒载体,包装并浓缩慢病毒,病毒滴度为 8E+8TU/ml。将病毒感染人肝癌细胞株HepG2和QGY后,2种细胞的干扰组ALR的mRNA表达水平较阴性对照组及空白对照组均明显下降（HepG2细胞,P干扰组vs. 阴性病毒对照组=0.004,P干扰组vs. 空白对照组=0.001;QGY细胞,P干扰组vs. 阴性病毒对照组=0.005,P干扰组vs. 空白对照组=0.001）,同样,干扰组ALR在蛋白水平的表达也明显减降低。结论：成功构建ALR基因RNAi慢病毒载体,该载体能有效干扰人肝癌细胞株HepG2和QGY中ALR基因的表达。