瞬时弹性波扫描仪检查在慢性乙型肝炎肝纤维化患者中的应用

目的:评价瞬时弹性波扫描仪( Fibroscan)检查同血清学、影像学检查在评估慢性乙型肝炎患者肝纤维化及肝硬化程度中的应用.方法:用Fibroscan对1 006例慢性乙型肝炎及肝硬化患者进行多次系列肝脏硬度测量.由同一操作者对每位检测者进行检查,连续取10个检测值,取其中位数为最终检测值;并在24 h内同时行血清纤...     

丙酮酸乙酯抑制LPS诱导RAW264.7巨噬细胞HMGB1的表达

目的:探讨丙酮酸乙酯(EP)抑制脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞高迁移族率蛋白B1 (HMGB1)的表达及分子机制.方法:培养小鼠巨噬细胞株RAW264.7,分为LPS( 100 ng/mL)组及LPS( 100 ng/mL)+EP(5 mmol/L)组,刺激后0、6、12、18、24、30、36 h提取总RNA及胞质胞核蛋白,用RT-PCR法测细胞培养液中HMGB1 mRNA 表达;用Western blot测胞质和胞核HMGB1蛋白含量;用ELISA法测培养上清中HMGB1、TNF-α和IL-6的含量;用免疫细胞化学共聚焦显微镜观察细胞内HMGB1的转位分布.结果:LPS+EP组HMGB1 mRNA基因表达于24、36、48 h比LPS组明显减少;Western blot结果示,LPS+ EP组HMGB1蛋白含量胞质明显低于LPS组,而胞核明显高于LPS组;ELISA结果示,LPS+EP组细胞培养上清中HMGB1、TNF-α和IL-6的含量明显低于LPS组;免疫荧光、激光共聚焦显微镜结果示,LPS+ EP组细胞质内绿色荧光染色明显弱于LPS组,细胞核内绿色荧光染色明显强于LPS组.结论:EP能有效抑制LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞HMGB1的表达和释放.     

新生大鼠肝细胞的分离纯化及冻存条件分析

研究针对当前采用非灌注法消化肝细胞的不足加以改进，同时探索肝细胞的最佳冻存、复苏条件，评价冻存细胞作为供者细胞的可行性，为今后临床应用时出现供者细胞短缺提供解决办法。     

肝再生增强因子在抗-Thy1.1肾炎大鼠肾组织中的表达及变化

肝再生增强因子(augmenterofliverregeneration,ALR)是从大鼠肝组织中克隆的促肝细胞增殖因子。ALR在正常人和大鼠几乎所有的器官组织都有表达,其中肾组织的表达量较高,仅次于肝脏和睾丸。最近我们的研究发现,重组大鼠ALR(rrALR)能明显促进大鼠系膜细胞的增殖以及TGF-β的分泌犤1犦。我们拟通过本研究进一步了解它在抗-Thy1.1肾炎大鼠肾组织中的表达部位、表达水平的改变及其与病变的关系。一、材料与方法1.兔抗大鼠胸腺细胞血清(ATS)的制备:6～8周龄健康雄性Wistar大鼠,体重150～200g,健康雄性新西兰大白兔,体重2.0～2.5kg(均购自…     

还原型谷胱甘肽对大鼠慢性肝损伤的保护作用

目的：观察还原型谷胱甘肽(GSH)对实验性慢性肝损伤的保护作用。方法：用四氯化碳致大鼠慢性肝损伤模型，GSH分别采用灌胃及腹腔注射两个途径给药，剂量分别为1．25g／kg、0．5g／kg、0．2g／kg及0．4g／kg、0．1g／kg、0．025g／kg，实验结束时采血检测ALT、AST、白蛋白等，并解剖动物分离肝脏，作肝病理形态、纤维化分级及Ⅰ型胶原免疫组化观察。结果：GSH灌胃及腹腔注射给药组的ALT、AST水平较模型组明显为低。病理形态观察发现，GSH能使肝细胞肿胀及脂肪变性程度明显减轻，抑制纤维组织的增生及Ⅰ型胶原的表达。结论：GSH对四氯化碳所致的慢性肝损伤有明显的保护作用，为其临床府用提供了药理学基础。     

二甲双胍对胰岛素抵抗大鼠脂肪肝的影响

目的探讨二甲双胍对胰岛素抵抗大鼠脂肪肝的影响。方法雄性wistar大鼠31只，随机分为正常组（n=8）和实验组（n=23）。正常组普通饮食，实验组高脂饮食，8周末从实验组中随机抽取7只证实造模成功。实验组再分为二甲双胍组（n=8）和模型对照组（n=8），6周后，胰岛素敏感性用正常血糖高胰岛素钳夹技术稳态时的葡萄糖输注率来评价；氨基转移酶、甘油三酯（TG）、游离脂肪酸（FFA）等以生物化学方法测定；胰岛素和肿瘤坏死因子α（TNFα）分别用放射免疫法和酶联免疫吸附法测定；肝细胞脂肪变性和肝脏的炎症程度在光学显微镜下评估。结果与模型对照组相比，二甲双胍组大鼠胰岛素抵抗明显改善，肝指数、附睾脂肪比重、体重明显下降，氨基转移酶、TG、FFA、TNFα明显降低，肝细胞脂肪变性和肝脏炎症情况有不同程度的改善。结论二甲双胍能够明显改善高脂饲养诱发脂肪肝大鼠的胰岛素抵抗和肝脏组织学，它可能成为治疗脂肪肝的新药物。     

ALRsiRNA慢病毒载体最佳干扰序列的筛选及构建

目的筛选并构建肝再生增强因子(ALR)基因的最佳RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒表达载体,为研究ALR基因表达下调后对肝癌细胞生物学特性的影响提供依据。方法针对ALR基因序列设计并合成4个siRNA靶点,酶切连接GV118-GFP载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定;在包含ALR基因的质粒中以PCR法扩增出ALR基因,克隆至慢病毒载体GV143,构建ALR基因的过表达质粒,将RNAi重组慢病毒载体和ALR的基因表达质粒共转染293T细胞,用western blot检测其对目的基因ALR的敲减效率。结果酶切鉴定证实成功构建了ALR RNAi慢病毒载体及ALR基因过表达载体。不同浓度干扰质粒(0.4μg和0.8μg)的western blot结果显示,相较于阴性对照组,KD1组ALR蛋白的表达水平(0.51±0.02,0.36±0.09)、KD2组ALR蛋白的表达水平(0.65±0.04,0.49±0.02)、KD3组ALR蛋白的表达水平(0.62±0.07,0.52±0.02)均降低(P均0.05),而以KD1组蛋白表达量最低。结论成功筛选并构建了能有效沉默ALR基因的最佳RNAi重组慢病毒载体,为后续实验奠定基础。     

乙酰半胱氨酸注射液对40例慢性乙型肝炎的临床疗效观察

目的:对乙酰半胱氨酸(NAC)注射液治疗慢性乙型肝炎重度的疗效进行评估.方法:选择慢性乙型肝炎重度的住院病人40例,采用随机、双盲、平行对照的临床试验,治疗前做常规体检,B超、心电图等检查;给药方案:乙酰半胱氨酸8g/d,静脉滴注,疗程45天,同时配合基础综合治疗,并于用药前、用药后15天、30天、45天分别抽血检查肝功能、凝血酶原时间、肾功生化、血常规等检查.结果:揭盲后A组(治疗组)20例;B组(对照组)20例,脱落6例(A组2例,B组4例),乙酰半胱氨酸能显著降低血清TBIL、DBIL、ALT、AST,A组的凝血酶原活动度改善情况明显优于B组.结论:乙酰半胱氨酸能明显减低患者血清总胆红素、转氨酶,改善凝血酶原活动度,试验过程中病人耐受性好,没有严重的不良反应,主要不良反应为恶心、呕吐等消化道症状,但坚持用药2～3天后消失,1例出现皮肤过敏反应停药后好转.     

利用5′-RACE技术进行人肝再生增强因子相互作用肽cDNA5′末端快速扩增及序列分析

目的：利用5′-RACE技术进行人肝再生增强因子（hALR）相互作用肽cDNA5′末端快速扩增并进行序列分析。方法：按照5′-RACE试剂盒（Takara）操作流程进行hALR相互作用肽cDNA5′-末端快速扩增，用BLAST技术对扩增序列进行生物信息学分析。结果：成功获取487bp的5′-RACE反应产物，其中5′端延伸了275bp，同源序列分析表明与人Citron激酶mRNA高度同源。结论：5′-RACE技术可以用于快速有效扩增已知部分cDNA序列的5′末端，Citron激酶可能是与hALR具有相互作用的蛋白。