从人源性噬菌体抗体库中筛选人抗HBsAg的Fab噬菌体抗体(摘要)

目的:从人源性噬菌体抗体库中筛选人抗HBsAg Fab噬菌体抗体。方法:用固相化HBsAg对所构建的噬菌体抗体库进行三轮淘筛,从中筛选人抗HBsAg Fab噬菌体抗体。材料:①SB培养基:每升培养基含细菌培养用胰化蛋白胨30g,酵母提取物20g,Mops 1g,pH7.0。②SOC培养基:每升培养基含细菌培养用胰化蛋白胨20g,酵母提取物5g,NaCl 0.5g,250mmol/L KCl溶液10ml,pH7.0。临用前加入2mol/L MgCl_2溶液5ml和1mol/L葡萄糖溶液20ml。③血源纯化HBsAg。④     

人肝再生增强因子DNA免疫的实验研究

目的:构建人肝再生增强因子()真核表达质粒,免疫家兔,获得抗多抗血清。hALRhALR方法:将已构建的人肝再生增强因子()重组质粒,经扩增,亚克隆入真核表达质粒,构建重hALR PET11-hALRPCR pcDNA3.1 pcDNA3.1-hALR组质粒。中量制备重组质粒及对照质粒,以只免疫家兔,取血并分离血清,进行蛋白质pcDNA3.1-hALR pcDNA3.11.08mg/印迹分析。Western blot结果:构建了真核表达质粒,此重组质粒诱发了家兔抗抗体的产生。pcDNA3.1-hALRhALR结论:说明构建的重组质粒在体内有表达能力,为进一步研究的生物学活性及某些疾病的治疗奠定了基础。 hALR     

柴胡及肝细胞生长刺激物质对人传代肝癌细胞的作用

应用传代人肝癌细胞株(QGY—7703),发现人胎肝细胞生长刺激物质能独立启动人肝癌细胞DNA 增殖;所用中药仅柴胡出现延迟刺激活性,其它药物无类似作用。协同用药亦无明显增强作用.     

重组腺病毒Ad-mALR和Ad-hALR的构建及其对棕榈酸(PA)诱导的L02细胞凋亡的影响

目的 构建含肝再生增强因子(ALR)基因的重组腺病毒并探讨其抗凋亡功能.方法 采用基因重组法构建重组穿梭载体pAdTrack-TO4-mALR和pAdTrack-TO4-hALR,同源重组法构建重组腺病毒Ad-GFP-mALR和Ad-GFP-hALR,4轮扩增后获得高滴度Ad-GFP-mALR和Ad-GFP-hALR.将上述腺病毒感染L02细胞,通过绿色荧光蛋白(GFP)的表达了解其感染率;Western blotting法检测ALR及Bcl-2/Bax蛋白表达;CCK-8法检测细胞增殖活性;流式细胞仪检测ALR对棕榈酸(PA)诱导的L02细胞凋亡的影响.结果 重组腺病毒Ad-GFP-mALR和Ad-GFP-hALR构建成功,且均能高效感染并稳定表达于L02细胞.与非感染组和感染空载病毒组相比,过表达ALR能促进L02细胞的增殖,并抵抗PA诱导的L02细胞凋亡作用,明显降低Bax,增加Bcl-2蛋白的表达.结论 ALR对寸L02细胞具有促增殖及抗PA诱导的细胞凋亡的作用.     

Hyper-IL-6融合基因的构建及在真核细胞中的表达

目的： 构建融合基因Hyper-IL-6并在真核细胞中进行表达.方法： 采用基因拼接（GeneSOEing）法将人类可溶性白细胞介素6受体和白细胞介素6的编码基因用一富含甘氨酸序列的接头经PCR扩增融合, 并定向克隆至pIRES2-EGFP, 构建与绿色荧光蛋白（GFP）共表达的融合重组质粒, 转染哺乳动物细胞, 通过绿色荧光蛋白、 RT-PCR和免疫组化检测Hyper-IL-6蛋白的表达.结果： PCR扩增出1 224 bp的Hyper-IL-6编码序列并成功构建重组质粒pIRES-HIL-6, 重组质粒转染真核细胞后经检测证实Hyper-IL-6能在真核细胞中表达.结论： 人类Hyper-IL-6重组表达质粒的成功构建与真核表达为以后对其进行活性分析和生物学功能的研究提供了基础.     

人抗HBV-前S2抗体轻链基因的克隆及序列分析

目的获得人源性乙型肝炎病毒前Ｓ２抗体轻链基因。方法用人工合成的乙型肝炎病毒前Ｓ２短肽（Ｐｒｅ－Ｓ２,１２０—１４５）,从已构建的人源性噬菌体抗体库中,得到了针对Ｐｒｅ－Ｓ２阳性克隆,经竞争抑制实验证明其特异性和活性,合成一对轻链引物,经ＰＣＲ扩增,亚克隆入质粒ＰＵＣ１８进行序列测定及分析、结果筛选到的阳性克隆具有乙型肝炎病毒前Ｓ２特异性亲和力。构建了ｐＵＣ１８－ Ｐｒｅ－Ｓ２ｋ。轻链重组质粒,序列分析其为人ｋ轻链,包括了完整的恒定区和可变区,大小为 ６４５ ｂｐ。结论利用抗原抗体特异性反应原理,从人源性噬菌体抗体库中筛选到人抗ＨＢＶ前Ｓ２抗体ｋ轻链     

高脂饮食对大鼠脂肪肝胰岛素受体底物1、2表达的影响

目的探讨高脂饮食对大鼠脂肪肝胰岛素受体底物（IRS）1、IRS-2分子表达的影响。方法对8周高脂饲养（n=7）和正常饲养（n=7）大鼠的胰岛素敏感性、脂质代谢、肿瘤坏死因子（TNF）α以及肝脏IRS-1、IRS-2的mRNA和蛋白表达进行检测。结果与正常组比，高脂组大鼠呈现胰岛素抵抗，游离脂肪酸（FFA）和TNF-α增高；肝脏的IRS-1 mRNA和蛋白含量分别降低了28％和32％（P〈0．01），IRS-2mRNA和蛋白含量分别降低了30％和27％（P〈0．01）。结论高脂饮食导致大鼠肝脏IRS-1、IRS-2的mRNA和蛋白含量明显降低，这可能是高脂饮食引起脂肪变肝脏胰岛素抵抗的重要分子机制。     

肝细胞生长素在体外对大鼠肾小球系膜细胞生物活性的影响

目的 观察低分子肝细胞生长素(HPN)对炎症因子刺激下的大鼠肾小球系膜细胞增殖及产生TGFβ的影响。方法 用^3H—TdR掺入法检测肾小球系膜细胞(GMC)增殖变化，用ELISA法检测肾小球系膜细胞培养上清中TGFβ的水平。结果 在无IL-1β存在时，浓度为400u/孔的低分子肝细胞生长素对常规培养的系膜细胞增殖有明显抑制作用(P＜0．01)，而对TGFβ的产生无影响；但它对IL-β刺激下的大鼠系膜细胞增殖和TGFβ产生均有明显抑制作用(均P＜0．01)。低分子肝细胞生长素在100u/孔浓度时无上述作用。结论 高剂量HPN可抑制体外培养的大鼠系膜细胞增殖，降低IL-β刺激系膜细胞产生TGFβ。低分子肝细胞生长素无种属特异性和组织特异性。     

肝再生增强因子在肝癌细胞中的表达及意义

目的研究肝再生增强因子(ALR)对肝癌细胞和原代大鼠肝细胞增殖作用的影响及在肝细胞癌(HCC)中的表达。方法将不同种属的ALR分别与原代大鼠肝细胞和人肝癌细胞株QGY和HepG2共同培养后，用^3H-胸腺嘧啶核苷掺入法测定这些细胞的增殖情况。并应用免疫组织化学法对9例正常肝组织和21例HCC组织中ALR的表达进行了研究。结果不同种属的ALR在体外均能刺激人肝癌细胞株QGY和HepG2增殖，并呈剂量依赖关系，但对原代大鼠肝细胞均无刺激增殖作用。在正常肝组织中ALR不表达，但在HCC肝组织中ALR均表达，且ALR的表达程度与HCC分化程度和大小均无关。结论ALR可能在HCC的发生发展中起着重要作用。     

拉米夫定抑制乙型肝炎病毒X基因的转录与表达

目的 乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白在HBV相关性肝癌的发生中有着重要作用,本研究旨在探讨拉米夫定对HBV X基因复制、转录及表达水平的影响。 方法 用聚合酶链反应法检测拉米夫定对转染X基因复制的影响,用逆转录-聚合酶链反应法检测拉米夫定对转染X基因mRNA的影响,用生物分子相互作用系统检测拉米夫定对X蛋白表达的影响,探讨了拉米夫定作用的量效和时效关系。 结果 拉米夫定组与对照组HBV X基因复制的目的基因条带吸光度(A)值分别是151.4±3.5和144.0±11.4,差异无统计学意义。4.36×104mol/L拉米夫定持续作用24 h能完全抑制X基因的转录,对照组与治疗组(16 h)目的条带的A值分别为243.9±9.0和133.2±7.8,P<0.01,其抑制效应随药物浓度增加和作用时间延长而增强。4.36×104mol/L拉米夫定持续作用16 h,使代表X蛋白表达的最大结合量值从353.3±15.9降至252.3±18.8,P<0.01。结论 拉米夫定不影响HepG2x中转染的X基因复制,但对X基因的转录和蛋白表达有明显抑制作用。