siRNA抑制肝癌细胞甲硫氨酸腺苷转移酶2A基因表达

目的构建siRNA体内表达载体pSilence-2．1-U6-siRNA，筛选出抑制甲硫氨酸腺苷转移酶(MAT)2A表达的有效靶序列，为MAT2A的功能研究奠定了基础。方法以MAT2A为目的基因，以产生siRNA质粒载体pSilence-2．1-U6为表达模板，细胞内转录合成4条siRNA，并构建携带荧光素酶报告基因的重组质粒载体plucF-MAT2A。脂质体转染法将重组质粒载体plucF-MAT2A与产生siRNA的质粒pSilence-2．1-U6共转染293T细胞，定量测量荧光素酶活性，初步筛选出抑制荧光素酶表达的有效siRNA，然后将有效的siRNA转染Bel-7402肝癌细胞，半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测MAT2A mRNA表达，并检测转染后肝癌细胞MAT的活性及细胞凋亡情况，进一步证实siRNA对MAT2A表达的抑制效果。结果所合成的4条小干扰RNA中有2条抑制荧光素酶表达，抑制效率分别为81％和89％，并特异性抑制肝癌细胞MAT2A mRNA表达，降低了肝癌细胞中MAT活性，诱导肝癌细胞凋亡。结论siRNA抑制肝癌细胞MAT2A基因表达。     

胰体尾切除术后胰瘘的防治

目的探讨胰体尾切除术后胰瘘的防治。方法回顾性分析2007年1月至2014年5月间83例行胰体尾切除术病人的术前基本资料、术中操作及术后治疗等临床资料,对其中并发胰瘘的19例病人临床资料进行分析。结果行胰体尾切除术的83例病人中,术后并发胰瘘19例,发生率为22．9％,16例经保守治疗痊愈,有效率为84．2％,2例病人行放射治疗后治愈,1例死亡,死亡率为1．2％。单纯缝扎和切割闭合器处理胰腺断端后胰瘘发生率分别为21．6％和23．9％。结论胰体尾切除术后胰瘘的发生率仍然很高,术中正确处理胰腺断端及加强术后管理是预防胰体尾切除术后胰瘘的关键。胰瘘的治疗在于通畅引流、加强营养支持,并积极寻找新的治疗方法。     

罕见原发性肝肉瘤一例报告并文献复习

目的提高对原发性肝肉瘤(PHS)的认识,减少临床误诊误治。方法结合1例PHS病人的临床资料分析及文献复习,探讨PHS的病因、临床表现、诊断、鉴别诊断及治疗方法。结果鉴于临床表现、放射学检查和血液检查缺乏特异性,原发性肝恶性间质肿瘤与肝细胞癌之间的鉴别诊断极为困难,只能通过组织学检查和免疫组织化学明确诊断。结论遇到肝脏占位性病变,应当引起临床医师的更深入的思考,并且新的PHS诊断标志物仍需进一步研究。     

MAT2A siRNA对荷瘤鼠肝癌细胞生长的影响

目的探讨MAT2A小干扰RNA对荷瘤鼠肝癌细胞生长和细胞凋亡的影响。方法采用脂质体转染法将MAT2A小干扰RNA质粒表达载体转染人肝癌细胞系Bel-7402细胞，建立持续转录小干扰RNA的细胞系，并将该细胞系皮下接种裸鼠，观察肿瘤生长情况；为进一步观察裸鼠体内抑瘤性，将皮下接种稳定表达小干扰RNA的Bel-7402细胞系的裸鼠分为三组：A、盐水对照组，B、空质粒对照组，C、siRNA治疗组；于接种后第12天，每组动物行纯化质粒DNA瘤内注射，观察肿瘤大小；治疗后2周，处死所有动物，取肿瘤，测量大小；部分石蜡包埋切片、HE染色，部分进行凋亡检测。结果得到稳定转染siRNA载体、并能持续表达siRNA的Bel-7402细胞系，将稳定建系的细胞传代，持续表达siRNA细胞系肿瘤细胞生长明显缓慢。皮下接种建系的Bel-7402细胞建立荷瘤鼠模型，可以观察到siRNA组肿瘤生长缓慢，平均第13天才长出皮下可及、但肉眼看不到的肿瘤，而接种control siRNA组，平均第9天可长出肉眼可见的肿瘤；用裸鼠肿瘤模型观察siRNA的体内抑瘤效果，质粒DNA注射后，对照组瘤体10．93mm^3，空质粒对照组为11．13mm^3，而siRNA质粒转染组为4．26mm^3（P〈0.01）；HE染色显示，对照组和空质粒组质粒DNA注射后，病灶充满肿瘤细胞；而siRNA组质粒DNA注射后，病灶内有大量炎性细胞浸润，坏死明显，仅见少量肿瘤细胞；且siRNA明显诱导荷瘤鼠肝癌细胞凋亡，其凋亡指数为（28．79±2．13）％，较盐水对照组（9．54±1．89）％和空质粒治疗组（10．24±2．06）％明显升高（t=15．41，P〈0．01）。结论靶向MAT2A基因的siRNA诱导荷瘤鼠肝癌细胞凋亡，抑制肝癌细胞生长。     

老年人胆道再次手术处理体会（附34例报告）

目的 探讨老年人再次胆道手术的综合处理办法.方法 分析2002年6月-2008年6月收治的34例60岁以上胆道再次手术的临床资料.结果 急症再次胆道手术11例(32.4%).主要原因是初次胆道术后胆漏、感染.择期再次胆道手术23例(67.6%),主要原因是胆总管残留或结石复发.术后并发症主要有手术部位感染、肺炎、肺不张、心功能衰竭、腹腔感染等.结论 在处理老年患者再次手术问题时要注意以下几点:①再次手术时术前正确估计病情,充分认识胆道疾患的复杂性和难治性,并作详尽的辅助检查,以减少手术盲目性;②采取合理的手术方式,尽可能彻底根治疾病;③重视老年患者并存病的围手术期处理,重视术后并发症的处理.     

生长激素联合低热量肠外营养在消化道肿瘤术后的应用

目的　探讨消化道肿瘤术后重组人生长激素(r-hGH)联合低热量肠外营养(HPN)的安全性、有效性及对预后的影响。方法　将消化道肿瘤患者 100 例双盲、随机分为受试组和对照组,受试组术后给予HPN 6 d,同时皮下注射 r hGH 7 d,对照组接受传统全胃肠外营养治疗 6 d;对比观察术后两组血浆蛋白水平、氮平衡、免疫功能状况、感染有关并发症、住院时间、术后生存率和复发率。结果　在进行6 d的HPN以后,两组患者生命体征、血常规、肝肾功能、血脂和全身不良反应差异均无统计学意义;术后第7天,受试组蛋白水平恢复至术前水平,IgG、IgA、IgM和CD3、CD4 下降不明显(P>0.05);对照组术后第10天蛋白水平才恢复至术前水平,IgG、IgM、CD3 和CD4 下降明显(P<0.05);术后第 7、10天,对照组前清蛋白、转铁蛋白、纤维连接蛋白浓度、IgG、IgM、CD3 和CD4 均显著低于受试组;受试组氮平衡明显优于对照组,术后第7天受试组恢复为正氮平衡,而对照组直到术后第10 天仍为负氮平衡;术后住院时间,受试组显著低于对照组(P<0.05);术后1、2和3年生存率、复发率两组患者差异无统计学意义(P>0.05)。结论　对于能手术切除的消化道肿瘤,术后短期合理剂量使用 r hGH联合HPN是安全、有效的,有利于患者术后的恢复。     

半肝血流阻断法与Pringle法在肝切除术应用中安全性与有效性比较的Meta分析

目的系统评价半肝血流阻断法与Pringle法在肝切除应用中的安全性和有效性。方法计算机检索h e Cochrane Library(2013年第8期)、PubMed、EMbase、CBM、CNKI、VIP和WanFang Data,查找所有比较半肝血流阻断术与Pringle法应用于肝切除的随机对照试验(RCT),检索时限均为从建库至2013年8月。同时追溯纳入研究的参考文献。由2名研究者根据纳入与排除标准独立筛选文献、提取资料并评价纳入研究的方法学质量后,采用RevMan 5.2软件进行Meta分析。结果最终纳入7个RCT,包括624例患者。结果显示:①手术安全性方面:Pringle法的手术时间少于半肝血流阻断法[SMD=0.34,95%CI(0.02,0.66),P=0.04],但两者术中失血量、术中输血需求比、住院时间、手术并发症等指标无明显差异。②有效性方面:半肝血流阻断法的术后第3天ALT水平[SMD=–0.71,95%CI(–1.28,–0.14),P=0.02]、第7天ALT水平[SMD=–1.73,95%CI(–2.85,–0.62),P=0.002]、第1天AST水平[SMD=–0.74,95%CI(–1.38,–0.09),P=0.03]、第7天AST水平[SMD=–0.99,95%CI(–1.26,–0.71),P<0.000 01]、第3天TBIL水平[SMD=–0.34,95%CI(–0.57,–0.10),P=0.005]及第7天TBIL水平[SMD=–0.52,95%CI(–1.02,–0.01),P=0.04]均低于Pringle法。结论与Pringle法相比,半肝血流阻断法在减轻肝脏缺血再灌注损伤以及促进肝切除患者术后肝功能恢复方面更好。因纳入研究的数量及样本量较少,且受质量限制,一些主要的测量指标报道过少,缺乏足够的信息进行分析,所以上述结论仍需开展大样本、多中心、高质量的RCT进一步验证。     

新辅助治疗联合盆腔脏器切除术治疗复发直肠癌

目的探讨新辅助治疗联合盆腔脏器切除术对复发直肠癌的临床治疗价值。方法对35例复发直肠癌患者,采用新辅助治疗方案。常规分次放疗,放疗总剂量(DT)46Gy,每周5次,每次2Gy。全身化疗2个疗程,每次予以奥沙利铂130mg/m2,第1天静脉点滴;甲酰四氢叶酸钙(CF)200mg/m2,第1~3天静脉点滴;氟脲嘧啶(5-Fu)500mg/m2,第1~3天静脉点滴。治疗结束后4~6周进行盆腔脏器切除手术。结果经新辅助治疗后,病理完全缓解6例,肿瘤平均缩小38.4%,65.7%的病例T期下降。全组无手术死亡,R0切除率为88.5%,手术并发症发生率为13.3%。本组总的3年生存率为82.8%;5年生存率为48.5%;其中获得R0切除的患者,3年生存率为90.3%,5年生存率为54.6%。结论新辅助治疗联合盆腔脏器切除术是治疗复发直肠癌的有效方法。通过降低肿瘤病期,提高手术切除率,从而提高患者生存率。     

不平衡氨基酸对荷瘤宿主营养状况及生存时间的影响

比较几种不平衡氨基酸营养支持对荷瘤宿主营养状况及生存时间的影响。以荷 Walker- 2 5 6癌肉瘤 SD大鼠为研究对象 ,空肠喂饲肠外营养制剂 10天。据所喂饲肠外营养制剂中氨基酸组成的不同 ,分为 A组 (平衡氨基酸组 )、B组 (增量精氨酸不平衡氨基酸组 )、C组 (去蛋氨酸不平衡氨基酸组 )、D组 (去缬氨酸不平衡氨基酸组 )、E组 (增量精氨酸、去蛋氨酸、去缬氨酸不平衡氨基酸组 )。宿主体重变化、血清转铁蛋白浓度作为衡量宿主营养状况的指标 ,并观察宿主生存时间。结果 :1B、C、D、E组与 A组相比较 ,宿主体重减轻 ,血清转铁蛋白浓度均明…     

靶向甲硫氨酸腺苷转移酶2A基因小干扰RNA抑制肝癌细胞生长的研究

目的研究靶向甲硫氨酸腺苷转移酶(MAT)2A基因的小干扰RNA(siRNA)对肝癌细胞生长和细胞凋亡的影响。方法以MAT 2A为目的基因,以产生siRNA质粒载体pSilence-2.1-U6为表达模板,细胞内转录合成4条siRNA;并构建携带荧光素酶报告基因的重组质粒载体plucA-MAT 2A。脂质体转染法将重组质粒载体plucA-MAT 2A与产生siRNA的质粒pSilence-2.1-U6共转染293 T细胞,定量检测荧光素酶活性,初步筛选出抑制荧光素酶表达的有效siRNA,然后将有效的siRNA转染Bel-7402肝癌细胞,半定量逆转录聚合酶链反应检测MAT 2A mRNA表达,并检测转染后肝癌细胞MAT的活性,进一步采用四甲基偶氮唑盐法观察siRNA对肝癌细胞生长的抑制率,用流式细胞仪检测siRNA对肝癌细胞凋亡的影响。结果所合成的4条siRNA中有2条抑制荧光素酶表达,抑制效率分别为81%和89%,并特异性抑制肝癌细胞MAT 2A表达,降低了肝癌细胞中MAT活性,抑制肝癌细胞的生长,诱导肝癌细胞凋亡。结论靶向MAT 2A基因的siRNA抑制肝癌细胞生长,诱导肝癌细胞凋亡;MAT 2A是肝癌基因治疗的一个很有希望的靶位点。