纤溶酶原激活物抑制剂-1(4G/5G)基因多态性与深静脉血栓事件的风险概率

目的分析我国西北地区纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)(4G/5G)基因在不同人群中的分布情况,以及不同基因型患者血栓事件的发生率,为携带PAI-1(4G/5G)基因4G型的手术患者提供数据支持和用药指导。方法收集1 494例行基因位点检测人群血液样本,使用荧光探针原位杂交技术检测PAI-1(4G/5G)基因位点,分析我国西北地区PAI-1(4G/5G)基因在体检健康者、剖腹产患者、烧伤患者、心脑血管疾病患者之间4G基因型的差异性。结果 336例体检健康者中5G5G(野生型)78例(23.21%),4G5G(杂合突变型)152例(45.24%),4G4G(纯合突变型)106例(31.55%)。401例剖腹产患者中5G5G(野生型)60例(14.96%),4G5G(杂合突变型)195例(48.63%),4G4G(纯合突变型)146例(36.41%)。603例烧伤患者中5G5G(野生型)100例(16.58%),4G5G(杂合突变型)295例(48.93%),4G4G(纯合突变型)208例(34.49%)。154例心脑血管疾病患者中5G5G(野生型)21例(13.64%),4G5G(杂合突变型)81例(52.59%),4G4G(纯合突变型)52例(33.77%)。剖腹产患者、烧伤患者、心脑血管疾病患者PAI-1(4G/5G)基因4G型携带率与体检健康人群间的差异均有统计学意义(P0.05)。追踪观察200例烧伤手术患者,患病后2个月内有139例(69.5%)发生深静脉血栓事件,4G4G基因型血栓事件为86.49%(64/74),4G5G基因型血栓事件为65.00%(52/82),5G5G基因型血栓事件为50.00%(23/46),不同基因型深静脉血栓事件发生率的差异有统计学意义(P0.01)。结论通过分析PAI-1(4G/5G)基因在不同人群中的分布以及发生血栓事件的发生率,可预防或降低手术患者发生静脉血栓、脑卒中等的风险。     

蛇毒类凝血酶制剂与肝毒性药物对血浆纤维蛋白原水平的影响分析

目的 探讨临床上两种常用蛇毒类凝血酶制剂与两种肝毒性药物在用药前后对纤维蛋白原(FIB)水平的影响.方法 选择2018年10月31日至2020年10月31日空军军医大学附属西京医院收治的200例FIB水平降低(<1.5 g/L)的住院患者为研究对象.将使用蛇毒类凝血酶制剂(白眉蛇毒血凝酶、巴曲酶)的70例患者设为有产物组,使用肝毒性药物[丙戊酸(VAP)、培门冬酶(PEG-ASP)]的130例患者设为无产物组.分别于患者使用药物治疗前后检测常规凝血6项指标的水平变化.结果 有产物组中的泌尿外科患者其FIB、D二聚体(D-Dimer)、纤维蛋白/纤维蛋白原降解产物(FDP)水平在未手术未使用白眉蛇毒血凝酶治疗前与手术后、用药治疗后比较,差异有统计学意义(P<0.05).耳鼻喉科患者的FIB与FDP水平在使用巴曲酶治疗前后比较差异有统计学意义(P<0.05).无产物组中的神经科患者在使用VAP治疗前后的FIB水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);血液科患者在使用PEG-ASP治疗前后的FIB水平比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 FIB水平在使用该4种药物前后的显著差异变化可以为临床提供用药指导参考,避免导致严重低纤维蛋白血症引起的出血风险.     

SARS-CoV-2实验室核酸检测要点

严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)可引起新型冠状病毒肺炎(COVID-19),目前已在全世界广泛流行.作为SARS-CoV-2的确诊方法 ,实时荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)核酸检测成为广受关注的热点技术.文章针对SARS-CoV-2的生物学特性,核酸检测的原理、意义、条件、防护以及结果 判读...     

念珠菌类细菌样变异株基因特征初步研究

目的在对念珠菌发生变异后其形态、结构等生物学性状研究的基础上,进一步探讨念珠菌类细菌样变异株基因特征。方法在低温、营养缺乏条件下诱导白色念珠菌标准菌株使其变异;用不同浓度梯度的氟康唑等临床常用抗真菌药物诱导白色念珠菌标准菌株变异。采用煮沸法制备真菌基因模板,采用细菌保守基因16SRNA序列引物和真菌保守基因18SRNA序列引物分别扩增16SRNA和18SRNA序列,琼脂糖凝胶电泳,观察并记录结果。同时将细菌保守基因16S RNA扩增片段进行测序,所得序列进行BLAST比对分析。结果念珠菌类细菌样变异株16SRNA序列均扩增阳性,而白色念珠菌标准株未出现相应的扩增条带。念珠菌类细菌样变异株18SRNA序列扩增除2号菌株有微弱的条带外,其余变异株均未扩增出目的条带,而白色念珠菌标准株则出现相应的扩增条带,表明念珠菌类细菌样变异株基因组中18S RNA序列所占比例不多或是因多次传代遗失。念珠菌类细菌样变异株16SRNA扩增片段经纯化后进行DNA序列测定,BLAST进行比对分析,发现念珠菌类细菌样变异株序列与数据库中细菌序列有较高的相似性。结论念珠菌类细菌样变异株基因组含有细菌保守基因及少量真菌保守基因,具有原核生物学性状的念珠菌类细菌样变异株是源于真核生物的念珠菌。此研究在生物进化特别是在原核细胞与真核细胞的进化联系上有非常重要的意义。     

针对S基因的siRNA抑制HepG2 2.2.15细胞中HBV基因的表达

目的 构建针对乙型肝炎病毒（HBV）S基因的siRNA（short interfering RNA）表达载体pSUPER-S1和pSUPER-S2,观察其对HepG2 2.2.15细胞中的HBV基因表达的影响.方法 设计并合成针对HBV S区基因的siRNA寡核苷酸,经退火形成双链后克隆入pSUPER载体,构建成功的siRNA表达载体与pTK-Hyg质粒共转染稳定表达HBV的HepG2 2.2.15细胞,经200μg/ml潮霉素抗性筛选,4周后获得稳定细胞克隆,对所得细胞培养上清中的HBsAg和HBeAg进行定量检测,免疫荧光染色检测细胞内抗原的表达,同时用RT-PCR检测靶基因mRNA的抑制效果.结果 成功构建了针对HBV S基因的siRNA表达载体pSUPER-S1和pSUPER-S2,两种siRNA均能明显抑制HepG2 2.2.15细胞的HBsAg和HBeAg分泌,抑制率分别为83%和78%,免疫荧光染色显示siRNA能抑制细胞内抗原的合成,RT-PCR结果证实HBV的mRNA表达降低,而无关序列的siRNA和对照则无此作用.结论 载体产生的针对HBV S基因的siRNA能稳定、高效、特异地抑制HBV基因的表达.     

结核杆菌T细胞斑点试验在克罗恩病与肠结核鉴别诊断中的应用价值

目的 评价结核杆菌T细胞斑点试验(T-spot.TB)在克罗恩病(CD)与肠结核鉴别诊断中的价值.方法 采集2010年5月至2010年10月第四军医大学西京医院126例患者的外周静脉血标本,密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,根据试剂盒说明书操作步骤进行T-spot.TB.结合临床表现、影像学、内镜、病理检查、其他实验室检查及对经验性抗结核治疗的反应作出CD及肠结核的临床诊断.分析T-spot.TB诊断CD和肠结核的敏感度与特异度.结果 确诊CD患者15例[11.9％(15/126)],肠结核患者14例[11.1％(14/126)],肠外结核患者40例[31.7％(40/126)].CD、肠结核、肠外结核、其他疾病患者T-spot.TB阳性率分别为1/15、12/14、70％(28/40)、0％(0/57),各组间差异有统计学意义(P=0.00).CD与肠结核者的T-spot.TB阳性率间差异有统计学意义(x2=70.58,P=0.00).T-spot.TB检测CD的敏感度和特异度分别为93.3％(14/15)和87.5％(14/16),检测肠结核时则分别为85.7％(12/14)和93.3％(14/15),CD的阴性预测值[87.5％(14/16)]高于肠结核的阴性预测值[12.5％(2/16)].结论 T-spot.TB检测有助于鉴别诊断CD与肠结核.     

耐多药结核分枝杆菌双组份系统反应调节子表达的研究

目的 检测MTB耐多药菌株和敏感菌株的TCS反应调节子的表达水平,以筛选出与MTB耐药相关的TCS。方法将7H9肉汤培养至对数生长期的MTB进行总RNA的提取和纯度鉴定;然后进行反转录,利用SYBR Green I实时荧光定量PCR方法检测MTB的TCS反应调节子表达水平,以筛查出在耐多药菌株和敏感株中差异表达的TCS反应调节子。检测1NH、SM和LFA压力下这些差异表达的TCS反应调节子的表达水平。结果 与敏感菌株相比,在耐多药菌株中Rv0491、Rv3133c、Rv3143和Rv3246c分别上调表达1.03、7.11、3.48和1.37倍,差异有统计学意义（t或t'=5.623、-4.196、-3.559、-3.016,P＜0.01）。而其余反应调节子的表达在耐多药菌株和敏感菌株之间差异均无统计学意义。在抗生素压力下,Rv1027c、Rv3246c和Rv3143的表达明显升高,Rv0491和Rv3133c则变化不明显。结论Rv3246c和Rv3143的差异表达可能是MTB耐药的重要机制之一,可为新型抗结核药物的研制提供理论依据。     

聚合酶链反应检测单纯疱疹病毒感染

0　引言　单纯疱疹病毒 (HSV)有两个血清型 :HSV- 1和HSV- 2 ,流行于全世界 .近年来 ,HSV在性传播疾病 (STD)和妇幼保健、优生优育方面已受到高度重视 .目前 HSV感染的检验诊断技术有病毒培养、免疫荧光 (IF)、酶联免疫吸附试验(EL ISA)以及 PCR等 .我们依据 HSV基因的特异性保守区设计三条引物 ,建立了分型检测 HSV基因的 PCR方法 .1　材料和方法　 P1为上游通用型引物 ,P2为 HSV - 1特异性引物 ,P3为 HSV- 2特异性引物 ,由上海生工公司合成 .序列分别为 :P15′- ATG GTG AAC ATC GAC ATG TAC GG- 3′P2 5′-…     

RNA干扰技术抗乙型肝炎病毒的实验研究进展

目前对乙型肝炎病毒(HBV)引起的病毒性肝炎尚无令人满意的治疗效果。RNA干扰技术的出现，为各类慢性HBV感染的治疗开辟了新的途径。作者主要从RNA干扰技术的研究背景、实验中存在的问题和应用前景等方面对其抗HBV的研究进展进行综述。     

F5基因复合杂合变异导致遗传性凝血因子Ⅴ缺陷症的家系分析

目的对1个遗传性凝血因子Ⅴ(FⅤ)缺陷症家系进行基因变异分析, 探讨其分子发病机制。方法先证者, 女, 32岁, 自幼易鼻出血, 通常自愈, 2021年3月10日因摔伤致膝盖血肿到空军军医大学第一附属医院就诊。其家系成员均表示无出血等相关病史。采用凝固法检测凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)和凝血因子Ⅴ活性(FⅤ:C)。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测FⅤ抗原(FⅤ:Ag)。采用Sanger测序法测定F5基因所有外显子及侧翼序列。采用ClustalX-2.1-win、PolyPhen-2及Swiss-PdbViewer软件分析错义变异位点的保守性、是否有害及其对蛋白质结构及功能的影响。采用MutationTaster及NetGene2软件分析剪切变异是否有害及其对剪切位点的影响。结果先证者PT和APTT延长为24.0 s和69.8 s, FⅤ:C和FⅤ:Ag分别降低为6%和9%;其F5基因存在复合杂合变异, 分别为6号外显子c.911G>A杂合错义变异, 导致p.Gly276Glu变异;15号内含子c.5208+1G>A杂合错义变异。先证者父亲和女...