针对尿激酶型纤溶酶原激活剂的siRNA的载体构建与表达

目的:构建针对尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)mRNA的siRNA的表达载体,并观察其对转染细胞中的uPA表达的抑制作用. 方法:化学合成用于产生针对uPA的发卡状RNA的寡核苷酸,各64个碱基,退火后插入线性化的pSUPER载体的H1启动子下游. 重组载体经限制性酶切和测序. 把构建的载体转染乳腺癌细胞系MDA-MB 231,观察其对uPA的干扰作用. 结果:限制性酶切和序列测定表明成功构建了可以表达针对uPA的发卡状RNA表达载体,该载体表达的发卡状RNA能够有效的下调uPA的表达. 结论:成功的构建了针对uPA的发卡状RNA表达载体,为进一步研究uPA的功能和肿瘤的基因治疗打下基础.     

联合抗菌药物对产AmpC酶鲍曼不动杆菌的应用性研究

目的 了解抗菌药物对产AmpC酶鲍曼不动杆菌(ABA)的耐药性以及抗菌药物对ABA的体外联合抗菌活性,为临床治疗产AmpC酶ABA提供合理用药的实验依据.方法 常规培养分离细菌,应用VITEK-Ⅱ全自动细菌分析仪鉴定细菌.常规药敏试验采用K-B纸片法,MIC测定采用琼脂平板倍比稀释法,按CLSI规定标准进行.结果 75株ABA产AmpC酶的阳性率为42.67%,其中产质粒型AmpC酶的占41.33%,产诱导型AmpC酶的占29.33%;产酶菌株中质粒型AmpC酶的占96.88%,产诱导型AmpC酶的占68.75%,同时产诱导型和质粒型AmpC酶的阳性率占59.38%.产酶菌株对亚胺培南(IPM)、美罗培南(MEM)、多粘菌素B(PL)B的抑菌率分别为84.38%、87.5%和90.63%;阿米卡星联合哌拉西林/他唑巴坦(TZP)、头孢哌酮/舒巴坦(SCF)的协同作用分别为40.63%、34.38%.结论 临床对产AmpC酶ABA引起的感染,应慎用碳青霉烯类药物(如IPM或MEM等),建议使用含酶抑制剂复合药物(如TZP或SCF)联合AMK或PLB或米诺环素来治疗,以有效的控制感染和防止耐药株在医院内感染的扩散.     

青敷膏外敷配合频谱照射治疗急性软组织损伤43例临床观察

2009年3～12月,我们采取敷膏外敷配合频谱照射对43例不同程度急性软组织损伤的患者进行治疗,效果满意.现报告如下. 1 资料与方法     

5种结核分枝杆菌Rpf样蛋白的活性鉴定及促生长作用

目的探讨结核分枝杆菌5种Rpf样蛋白(RpfA、RpfB、RpfC、RpfD、RpfE)的生物学活性及其促生长作用。方法根据GenBank中结核分枝杆菌H37Rv基因组核酸序列分别设计5种Rpf样蛋白特异性引物序列,采用PCR技术扩增目的片段,克隆、表达及纯化结核分枝杆菌的5种Rpf样蛋白,应用获得的Rpf样蛋白对藤黄微球菌、BCG和结核分枝杆菌标准菌株H37Rv的促生长活性观察。结果成功获得了纯化的五种Rpf重组蛋白,其浓度分别为374.76μg/mL、300μg/mL、116.27μg/mL、306.9μg/mL、349.8μg/mL;促生长效果观察,其中RpfC无明显的促生长活性,RpfE的促生长活性最明显;A、B和D均有一定程度的促进这三种菌生长增殖的作用。结论Rpf样蛋白具有促进结核分枝杆菌增殖的作用,有可能成为一种新型的培养基添加剂,为结核菌的快速培养及相关研究奠定基础。     

FBN1基因c.4336G>A突变导致35号外显子缺失可能引发马方综合征

目的探究1例马方综合征家系的遗传学病因及检出突变c.4336G>A对原纤维蛋白-1(FBN1)基因剪接效应的影响。方法对2019年8月就诊于空军军医大学西京医院心血管外科的1例胸主动脉夹层动脉瘤患者, 采用多重PCR联合二代测序技术对其进行遗传性主动脉疾病相关的15个基因的组合检测, 应用Sanger测序技术对检出位点进行验证并对部分家庭成员进行同一位点的检测。通过剪接预测软件预测该突变位点对剪接的影响, 并提取正常人及患者新鲜外周血中RNA, 通过逆转录PCR及Sanger测序, 验证突变对剪接过程的影响。根据美国医学遗传学与基因组学学会(ACMG)遗传变异分类标准与指南分析检出位点的致病性。结果基因组合检测结果显示先证者携带有FBN1基因杂合变异c.4336G>A, Sanger测序结果与二代测序结果一致。Sanger测序对部分家庭成员检测发现, 该家系中还存在4名携带者, 其中3例已出现胸主动脉瘤或夹层的表现;dbscSNV_ada_score 和dbscSNV_rf_score预测检出位...     

志贺菌、沙门菌和霍乱弧菌多重PCR快速检测体系的建立

目的 建立快速检测志贺菌、沙门菌和霍乱弧菌的多重PCR方法.方法 根据志贺菌ipaH基因、沙门菌ipaB基因及霍乱弧菌EPSM基因设计特异性PCR引物,加热煮沸法制备DNA模板,进行PCR扩增及琼脂糖电泳检测.结果 应用所建立的多重PCR方法能分别或同时快速、特异地检测出志贺菌606bp、沙门菌314bp和霍乱弧菌482bp的目的基因.结论 初步建立了灵敏、特异的一步法检测志贺菌、沙门菌和霍乱弧菌的多重PCR体系,可用于高危腹泻致病菌的早期快速诊断.     

前列腺癌特异DD3基因实时荧光定量PCR检测方法建立及初步应用

目的：建立实时荧光定量PCR检测特异DD3基因方法,探讨其在前列腺癌早期诊断中的应用价值．方法：根据Genebank中的DD3 mRNA全序列,设计DD3基因的特异引物和探针,构建用于制备DD3基因检测的定量标准品的克隆载体;建立DD3基因的实时荧光定量方法,分别用于前列腺癌患者全血、尿液、前列腺液标本的检测．结果：经稳定性、特异性、重复性和敏感性实验评价,DD3基因实时荧光定量PCR方法的最低检测限为1．64×10^3拷贝／L,线性范围为1．64×10^3～1．64×10^15拷贝／L．对临床收集的19份前列腺癌患者,20份非前列腺癌患者、30份健康者的全血、尿液及前列腺液标本进行检测．19份前列腺癌患者标本中阳性率分别为100％（全血）、80％（尿液）、100％（前列腺液）;20份非前列腺癌患者标本中只有1份前列腺液出现低拷贝值（1×10^5拷贝／L）;30份健康者标本均为阴性．在全血、尿液、前列腺液标本中,前列腺癌患者DD3 mRNA含量明显高于非前列腺癌患者和健康者（P〈0．05）．结论：DD3基因是一种用于前列腺癌早期诊断的特异性指标,可用于生物体液中少量癌细胞的检测,在前列腺癌早期诊断、微转移诊断、预后判断、指导治疗等方面均具有潜在的应用价值．     

光量子治疗肾综合征出血热心肌酶及出血时间的观察

我院于1994年～1997年应用异体新鲜同型血液充氧紫外光照射(光量子),治疗32例肾综合征出血热(HFRS),同时测定出血时间加以对比,现将结果报告如下: 1 临床资料 1.1 一般资料 32例患者来源于凤台县医院传染科住院病人,诊断标准均符合1990年全国流行性出血热     

杀菌/通透性增加蛋白的细胞定位

目的 确定人体能产生杀菌/通透性增加蛋白（bactericidal/permeability-increasing protein,BPI)的细胞群体,为研究BPI在细胞内的定位奠定基础。方法 分离人外周血获得嗜中性多形核粒细胞（polymorphonuclear neutrophils,PMN）和单个核细胞,PMN,HL-60及单个核细胞分别进行RNA提取,逆转录PCR反应扩增BPI基因片段和免疫荧光法检测。结果 逆转录PCR在PMN和HL-60细胞中扩增出BPI基因片段,活细胞免疫荧光染色观察到PMN和HL-60能够与抗BPI的单抗所结合而呈阳性。结论 BPI是中性粒系细胞的特异性产物。     

2018—2020年多中心多重耐药肠杆菌的流行病学特征及耐药性分析

摘要：目的 分析多中心多重耐药肠杆菌(multidrug-resistant Enterobacteriaceae，MDRE)的分布和耐药特征，为医院防 控及抗菌药物合理应用提供依据。方法 收集2018—2020年9省11家三级医院肠杆菌目细菌，按统一方案和标准进行菌株 鉴定和体外药物敏感性试验，药敏结果参照2020版CLSI标准判读，并用WHONET 5.6软件统计分析。结果 11家医院共检 出MDRE 41351株，其中产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌(ESBLs+Eco)22390(54.14%)株，产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌 (ESBLs+Kpn)7574(18.32%)株，耐碳青霉烯类肠杆菌(CRE)6140(14.85%)株，其他MDRE 5247(12.69%)株。感染人群以60岁以 上老年人最多(50.96%)，检出率最高的科室是重症监护室(18.02%)；尿液检出ESBLs+Eco 9712(23.49%)株；痰检出ESBLs+Kpn 3837(9.28%)株和CRE 3225(7.80%)株；血样本检出ESBLs+Eco 2748(6.65%)株。2018—2020年ESBLs+Eco和ESBLs+Kpn未出现明 显上升趋势。CRE变化趋于缓慢上升，且在不同区域分布差异较大，航空总医院(45.38%)CRE占比显著高于宁夏医科大学总医院 (6.23%)、广东省中医院(7.73%)和吉林大学第一医院(5.53%)。ESBLs+Eco和ESBLs+Kpn对亚胺培南、美罗培南、头孢替坦、阿 米卡星、替加环素的耐药率低于5%；CRE对临床常用抗菌药物高度耐药，对替加环素(12.25%)和黏菌素(4.58%)耐药率较低。结 论 MDRE感染分布广泛，耐药形势严峻，掌握流行及耐药特征对MDRE防控及合理使用抗菌药物有重要意义。