鲍曼不动杆菌的产酶现状及抗菌药物体外联合抗菌活性研究

目的 了解鲍曼不动杆菌产酶现状与耐药性以及抗菌药物体外联合对其的抗菌活性，为临床治疗鲍曼不动杆菌感染合理用药提供实验依据。方法常规培养分离细菌，并以VITEK-2全自动微生物鉴定仪鉴定；药敏试验采用KB纸片法，最低抑菌浓度（MIC）测定采用琼脂平板倍比稀释法，按美国临床实验室标准化研究所标准进行。结果96株鲍曼不动杆菌中产金属伊内酰胺酶（MBLs）菌株占94．79％（91株）；产AmpC酶菌株占36．46％（35株），产质粒型AmpC酶菌株占35．42％（34株），产诱导型AmpC酶菌株占26．04％（25株）。多粘菌素B对产MBI。S、AmpC酶鲍曼不动杆菌的抑菌率分别为85．71％、88．57％；哌拉西林／他唑巴坦联合阿米卡星对产MBLs及产AmpC酶鲍曼不动杆菌的协同作用分别为51．65％与41．67％。结论鲍曼不动杆菌产酶率高，多种酶并存，耐药机制复杂。临床对产酶鲍曼不动杆菌感染的治疗，应谨慎选择碳青霉烯类药物，建议选用含酶抑制剂复合药物（如哌拉西林／他唑巴坦或头孢哌酮／舒巴坦）联合阿米卡星或多粘菌素B治疗。     

HER2基因沉默抑制人胃癌细胞SGC-7901的生长和侵袭

目的：探讨针对HER2基因的RNA干涉对人胃癌细胞生长和侵袭的影响。方法：构建了针对癌基因HER2的siRNA表达载体,分别命名为pcDNA3-sihe1和pcDNA3-sihe2,将构建的干涉载体与对照载体转染胃癌SGC-7901细胞,通过间接免疫荧光实验确定干涉效果;以软琼脂集落形成实验检测干涉后细胞的集落形成能力,以流式细胞术检测细胞在悬浮培养条件下的凋亡情况;并以Boyden chamber法检测转染后细胞的侵袭能力。结果：成功构建针对癌基因HER2的siRNA表达载体,siRNA表达载体转染SGC-7901细胞后HER2表达水平明显降低,证实siRNA成功抑制HER2蛋白的表达。HER2低表达的细胞株集落形成能力降低,流式细胞术检测发现HER2下调可引起胃癌细胞的凋亡,Boydenchamber实验表明针对HER2的RNA干涉可抑制胃癌细胞SGC-7901的侵袭能力。结论：RNA干涉有效地抑制了HER2分子的表达,进而影响SGC-7901细胞的生长和侵袭,本实验为进一步研究HER2分子与肿瘤细胞生长和转移的关系奠定了基础。     

凋亡抑制蛋白Survivin在前列腺癌细胞系中的表达

目的：研究凋亡抑制蛋白survivin在前列腺癌细胞系PC-3、PC-3M、DU145、LNCaP和22RV1中的表达水平.方法：应用免疫细胞化学技术,免疫印迹技术及RT-PCR技术检测5种前列腺癌细胞系中凋亡抑制蛋白survivin的表达.结果：免疫细胞化学染色结果显示,各前列腺癌细胞系survivin阳性细胞百分率,PC-3为23%,DU145为18%,LNCaP为15%,22RV1、PC-3M分别为11%和12%.免疫细胞化学染色阳性分值,PC-3为49.42＋4.71,PC-3M为28.45＋6.82,DU145为34.27＋6.08,LNCaP为34.09＋5.22,22RV1为31.66＋7.13.与其他细胞系相比以PC-3细胞系中survivin的表达量最高（F=22.84,P＜0.01）.Westernblot结果显示,PC-3、LNCaP、DU145细胞系中的survivin蛋白总量相对较高,而22RV1、PC-3M中的survivin蛋白总量相对较低,RT-PCR结果显示,PC-3、LNCaP细胞中的survivinmRNA水平相对较高.结论：5种前列腺癌细胞系中均有survivin的表达但表达水平略有差别.研究前列腺癌细胞系中凋亡抑制蛋白survivin的表达对研究前列腺癌的发生、抗药性机制及新药物靶位的筛选具有重要意义.     

用RNAi沉默survivin基因表达对前列腺癌细胞系PC3的影响

目的：运用RNA干扰（RNA interference，RNAi）技术阻断前列腺癌细胞系PC3中survivin基因的表达，并研究survivin基因沉默后对PC3细胞产生的影响。方法：用真核转录载体pSilencer^TM3．1-H1 neo构建针对survivin基因的重组真核转录载体pSilencer3．1-SVVl、pSilencer3．1-SVV2和pSilencer3．1-SVV3，并用脂质体法转染前列腺癌细胞系PC3，通过RT—PCR、蛋白印迹实验检测survivin的表达变化，并用流式细胞术、MTT法检测转染后PC3细胞的凋亡、细胞周期、细胞生长速度、对顺铂的敏感性等方面的变化。结果：重组载体pSilencer3．1-SVV2和pSilencer3．1-SVV3有效地阻断了PC3细胞中survivin基因在mRNA和蛋白水平上的表达（P〈0．01）。重组载体转染PC3细胞后，与对照组相比，细胞的凋亡增加了10％～15％；细胞生长速度明显变慢，其细胞数在84h时与对照组相比减少约30％；G1期细胞增加了10％。G2期和S期细胞减少了5％以上。加入顺铂后，pSilencer3．1-SVV2、pSilencer3．1-SVV3重组质粒转染的PC3细胞的存活数下降了35％～45％，细胞凋亡则增加了10％-14％。结论：初步证明了survivin基因在前列腺癌细胞分化增殖、抗凋亡等方面所扮演的重要角色，为进一步阐明survivin基因与前列腺癌的关系以及以survivin基因为靶点的前列腺癌基因治疗研究奠定了基础。     

刘沈林教授“两期”论治胃癌经验

胃癌是我国高发的消化道恶性肿瘤之一。全国名中医刘沈林教授提出胃癌治疗当以其临床、病理分期为依据,根据中医治疗目的的不同,分为可切除胃癌术后防治复发转移和晚期不可切除带瘤生存的“两期”治疗理念。在“两期”理念指导下,刘教授遣方用药注重辨证与辨病相结合、扶正与祛邪相平衡。本文总结了刘沈林教授对胃癌“两期”论治的学术经验,并附医案2则加以佐证,为胃癌的中医临证治疗提供参考与思路。     

纤溶酶原激活物抑制剂-1(4G/5G)基因多态性与深静脉血栓事件的风险概率

目的分析我国西北地区纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)(4G/5G)基因在不同人群中的分布情况,以及不同基因型患者血栓事件的发生率,为携带PAI-1(4G/5G)基因4G型的手术患者提供数据支持和用药指导。方法收集1 494例行基因位点检测人群血液样本,使用荧光探针原位杂交技术检测PAI-1(4G/5G)基因位点,分析我国西北地区PAI-1(4G/5G)基因在体检健康者、剖腹产患者、烧伤患者、心脑血管疾病患者之间4G基因型的差异性。结果 336例体检健康者中5G5G(野生型)78例(23.21%),4G5G(杂合突变型)152例(45.24%),4G4G(纯合突变型)106例(31.55%)。401例剖腹产患者中5G5G(野生型)60例(14.96%),4G5G(杂合突变型)195例(48.63%),4G4G(纯合突变型)146例(36.41%)。603例烧伤患者中5G5G(野生型)100例(16.58%),4G5G(杂合突变型)295例(48.93%),4G4G(纯合突变型)208例(34.49%)。154例心脑血管疾病患者中5G5G(野生型)21例(13.64%),4G5G(杂合突变型)81例(52.59%),4G4G(纯合突变型)52例(33.77%)。剖腹产患者、烧伤患者、心脑血管疾病患者PAI-1(4G/5G)基因4G型携带率与体检健康人群间的差异均有统计学意义(P0.05)。追踪观察200例烧伤手术患者,患病后2个月内有139例(69.5%)发生深静脉血栓事件,4G4G基因型血栓事件为86.49%(64/74),4G5G基因型血栓事件为65.00%(52/82),5G5G基因型血栓事件为50.00%(23/46),不同基因型深静脉血栓事件发生率的差异有统计学意义(P0.01)。结论通过分析PAI-1(4G/5G)基因在不同人群中的分布以及发生血栓事件的发生率,可预防或降低手术患者发生静脉血栓、脑卒中等的风险。     

KDR siRNA表达载体的构建和鉴定

目的: 构建针对血管内皮生长因子受体Ⅱ(VEGFR2),又称激酶功能区受体(KDR)的pSilencerTM3.1 siRNA(small interfering RNA)表达载体,并在前列腺癌细胞PC3中观察其干扰效果. 方法: 设计针对KDR基因编码区的寡核苷酸链,体外退火后克隆入经BamH Ⅰ, HindⅢ双酶切线性化的干扰载体pSilencerTM3.1-H1 neo中,对重组质粒进行酶切分析和DNA系列测定. 以脂质体法将pSilencerTM3.1-H1 neo空载体和3个(pSilencer3.1-KDR1, pSilencer3.1-KDR2和pSilencer3.1-KDR3)重组质粒分别导人PC3前列腺癌细胞系. 72 h后用RT-PCR和Western blotting技术检测各实验组前列腺癌细胞内KDR mRNA及蛋白水平的表达情况. 结果: 经酶切鉴定及DNA测序,重组质粒中已插入了目的基因片断. 转染KDR-siRNA的前列腺癌细胞,72 h后,而以pSilencer3.1-KDR3的抑制KDR mRNA及蛋白表达效果最为有效,其抑制率约为55%. 结论: 成功构建了针对KDR的RNA干扰表达载体pSilencer3.1-KDR1, pSilencer3.1-KDR2和pSilencer3.1-KDR3, pSilencer3.1-KDR3能有效抑制KDR在前列腺癌细胞中表达,为将其进一步应用于前列腺癌的治疗研究奠定了基础.     

F12基因复合变异导致的遗传性凝血因子Ⅻ缺陷症一个家系的分析

目的对1个遗传性凝血因子Ⅻ(FⅫ)缺陷症家系进行临床表型及基因变异分析。方法以2021年12月24日空军军医大学第一附属医院检验科发现的1个FⅫ缺陷症家系作为研究对象。用凝固法检测活化部分凝血活酶时间(APTT)与凝血因子Ⅻ的活性(FⅫ:C), 用ELISA法检测FⅫ抗原(FⅫ:Ag)。提取基因组DNA, 用Sanger法测定F12基因的所有外显子及其侧翼序列。用ClustalX-2.1-win、PROVEAN及Swiss-Pdb Viewer软件分析变异位点氨基酸的保守性、变异的有害性以及对蛋白质结构的影响。结果先证者APTT延长至70.2 s, FⅫ:C和FⅫ:Ag分别降低至12%和13%。基因测序发现先证者F12基因第5和13外显子分别存在c.346G>A(p.Gly97Ser)和c.1583C>A(p.Ser509Tyr)杂合错义变异;其父亲和姐姐均携带c.346G>A(p.Gly97Ser)杂合变异, 母亲和哥哥均携带c.1583C>A(p.Ser509Tyr)杂合变异。结论 c.346G>A(p.Gly97Ser)和c.1583C>A(p...     

重组和天然HBHA蛋白制备及其活性研究

目的 制备天然和重组HBHA蛋白,并比较其诱导产生的抗体对其聚集BCG活性的抑制效应.方法 将7H9液体培养基中的BCG培养至稳定生长期,用CL-6B层析柱分离纯化HBHA蛋白(nHBHA).同时,克隆HBHA基因片段,表达于大肠杆菌BL-21中,经亲和层析法纯化蛋白,并以此免疫新西兰兔制备多克隆抗体.在BCG的液体培养基中分别加入不同浓度的HBHA蛋白,观察菌体的聚集情况.同时,用抗HBHA抗体与HBHA蛋白孵育后,加入BCG培养基中,观察菌体聚集情况.结果 获得天然HBHA蛋白纯度为99%,浓度为1.016 mg/ml.重组蛋白表达量约占菌体蛋白总量的36%,纯化得到纯度为97.1%,浓度为10.98 mg/ml的重组HBHA蛋白.所得天然和重组蛋白均有诱导BCG聚集的作用,当nHBHA浓度为0.2μg/ml时BCG出现少量聚集,而rHBHA浓度达到2μg/ml时BCG才出现聚集.并且此聚集现象均可被多克隆抗体抑制.结论 成功获得天然HBHA和重组HBHA蛋白;证实了两者均具有促进BCG聚集的功能,并可被由重组HBHA诱导产生的多克隆抗体所抑制.从而为进一步研究HBHA的临床诊断和疫苗价值提供了实验依据.     

多黏菌素B与头孢哌酮-舒巴坦、哌拉西林-他唑巴坦联用对鲍曼不动杆菌的体外抗菌活性

近年来鲍曼不动杆菌（Acinetobaterbaumannii,ABA）感染已成为医院感染的重要病原菌,由于其常表现为多重耐药,所以给临床抗感染治疗带来了许多困难。为了解ABA的耐药特点及流行分布情况,指导临床采取有效治疗措施,我们对西京医院住院感染患者分离获得的75株ABA进行多黏菌素B、头孢哌酮-舒巴坦、哌拉西林-他唑巴坦及其联合应用的体外抗菌活性检测。