脓毒症状态下机体免疫抑制发生机制

脓毒症是机体针对病原体感染而产生的一种复杂的全身炎症反应状态。机体发生脓毒症时,会同时存在促炎反应和抗炎反应两种状态,它们之间的相互转换和相互制约决定了疾病的发展程度及预后。在传统脓毒症发病机制的基础之上,免疫细胞功能紊乱的机制越来越受到人们的重视。单核细胞、T细胞在脓毒症状态下会发生数量的增减和功能的改变,细胞表面及内部相关信号通路分子的表达水平也会随病情的发展而变化,总体表现出免疫抑制状态。本文对脓毒症状态下的机体免疫抑制机制进行系统综述,为更好地诊断和治疗脓毒症提供理论依据。     

双荧光蛋白报告基因分析系统在微小RNA研究中的应用

目的：建立双荧光蛋白报告基因分析系统，并用来验证微小RNA的靶基因。方法：选取表达绿色荧光蛋白的质粒pcDNA3／EGFP，将待验证微小RNA靶基因的一段特异性序列插入该质粒中，并与表达红色荧光蛋白质粒pDsRed2-N1共同转染细胞，转染后的细胞和提取的蛋白样品，分别用荧光显微镜和荧光分光光度计进行定性和定量检测。结果：通过对一特定小RNA（miR-27a）的可能靶基因prohibitin进行验证，最终确定prohibitin是miR-27a的靶基因。结论：双荧光蛋白报告基因分析系统是一种验证微小RNA靶基因的可靠方法。     

乳腺导管原位癌诊断和治疗的研究进展

近年国内外对乳腺导管原位癌（ductal carcinoma in situ,DCIS)的研究进展较快，对有关其诊断和治疗的新观点进行了综述。     

小鼠肝癌微波消融对宿主Th2/Th1免疫应答的影响

目的探讨小鼠肝癌微波消融(microwaveablation,MA)对宿主Th2/Th1免疫应答的影响。方法建立C57BL/6J小鼠Hepa1-6细胞移植肝癌模型,对肿瘤微波消融或手术切除,取正常、荷瘤、手术后及MA后四组小鼠,每组6只,用ELISA法检测各组周围血血浆Th1(IL-12I、FN-γ)和Th2(IL-4I、L-10)细胞因子水平(pg/ml)。结果荷瘤组比正常组,细胞因子IL-10增加,IL-4I、L-12和IFN-γ下降(均P>0.05)。MA组较荷瘤组,IL-12、IFN-γ显著上升(均P<0.01),IL-4明显降低(P<0.05),IL-10有所下降(P>0.05)。手术组比荷瘤组,IL-12I、FN-γ上升,IL-4I、L-10下降(均P>0.05)。MA组比手术组,IL-12明显上升(P<0.05),IFN-γ升高,IL-4和IL-10下降(均P>0.05)。结论MA原位灭活小鼠肝癌可促进宿主免疫应答的Th2/Th1偏移,并且MA较手术切除具有较强的免疫刺激效应。     

人参皂苷Rg1对成年大鼠脑缺血海马区神经干细胞的影响

目的:观察人参皂苷Rg1对成年大鼠脑缺血后海马区神经干细胞增殖分化的影响,探讨其促进神经细胞再生的作用.方法:将60只Wistar大鼠随机分为假手术组、单纯缺血组及人参皂苷Rg1治疗组.用Longa线栓法制作大鼠脑中动脉闭塞模型.通过腹腔注射5-溴脱氧尿苷(BrdU)的方法标记神经干细胞,用免疫单标及双标免疫荧光技术观察人参皂苷Rg1对局灶性脑缺血后海马区BrdU,BrdU/β-Ⅲ型微管蛋白(Tuj-1)和BrdU/波形蛋白(Vimentin)免疫活性的影响,并计数作定量分析.结果:免疫组织化学染色显示脑缺血后海马区存在BrdU阳性细胞.单纯缺血组7 d(28.4±3.0)时,与同组1 d(12.7±1.2),3 d(20.3±2.7)相比较,差异具有统计学意义(P<0.01),且缺血7 d后阳性细胞达高峰,14 d(17.2±1.2)时可见BrdU阳性细胞急剧减少.应用人皂苷Rg1后BrdU阳性细胞数明显增多,人参皂苷Rg1治疗组1 d(15.1±1.5),3 d(27.2±3.3),7 d(37.1±4.2),14 d(23.6±2.7)与同时间点单纯缺血组相比差异均具有统计学意义(P<0.01);人参皂苷Rg1治疗组BrdU/Tuj-1,BrdU/Vimentin阳性细胞数分别为(14.3±0.5),(15.1±0.5)个/视野,较单纯缺血组(7.2±0.3),(8.9±0.4)个/视野明显增多(P<0.01).结论:人参皂苷Rg1能诱导海马区神经干细胞增殖、分化,提示其具有促进神经神经细胞再生的作用.     

p38MAPK信号通路在内毒素性休克诱发急性肺损伤大鼠肺组织HO-1表达上调中的作用

目的 评价p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路在内毒素性休克诱发急性肺损伤大鼠肺组织血红素加氧酶-1(HO-1)表达上调中的作用.方法 雄性SD大鼠48只,8周龄,体重180～ 200g,采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=12):对照组(C组)、内毒素性休克组(LS组)、内毒素性休克+ p38MAPK特异性抑制剂SB203580组(LSS组)和SB203580组(SB组).C组和SB组股静脉注射生理盐水0.5 ml;LS和LSS组股静脉注射LPS 10 mg/kg(溶于0.5ml生理盐水)；2h内MAP下降至基础值的75％时,C组和IS组股静脉输注10％二甲基亚砜0.1ml；LSS组和SB组股静脉输注SB203580 5 μmol/kg(溶于0.1 ml 10％二甲基亚砜),输注速率0.01 ml/min.给予LPS或生理盐水后6h时采集动脉血样,进行血气分析,计算氧合指数(PaO2/FiO2)；然后处死大鼠取肺组织,光镜下观察病理学结果,并进行病理学损伤评分,计算肺含水率,测定SOD活性、MDA含量、HO-1 mRNA及其蛋白、p38MAPK蛋白和磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)蛋白的表达.结果 与C组比较,IS组和LSS组氧合指数和SOD活性降低,病理学损伤评分、肺含水率和MDA含量升高,肺组织HO-1 mRNA及其蛋白和p-p38MAPK蛋白的表达上调(P＜0.05),p38MAPK蛋白表达差异无统计学意义,SB组各指标差异无统计学意义(P＞0.05)；与LS组比较,LSS组氧合指数和SOD活性升高,病理学损伤评分、肺含水率和MDA含量降低,肺组织HO-1 mRNA及其蛋白表达上调,p-p38MAPK蛋白表达下调(P＜0.05),p38MAPK蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 抑制p38MAPK信号通路可导致内毒素性休克诱发急性肺损伤大鼠肺组织HO-1表达上调.     

机械加载可改善心肌梗死大鼠的心肌损伤

摘要：目的 探讨机械加载对心肌梗死大鼠心肌损伤的改善作用。方法 选用8周龄Wistar雄性大鼠30只,体 质量约200 g,按随机数字表法分为假手术对照组（Sham组）、心肌梗死组（MI组）和心肌梗死机械加载治疗组（MI+L 组）,每组10只,心肌梗死建模后1 d开始膝关节机械加载治疗2周。检测治疗后大鼠心电图Ⅱ导联ST段、心脏质量 指数（HMI）、左心室质量指数（LVMI）、心脏质量/胫骨长度,2,3,5－三苯基氯化四氮唑（TTC）染色检测左室舒张末内 径（LVEDD）和梗死范围;HE染色检测炎性细胞数;Masson染色检测胶原容积分数（CVF）;免疫组织化学染色检测核 因子（NF）-κB p65亚基、白细胞介素（IL）-6和基质金属蛋白酶（MMP）-9蛋白的表达。结果 与Sham组相比,心肌 梗死导致MI组心电图Ⅱ导联ST段抬高,HMI、LVMI、LVEDD、心脏质量/胫骨长度和梗死范围明显增加;机械加载治 疗后,MI+L组Ⅱ导联ST段抬高幅度下降,HMI、LVMI、LVEDD、心脏质量/胫骨长度和梗死范围较MI组明显降低（P＜ 0.05）。心脏组织学结果表明,心肌梗死导致炎性细胞数和CVF增加,通过加载治疗后,炎性细胞数和CVF明显改善 （P＜0.05）。免疫组化染色结果表明,心肌梗死导致大鼠心肌NF-κB p65、IL-6和MMP-9蛋白表达升高,机械加载能 够抑制3种蛋白的表达。相关性分析结果表明,NF-κB p65、IL-6和MMP-9三者之间表达呈正相关,三者与心室重构 指标（LVEDD、HMI、LVMI和心脏质量/胫骨长度）呈正相关。结论 机械加载可以明显改善心肌梗死大鼠心肌损伤, 该治疗作用可能与机械加载减轻心肌梗死后炎症反应和抑制心室重构有关。     

乳腺导管原位癌诊断和治疗的研究进展

近年国内外对乳腺导管原位癌 (ductalcarcinomainsitu ,DCIS)的研究进展较快 ,对有关其诊断和治疗的新观点进行了综述。     

三七总皂苷对脑损伤新生鼠海马神经干细胞钙离子和膜电位的调节

背景：钙离子参与神经信号的传递和神经递质的释放，脑海马神经干细胞的增殖过程必然和钙离子关系紧密，同时这一过程也反应在膜电位的变化上。目的：探讨中药三七总皂苷对脑损伤新生鼠海马神经干细胞Ca2＋和膜电位的影响。设计、时间及地点：离子水平，体外细胞学电生理观察，于2007—03／05在北京中医药大学细胞培养室完成。材料：清洁级新生24h内Wistar鼠16只。三七总皂苷为内蒙古康源药业有限公司产品，批号ZZ-5802-内卫药准字（1999）1787号，规格350g／10L。钙离子荧光探针Fluo3-AM、亲脂性阴离子荧光探针DiBAC。（3）为Sigma产品。方法：取新生鼠脑海马组织，采用无血清培养法分离扩增神经干细胞。设立3组：正常组细胞加入含糖Earle氏液，并始终在正常气体条件下培养：模型组、用药组细胞采用糖氧剥离法体外模拟脑缺血再灌注损伤，即加入无糖Earle氏液，将培养板放入缺氧罐内模拟脑缺血状态。用药组在换液时及脑缺血4h后分别加入17．5mg／L三七总皂苷1．75μg。细胞内钙离子和膜电位分别用Fluo3．AM、DiBAC4（3）荧光探针进行标记。主要观察指标：神经干细胞Ca2＋、膜电位荧光值的变化。结果：缺血再灌注后30min～1h，正常组神经干细胞内Ca2＋浓度呈上升趋势，至再灌注2h胞内Ca2＋浓度达到最高峰，再灌注3h胞内Ca2＋浓度开始降低；膜电位变化与Ca2＋浓度变化完全相反。与正常组比较，模型组再灌注后30min，1h，2h，3h神经干细胞内Ca2＋浓度均明显升高（P〈0．05～0．001），膜电位均明显下降（P〈0．001）：经三七总皂苷处理可抑制Ca2＋浓度升高（P〈0．05～0．01），并抑制膜电位下降（P〈0．05～0．001）。结论：防止细胞内钙超载和细胞膜电位降低可能是三七总皂苷保护损伤脑海马神经干细胞的作用机制之一。     

机械加载对高脂饮食诱导的肥胖和非酒精性脂肪肝的治疗作用

目的 探讨机械加载对高脂饮食诱导的肥胖和非酒精性脂肪肝的疗效。方法 选用6周龄的C57BL/6雌性小鼠30只,体质量约18 g,按随机数字表法分为正常对照组（NC组）、高脂饮食组（HF组）和高脂饮食机械加载治疗组（HF+L组）,每组10只,持续饮食诱导12周。高脂饮食6周后,HF+L组进行机械加载治疗6周。实验动物进行体成分分析,观测全身体脂含量的变化。收集肾周脂肪、子宫周脂肪、肠系膜脂肪、腹股沟脂肪和肝脏并称量湿质量。留取部分肝脏做组织形态学检测,油红O和HE染色分析观察肝脏的病理改变,部分肝脏用于Western blot检测内质网应激相关蛋白（eIF2α、p-eIF2α、ATF4）的表达。结果 与NC组相比,高脂饮食导致HF组体质量、体脂明显增加,机械加载治疗后,HF+L组体质量、体脂较HF组明显降低（P＜0.05）。肝脏组织学结果表明,高脂饮食导致一定程度的肝脏脂肪变性,通过治疗后,脂肪变性得到有效缓解（P＜0.05）。Western blot分析结果表明,高脂饮食导致小鼠肝脏eIF2α、p-eIF2α和ATF4蛋白表达升高,机械加载能够抑制肝脏p-eIF2α和ATF4蛋白的表达。结论 机械加载能够有效缓解高脂饮食导致的体质量、体脂增加及非酒精性脂肪肝,其治疗作用可能与肝脏内质网应激有关。