重组Bmi1基因的慢病毒的制备和鉴定

目的制备携带B细胞特异单克隆鼠白血病毒整合位点1基因（Bmi1基因）的慢病毒pSin-Bmi1,并在人胚胎干细胞H1中过表达Bmi1基因和BMI1蛋白。方法根据GeneBank提供的Bmi1基因序列,以H1来源的cDNA为模板扩增其cDNA序列,回收片段,Bmi1基因和pSin载体分别进行双酶切,连接后的质粒转化。经菌落PCR、双酶切鉴定及测序鉴定pSin-Bmi1阳性克隆。将阳性表达的pSin-Bmi1和包装质粒转染到293T细胞中制备病毒液。将包装好的病毒感染人胚胎干细胞H1细胞系并用嘌呤霉素筛选稳定表达BMI1的细胞株。通过Western blot验证H1细胞中外源性BMI1蛋白表达。结果经菌落PCR、限制性核酸内切酶酶切和测序证实目的基因Bmi1序列正确。Western blot检测发现感染重组Bmi1的慢病毒的细胞中有外源性BMI1蛋白的高表达,而未感染重组Bmi1的慢病毒的对照组未检测到BMI1表达。结论成功制备了携带Bmi1基因的慢病毒,并得到了稳定高表达外源Bmi1的细胞株。     

白血病大剂量化疗后粒细胞缺乏的护理

目的探讨白血病化疗后粒细胞缺乏期间的护理措施。方法回顾性分析2008年1月至2012年12月在我院就诊的89例白血病患者化疗后粒细胞缺乏期间的护理工作及成效。结果经积极治疗与护理,7～35天后有85例患者粒细胞恢复至正常范围,2例自动出院,2例死于颅内出血。结论在白血病化疗后粒细胞缺乏期间,做好对患者的护理工作,可加快粒细胞的恢复．使患者顺利度过粒细胞缺乏期。     

非亲缘供者异基因造血干细胞移植治疗恶性血液病15例

背景：异基因造血干细胞移植是治愈恶性血液病的主要方法,但中国多为单子女家庭,因此探索非亲缘供者异基因造血干细胞移植的治疗效果及并发症防治具有重要的意义。目的：观察非亲缘供者异基因造血干细胞移植治疗15例恶性血液病的疗效和相关并发症。方法：15例恶性血液病患者接受非血缘关系异基因造血干细胞移植治疗。所有患者均采用经典或改良的马利兰联合环磷酰胺预处理方案。4例采用环孢素A＋短程甲氨蝶呤＋麦考酚吗乙酯预防移植物抗宿主病,另11例患者同时加用抗胸腺细胞球蛋白。输注供者有核细胞中位数为6.3×108/kg,CD34＋细胞中位数为3.1×10^6/kg。结果与结论：除1例移植后早期死亡不能评估外,其余14例经检测均证实植活。发生急性移植物抗宿主病Ⅰ度5例,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ度各1例;慢性局限性移植物抗宿主病8例。发生肺部真菌感染5例,巨细胞病毒病毒血症3例,带状疱疹病毒感染2例,出血性膀胱炎6例。15例患者中目前无病存活10例,生存期为5个月~11年。结果提示非血缘关系异基因造血干细胞移植是安全且可行的,治疗恶性血液病疗效良好,降低移植相关并发症已成为非血缘关系异基因造血干细胞移植需解决的首要问题。     

罗格列酮诱导白血病NB4细胞凋亡的作用及机制探讨

目的:探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂罗格列酮(rosiglitazone,RGZ)时白血病NB4细胞的诱导凋亡作用及其作用机制.方法:以不同浓度的RGZ(20-80 μmol/L)作用于体外培养的NB4细胞0、24、48及72 h,应用RT-PCR法检测PPARγ的表达水平,MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率.应用Western blot检测60 μmol/L的RGZ作用不同时间后凋亡抑制蛋白XIAP的表达水平,同时检测不同浓度药物作用不同时间后Caspase-3活性的变化.结果:40μmol/L以上的RGZ可显著抑制细胞的生长及诱导细胞发生凋亡,呈现出明显的量-效与时-效关系.RGZ在诱导细胞凋亡的同时.PPARγmRNA的表达水平逐渐升高.而凋亡抑制蛋白XIAP的表达水平显著下降.Western blot结果还显示Caspase-3被活化出现20 kD亚单位片段.结论:RGZ可以通过PPARγ信号途径抑制NB4细胞的生长并诱导细胞发生凋亡,下调凋亡抑制蛋白XIAP的表达水平以及激活Casapse-3可能是RGZ诱导NB4细胞发生凋亡的重要作用机制之一.     

罗格列酮对U937细胞生长抑制作用及其机制的探讨

目的:探讨过氧化物酶体增殖因子活化受体γ(PPARγ)配体罗格列酮(ROS)对人急性单核细胞白血病U937细胞生长抑制作用及其作用机制.方法:体外培养人急性单核细胞白血病U937细胞,应用不同浓度的罗格列酮处理人急性单核细胞白血病U937细胞,采用MTT比色法测定药物对细胞增殖的抑制作用;用流式细胞术、AnnexinV/PI双染色法现察细胞凋亡率;并分析细胞周期改变;RT-PCR法分析PPARγ/mRNA表达.结果:ROS浓度>80#mol/L时,对U937细胞产生明显的增殖抑制作用,P<0.05;AnrlexinV/PI双染色法观察细胞凋亡率>50%,并将细胞周期阻滞在G1期,P<0.05;RT-PCR检测U937细胞中PPAR7 mRNA表达无明显变化.结论:ROS浓度>80 μmol/L时,对U937细胞产生明显的增殖抑制作用及诱导凋亡作用,同时将细胞周期阻滞在G1期,但是PPARγ mRNA表达无明显变化,推测可能与激活PPARγ表迭无明显相关,可能存在另外的信号转导途径.     

pLXSN-bcr/abl质粒载体的构建及其逆转录病毒的生成

目的:构建bcr/abl融合基因的逆转录病毒载体,通过细胞包装获取高滴度含bcr/abl基因的逆转录病毒.方法:RT-PCR法克隆K562细胞bcr/abl基因断裂点DNA片段,构建pLXSN-bcr/abl表达载体;阳离子脂质体法将重组体转染EcoPack2TM-293包装细胞,序列测定鉴定病毒并测定病毒滴度.结果:成功构建pLXSN-bcr/abl重组体,序列测定与已知相应bcr/abl融合基因序列相同;脂质体法将重组体转染293包装细胞获得携带bcr/abl基因病毒,测滴度为6×105 cfu/mL.结论:成功构建pLXSN-bcr/abl表达载体,并获得高滴度含bcr/abl融合基因的逆转录病毒.     

格拉司琼透皮贴片预防抗肿瘤治疗所致恶心呕吐的前瞻性、多中心的真实世界研究报告

目的 探讨采用真实世界研究模式,在中国癌症患者中评价格拉司琼透皮贴片(granisetron transdermal delivery system,GTDS)预防抗肿瘤治疗所致恶心呕吐(antitumor drugs-induced nausea and vomiting,DINV)的效果、安全性和治疗价值.方法 本...     

曲格列酮对白血病NB4细胞的增殖抑制作用及其作用机制

目的:探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂曲格列酮(troglitazone,TGZ)对白血病NB4细胞的增殖抑制作用及其作用机制。方法:以不同浓度的TGZ(0～80μmol/L)作用于体外培养的NB4细胞0、24、48、72h,应用MTT法检测细胞生长抑制率,Hoechst33258染色法检测细胞凋亡,琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡时的DNA梯状条带。用免疫印迹法(Western Blot)检测Caspase-3及其裂解底物多聚(ADP-核糖)聚合酶PARP[(poly(ADP-ribose)polymerase)]表达水平的变化,并对凋亡调节蛋白Bax及Bcl-2的表达水平进行检测。结果:20μmol/L以上的TGZ可显著抑制细胞的生长,在Hoechst染色后可见典型的细胞凋亡现象,并呈现出明显的量-效与时-效关系,药物作用72h后在琼脂糖凝胶电泳上可见明显的DNA梯状条带。WesternBlot检测结果表明,Caspase-3被活化出现20000的亚单位,同时PARP被裂解出现89000的亚单位片段。药物作用48h后凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达水平明显降低,而促凋亡蛋白Bax的表达水平显著升...     

去白细胞输血治疗对恶性血液病化疗患者细胞免疫功能的影响

目的:观察去白细胞输血对恶性血液病化疗患者细胞免疫功能的影响.方法:将60例化疗期间需要接受输血的恶性血液病化疗患者随机分为两组:观察组30例,接受去白细胞输血;对照组30例接受常规输血疗法.对两组患者输血前后的T细胞亚群、NK细胞活性进行检测并进行相应的统计学处理.结果:两组患者的细胞免疫功能在输血治疗前无显著性差异,治疗后观察组患者的细胞免疫功能(T4、T4/T8、NK细胞活性)均明显高于对照组(P<0.05或P<0.01).结论:与常规的输血方法相比,去白细胞输血可显著改善机体的细胞免疫功能.